泌乳素腺瘤中間質成纖維細胞激活蛋白的表達及其意義

韓宗利　齊　輝　尹　衛　杜艷麗.北京大學深圳醫院神經外科，廣東深圳　58036；2.深圳職業技術學院醫護學院，廣東深圳　58055

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泌乳素腺瘤中間質成纖維細胞激活蛋白的表達及其意義

韓宗利1齊輝1尹衛1杜艷麗2▲
1.北京大學深圳醫院神經外科，廣東深圳518036；2.深圳職業技術學院醫護學院，廣東深圳518055

［摘要］目的探討腫瘤間質活化的成纖維細胞激活蛋白在垂體泌乳素腺瘤組織中的表達及其臨床意義。方法采用2012年2月～2015年1月間我院60例泌乳素腺瘤的患者標本。根據術前影像資料和術中所見將其分為腫瘤侵襲組和腫瘤非侵襲組。采用免疫組化法檢測標本間質中FAP的表達，并用IPP7.0圖像分析軟件統一定量分析兩組標本免疫組化圖片的光密度值（OD值）。結果FAP在侵襲組表達率為87.5%（21/24），非侵襲組表達率為69.4%（25/36）。侵襲組與非侵襲組的表達強度OD值分別為（0.2282±0.0553）、（0.1592±0.0662），差異有統計學意義（P＜0.05）。結論成纖維細胞激活蛋白在侵襲性和非侵襲性泌乳素腺瘤中均有表達，但表達強度在兩組間有統計學意義，成纖維細胞激活蛋白可能作為鑒別泌乳素腺瘤的侵襲性的一個生物標志物。

［關鍵詞］成纖維細胞激活蛋白；腫瘤間質；垂體腺瘤；侵襲性

▲通訊作者

腫瘤的發生、發展與腫瘤環境中的間質細胞緊密相關，活化的間質細胞通過分泌細胞因子和基質蛋白酶等促使腫瘤的增殖、浸潤與轉移。腫瘤相關性成纖維細胞（tumor-associated fibro-blast，TAF）在腫瘤進展中發揮重大作用，其分泌的成纖維細胞激活蛋白（fibroblast activation protein，FAP）主要表達于上皮癌和惡性間葉細胞中［1，2］，在正常成人靜息的成纖維細胞中通常不表達，提示其是一個增生性成纖維細胞的表面標志物，在腫瘤發生、發展、侵襲中起重要作用［2，3］。近年來，FAP在腫瘤組織中的表達備受關注；但是在垂體瘤組織中的表達則鮮見報道。本研究主要通過檢測垂體泌乳素腺瘤組織中FAP的表達分析其與泌乳素腺瘤侵襲性的關系，旨在為泌乳素腺瘤預后判斷提供新的評價指標。現報道如下。

1　材料與方法

1.1材料來源

收集2012年2月～2015年1月間我院60例泌乳素腺瘤的患者標本。其中侵襲性24例，非侵襲性36例。侵襲組男16例，女8例，平均年齡（32±6）歲，泌乳素水平（862.63±111.73）ng/mL；非侵襲組男22例，女14例，平均年齡（40±8）歲，泌乳素水平（616.04± 90.52）ng/mL。

1.2分組標準

根據術前核磁共振增強相上結果作出初步診斷，再根據術中所見將垂體泌乳素腺瘤分為侵襲性和非侵襲性兩組。術前影像學分期主要參照Hardy-Wilosn［4］分級分期和Knosp［5］分級。術中見腫瘤明顯向鞍上池及兩側海綿竇侵襲的定為侵襲性腺瘤。

1.3FAP檢測

FAP檢測根據試劑盒說明進行。主要采用試劑：鼠抗人FAP單克隆抗體（德國Calbiochem公司）用于檢測成纖維細胞激活蛋白（FAP）一抗；即用型S-P免疫細胞化學染色超敏試劑盒（武漢博士德）為抗小鼠IgG（二抗），DAB顯色試劑盒（武漢博士德）行免疫組化顯色。染色黃色為陽性，同一條件下拍照待統一定量分析。

1.4統計學處理

所有免疫組化圖片經IPP（Image-Pro Plus version 7.0）軟件統一條件下測定其光密度OD（Optic Density Value）值；OD=IOD/Area，OD：平均光密度；IOD：累積光密度；Area：陽性區域面積。所有計量資料均以（±s）表示，組間差異采用t檢驗，統計分析采用SPSS13.0統計學軟件包。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1泌乳素腺瘤組織切片分析結果

泌乳素腺瘤組織切片分析結果提示，FAP在兩組中均有陽性表達，各組FAP表達情況見封三圖1～4。表達部位主要位于腫瘤細胞周圍間質，部分組織可見血管周圍的陽性表達（封三圖2）。陽性率在侵襲組為87.5%（21/24），非侵襲組為69.4%（25/36）。

2.2兩組FAP表達強度（OD值）比較

兩組FAP表達強度（OD值）比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　FAP在不同侵襲性腫瘤中的表達（±s）

表1　FAP在不同侵襲性腫瘤中的表達（±s）

注：*分組標準參照Knosp的分級標準

組別*　n　FAP（OD值）　t值　P值侵襲組非侵襲組24 36 0.2282±0.0553 0.1592±0.0662　3.460　0.001

3　討論

腫瘤組織中除了瘤細胞，還包括間質細胞、細胞外基質（ECM）、血管和免疫細胞。腫瘤的演進不僅是由癌基因和抑癌基因來調控，還依賴于由間質形成的微環境的作用［6］。腫瘤細胞可通過誘導腫瘤基質（主要是成纖維細胞）表達FAP等一些基質蛋白從而促進腫瘤的侵襲和轉移。這些基質蛋白對腫瘤發生、生長、血管形成，浸潤與轉移有重要作用，并具有器官特異性［7］。許多體外實驗已經證明TAF有刺激腫瘤組織增殖的作用［8］。類似的體內實驗進一步支持了以上結果［9］：將腫瘤細胞株接種于裸鼠時，TAF不僅可以縮短裸鼠成瘤的時間且提高了接種的成瘤率；同時可顯著減少接種細胞株總的劑量。以上研究結果都說明成纖維細胞激活在腫瘤的發生和發展中起著誘導和協助的作用。

