急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-選擇素水平的變化

李蘇亮， 葉　蕓

(西安醫學院第一附屬醫院中心實驗室，西安　710077; *通訊作者，E-mail: yeyun236@163.com)

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急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-選擇素水平的變化

李蘇亮， 葉蕓*

(西安醫學院第一附屬醫院中心實驗室，西安710077;*通訊作者，E-mail: yeyun236@163.com)

摘要：目的探討急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-選擇素(E-selectin)水平的變化及其在兒童肺炎支原體感染中的價值。方法采用ELISA法測定急性期及恢復期支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-selectin水平；采用熒光定量PCR法檢測肺泡灌洗液肺炎支原體(M.pneumoniae,MP)DNA拷貝數并進行相關性分析。結果急性期患兒肺泡灌洗液E-selectin明顯高于恢復期，差異有統計學意義(P<0.05)；急性期患兒肺泡灌洗液E-selectin與MP-DNA拷貝數呈明顯正相關(rs=0.818，P<0.01)。結論急性期肺炎支原體感染患兒肺泡灌洗液E-selectin水平明顯增高，在肺炎支原體肺炎發病、發展、預后中有重要的臨床價值。

關鍵詞：肺炎支原體；肺泡灌洗液；E-選擇素

肺炎支原體是兒童呼吸道感染的常見病原體，其導致的肺炎及肺外并發癥對兒童健康危害嚴重[1,2]。近年來的研究顯示，黏附分子(adhesion molecules，AMs)在兒童肺炎支原體(MP)肺炎的發生、發展中起重要作用。E-selectin是AMs中選擇素超家族成員之一，主要由毛細血管和后微靜脈的內皮細胞分泌,炎性刺激內皮細胞后，可激活E選擇素基因快速而短暫表達，進一步加重炎癥反應[3]。本研究旨在通過探討急性期與恢復期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-選擇素水平的變化，評價其在MP感染診斷中的應用價值，對判斷病情和臨床治療提供指導。

1材料與方法

1.1標本來源

選取我院兒科2013-12～2015-06住院并確診為肺炎支原體肺炎，且臨床資料完整的患兒共108例，其中急性期患兒58例(男28例，女30例)，年齡3-12歲，平均年齡為(5.5±3.2)歲；恢復期患兒50例(男24例，女26例)，年齡3-12歲，平均年齡為(5.8±2.6)歲。所有入選患兒均符合《諸福棠實用兒科學》[4]。急性期的判定標準為發病10 d內，有肺炎支原體肺炎的癥狀和體征且經抗生素治療無效，未經激素和免疫抑制劑治療。恢復期判定標準為退熱兩周以上，所有臨床癥狀和體征消失。本項研究得到了院倫理委員會的批準，并獲得了所有研究對象或患者親屬的同意。

1.2支氣管肺泡灌洗的采集

所有患兒均采用局部麻醉。術前禁食、禁飲,術前肌注阿托品和安定。術前用利多卡因泵霧化作局部表面麻醉。纖支鏡進入聲門后,氣管內滴入利多卡因進行局部麻醉。同時給鼻導管吸氧,心電、呼吸和經皮血氧飽和度監測。使用Olympus纖維支氣管鏡BF-P30插入病變管嵌入管腔內(灌洗部位多選擇病變嚴重肺段，少數病變范圍比較廣泛者則選右肺中葉，小嬰兒選擇右下葉)，以37 ℃生理鹽水(體重小于20 kg者，每次灌洗量1 ml/kg，體質量大于20 kg者，每次灌洗量20 ml)進行支氣管肺泡灌洗3次。隨即以負壓13.3-20 kPa(100-150 mmHg)進行抽吸以獲取灌洗液標本入滅菌痰液收集器。灌洗液全部分裝成1.5 ml于離心管中，12 000 r/min離心5 min，留取上清液用于E-selectin的測定，留管底沉淀作為DNA提取標本，并將處理后標本保存于-80 ℃冰箱。

1.3FQ-PCR測定MP-DNA拷貝數

采用中山大學達安基因股份有限公司提供熒光定量檢測試劑盒檢測MP-DNA拷貝數。所有操作均按照試劑盒說明書進行。

1.4統計學分析

采用SPSSl8.0軟件進行統計學分析。非參數資料用Personχ2檢驗進行分析；MP-DNA拷貝數取對數后，用平均值及標準差表示；E-selectin呈偏態分布，用中位數(四分位數)表示，采用Mann-Whitney U檢驗做比較。E-selectin與MP-DNA拷貝數之間的關系采用Spearman相關分析；以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組一般資料比較

兩組患者的年齡、性別、體質量指數差異均無統計學意義(均P>0.05，見表1)。

表1兩組患者一般資料比較

Table 1Baseline data of acute and recovery phase patients

指標急性期恢復期統計值P性別0.0010.977 男2824 女3026年齡0.0710.965 <5歲1614 5-10歲2825 >10歲1411體質量指數0.0470.953 <15kg/m2108 15-18kg/m23632 >18kg/m21210

2.2兩組MP-DNA拷貝數檢測結果

FQ-PCR檢測結果表明,58例急性期支原體肺炎患者肺泡灌洗液結果均為陽性，陽性標本的拷貝數在3.70×104-4.90×107copies/ml之間，取對數后計算，平均5.63±0.87。恢復期患者拷貝數均為0，兩組結果差異有統計學意義(P<0.01)。