FAP是脯氨酰基特異的絲氨酸寡肽酶家族成員之一，是由單克隆抗體F19識別的一種膜結合糖蛋白，由FAP-A和FAP-B兩個亞單位組成分子量為170 kDa的二聚體，僅選擇性表達于腫瘤微環境、愈合的創面及器官的生理性重建等。FAP可選擇性表達于90%以上的上皮源性惡性腫瘤的間質成纖維細胞上，如胰腺癌、食管癌、宮頸癌等，另外FAP也表達于骨及骨髓中的惡性間葉細胞，皮膚黑色素瘤等［1］，但在正常組織中的成纖維細胞和良性腫瘤間質中幾乎無陽性表達，這提示其可能是一個增生性成纖維細胞的表面標志物。體外研究表明，FAP具有膠原酶以及類似二肽肽酶的活性，能夠降解細胞外基質組分，參與趨化因子和神經肽的裂解，使癌細胞更容易脫離原來的位置，從而促進腫瘤的侵襲轉移和組織重塑。此外，FAP陽性的腫瘤間質細胞會抑制機體自身的抗腫瘤免疫反應，從而協助腫瘤細胞躲避免疫攻擊.為腫瘤發展營造更合適的微環境［10］。

本研究發現FAP在泌乳素腺瘤中均有陽性表達（見封三圖1～4），但表達強度不同。在侵襲組呈強表達，在非侵襲組FAP呈弱表達，表達強度通過其OD值來表示，侵襲組約為非侵襲組的1.5倍。有研究顯示［11］在垂體腺瘤周圍硬腦膜的標本中發現，微腺瘤、大腺瘤及巨腺瘤的微侵襲率在80%以上且依次升高。相反，相同研究中的術中所見的腫瘤侵襲率僅40%左右。本實驗中的“非侵襲組”的標本也有陽性表達正好驗證了這一點，因為看似非侵襲性的腫瘤實際上已經被“侵襲性”了。

FAP在腫瘤間質中表達的作用機制尚未得到充分的闡明，現研究結果認為，FAP的功能有以下幾種：降解細胞外基質，腫瘤細胞的侵襲和參與腫瘤組織的重塑；可激活另一種蛋白酶原而間接起到降解的作用降解細胞外基質；解離與降解細胞外基質結合的生長因子，如轉化生長因子、血小板生生長因子等，使腫瘤向惡性轉化；參與腫瘤血管生成過程。有研究發現FAP的酶活性在細胞株移植成瘤系統中是必需的［12］。Loeffler等［13］構建了一種口服的針對FAP靶點的DNA疫苗，在動物實驗中發現其能抑制小鼠結腸癌和乳腺癌生長，在機體中并未發現影響傷口愈合或發生免疫降低等不良反應。Kelly等［14］通過研究發現提出，破壞FAP分子復合物阻斷后續信號轉導可以實現對腫瘤的定點抑制。應用FAP多克隆抗體處理移植瘤后可使腫瘤生長減慢，同時有研究通過siRNA敲除FAP基因來達到抑制甚至逆轉FAP介導的侵襲［15］。

綜上所述，本研究結果表明，FAP在侵襲性垂體腺瘤組中的表達強度與非侵襲組有顯著差異，提示FAP可能作為一種鑒別及判定預后的指標。FAP可作為研究CAFs功能的新的靶點。但FAP的腫瘤生物學活性與腫瘤發展進程、預后評估等方面還需要進行進一步的研究。

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Expression and its clinical significance of FAP in the prolactinoma

HAN Zongli1QI Hui1YIN Wei1DU Yanli2
1.Department of Neurosurgery，Peking University Shenzhen Hospital，Shenzhen 518036，China；2.School of Medical Technology and Nursing，Shenzhen Polytechnic，Shenzhen 518055，China

［Abstract］Objective To observe the difference of FAP expression in invasive or noninvasive prolactinoma and disscus the possible clinical applications. Methods Sixty cases of prolactinoma from February 2012 to January 2015 were enrolled，who were divided into invasive and noninvasive group according to the preoperative clinical data and intraoperative finding. The FAP expression in both invasive and noninvasive prolactinoma specimens were detected by immunohistochemical assay（S-P method）. Image dissector（IPP 7.0）was used to determine corresponding optical density（OD value）that represents its expression intensity. Results FAP was detected in the invasive prolactinoma of 87.5%（21/24）and 69.4%（25/36）in the noninvasive prolactinoma which was observed in the prolacinomas or in the cytoplasm of the tumor. The expression of OD values of the two groups were（0.2282±0.0553）and（0.1592±0.0662）respectively，the difference was statistically significant（P＜0.05）. Conclusion The FAP is expressed in both invasive and noninvasive prolatinomas with different expression intensity. FAP maybe used as a marker to distinguish invasive from noninvasive prolactinoma.

［Key words］Fibroblast activation protein（FAP）；Tumor stroma；Prolactinoma；Invasive

［中圖分類號］R736.4；R730.231

［文獻標識碼］A

［文章編號］1673-9701（2016）10-0004-03

收稿日期：（2015-12-21）