2.3兩組肺泡灌洗液E-selectin測定結果

急性期組肺泡灌洗液E-selectin結果為5.58 ng/ml(4.00-7.15 ng/ml)，恢復期組肺泡灌洗液E-selectin結果為1.12 ng/ml(0.43-2.78 ng/ml)。經非參數Mann-WhitneyU檢驗，兩組肺泡灌洗液E-selectin結果差異有統計學意義(Z=-4.584,P<0.01，見圖1)。

圖1　兩組患者E-selectin測定結果箱式圖Figure 1　The box figure of E-selectin in two groups

2.4急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液

E-selectin與MP-DNA拷貝數相關性結果顯示,急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-selectin水平與MP-DNA拷貝數密切相關(rs=0.818，P<0.01，見圖2)。

圖2　E-selectin與MP-DNA拷貝數相關性分析Figure 2　The correlation analysis between plasma E-selectin and MP-DNA copies

3討論

肺炎支原體(Mycoplasmapneumoniae,MP)是一種基因組很小、無細胞壁、具有多形性且自身不能合成膽固醇的原核生物[5]。黏附分子(adhesion molecules，AMs)是指由細胞產生、存在于細胞表面、介導細胞與細胞間或細胞與基質間相互接觸和結合的一類分子，在許多疾病的發生發展過程中起重要作用[6]。E-selectin是黏附分子中選擇素超家族成員之一，主要由毛細血管和后微靜脈的內皮細胞分泌。E-selectin存在于活化的血管內皮細胞表面。炎癥組織釋放的白細胞介素-1(IL-1)及腫瘤壞死因子(TNF)等細胞因子可活化脈管內皮細胞，刺激E-selectin的合成，并通過白細胞與內皮細胞的相互作用發揮重要作用[7]。炎癥過程中E-selectin參與細胞增殖功能的調控，與肺炎支原體肺炎的發生發展有關[8]。

有文獻報道，肺炎支原體患兒的肺泡灌洗液中，肺炎支原體DNA拷貝數越大臨床癥狀越重，且與疾病的病情及臨床分期有關[9]。本研究中FQ-PCR檢測結果表明58例急性期支原體肺炎患者肺泡灌洗液結果均為陽性，陽性標本的拷貝數在3.70×104-4.90×107copies/ml之間，取對數后，計算其平均值及標準差為5.63±0.87。恢復期患者拷貝數均為0，兩組結果差異有統計學意義(P<0.01)。急性期組和恢復期組間肺泡灌洗液E-selectin水平經非參數Mann-WhitneyU檢驗，差異有統計學意義(Z=-4.584,P<0.01)。急性期組肺泡灌洗液E-selectin水平升高可能與急性期感染血管內皮受損有關。MP數量越多,釋放的毒素越多,產生的毒力越強,炎癥反應越重,血管內皮細胞損傷程度就越重，因此Spearman相關性分析結果顯示急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-selectin水平與MP-DNA拷貝數密切相關(r=0.818，P<0.01)。該結果提示我們在臨床中對于急性支原體肺炎患者應當盡早使用大環內酯類藥物,抑制增殖。同時應重視氣道上皮細胞的修復,控制炎癥反應。

綜上所述，急性期肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液E-selectin水平顯著升高且與MP-DNA拷貝數密切相關，在兒童肺炎支原體肺炎發病、發展、預后中有重要的臨床價值。將血漿E-selectin結合其他臨床指標，可以用于臨床診斷急性期和恢復期支原體肺炎患者,也可作為判斷疾病嚴重程度和評價臨床療效的重要指標之一。

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Expression of E-selectin in bronchoalveolar fluid in children with acute pneumoniaMycoplasmapneumonia

LI Suliang，YE Yun*

(DepartmentofClinicalLaboratory，FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity，Xi’an710077，China;*Correspondingauthor，E-mail:yeyun236@163.com)

Abstract：ObjectiveTo explore the changes and application value of the E-selectin expression in children suffering from acute Mycoplasma pneumoniae(MP) infection.MethodsELISA was used to detect the level of E-selectin in bronchoalveolar fluid of acute and recovery phase patients with acute Mycoplasma pneumoniae infection. MP-DNA copies were detected by fluorescence quantitative PCR method and its correlation with acute Mycoplasma pneumoniae infection was analyzed.ResultsE-selectin expression was significantly higher in acute Mycoplasma pneumoniae infection patients than that in recovery phase patients(P<0.05). Correlation analysis showed that E-selectin expression was correlated with MP-DNA copies in acute phase patients(rs=0.818,P<0.01). ConclusionE-selectin is significantly increased in children with acute Mycoplasma pneumoniae infection, and can be important in the progression, development and prognosis of children with MP infection.

Key words:Mycoplasma pneumoniae;bronchoalveolar fluid;E-selectin

基金項目：西安醫學院第一附屬醫院科研基金資助項目(XYFY14-02)

作者簡介：李蘇亮，男，1973-10生，本科，副主任技師,E-mail:lisuliang01@163.com

收稿日期：2016-02-29

中圖分類號：R563.1

文獻標志碼：A

文章編號：1007-6611(2016)05-0447-03

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.05.011