神經節苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制分析

孫衛

神經節苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制分析

孫衛

目的 探究神經節苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制。方法 選取168只剛出生1周的SD大鼠并分為3組，各56只。空白組進行假手術，沒有顱腦外傷；對照組出現顱腦外傷，腹腔注射生理鹽水；觀察組存在顱腦外傷，腹腔注射神經節苷脂。結果 實驗結果顯示，觀察組死亡率為23.81%，明顯低于對照組的66.67%（P＜0.05）；觀察組與對照組大鼠大腦海馬區的Nestin 0～24時表達明顯比空白組高（P＜0.05）；觀察組大鼠大腦海馬區NGF表達的第0～24時都明顯比對照組高，差異具有統計學意義（P＜0.05）；觀察組大鼠大腦海馬區NGF表達的第0～16時明顯比空白組高（P＜0.05）；觀察組大鼠海馬區NGF表達根據時間的增長而降低但仍比對照組高。結論 神經節苷脂預防性的利用，能夠促使提高顱腦外傷模型大鼠大腦海馬區的NGF表達，并降低顱腦外傷造模大鼠的死亡率。

神經節苷脂；顱腦外傷；保護作用

根據相關研究報告顯示，近年來，我國發生顱腦損傷患者越來越多，患病率逐漸增高，已經成為臨床腦外傷常見病及高發病之一[1]。顱腦外傷具有突發性，多是由外界暴力直接或間接對患者頭部造成損傷，該病癥的病情復雜、臨床治療風險較大并且臨床表現變化較快[2]。顱腦損傷是現階段存在發病率較高、致殘與致死率較高的一種創傷性疾病[3]。本研究對神經節苷脂對實驗性顱腦外傷大鼠的保護作用及機制進行探究，為治療顱腦外傷選取藥物提供參考，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇168只剛出生1周的SD大鼠為研究對象，均為健康雄性，體質量在180～270 g。將其隨機分為3組，各56只。給藥方式如下：空白組和對照組術前給予腹腔生理鹽水注射，按20 mL/kg給藥，1次/d，持續注射3 d；實驗組，給予腹腔神經節苷脂（GMI，商品名“申捷”，夏邑醫藥公司，國藥準字H 20059887，濃度為2 mg/mL）注射，與上述時間保持一致。

1.2 建立有效的動物手術以及顱腦外傷模型 利用特殊的造模打擊裝置，根據相關研究對大鼠顱腦外傷模型的制作模式將動物模型進行建立。大鼠造模前，禁止飲食8 h，在進行實驗的過程中大鼠保持俯臥位，固定腦立體定向儀，對皮膚進行消毒，按照每千克體質量0.35 g以10%水合氯醛在其腹腔內進行麻醉注射，在正中將頭皮切開會后對骨膜進行剝離，將右頂骨充分暴露出來，隨后利用牙科鉆在冠狀縫1.5 mm后以及距離中線2.5 mm處鉆1個直徑為5 mm的骨窗，并確保骨膜的完整性。

1.3 動物大腦標本的提取 手術完成后，到第0、2、4、8、12、16、24 h時間點，從每組大鼠中各選出5只大鼠，從頸動脈取血，將大鼠處死，進而提取海馬組織。提取海馬組織的方法如下：首先割斷大鼠頭部，然后將頭部正中隆起處的下丘腦切下，將小腦和腦干切除，順著大腦失狀裂縱行切開大腦半球，剝開枕葉內側丘腦和項葉額葉內側紋狀體，將邊緣系統暴露出來，用藥匙將雙側海馬組織慢慢剝離，放到凍存管中冷凍保存，冷存溫度為－80℃。待全部標本提取好以后，分別取每份標本2 g，量取pH值為7.4的PBS 2 mL，將其混合研成勻漿，再利用離心器將其分離，最后提取上清液，分別將其裝好以后測量、備用。

1.4 測量神經巢蛋白以及神經生長因子 根據芬蘭酶標分析儀與洗板機（型號分別為352型與AC 8）和神經節苷脂與Nestin酶聯免疫分析試劑盒（上海酶聯生物技術有限公司）的具體操作表明對神經巢蛋白與神經生長因子進行測量。也就是根據包裝加底物液顯色等，在酶標儀的450 nm波長位置處，根據空白管調零的方式對吸光度進行測定。

1.5 統計學方法 本研究所有數據均采用SPSS統計軟件進行數據統計，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組術后死亡率的對比 2組術后建立顱腦外傷模型，對整個研究過程進行觀察，其中觀察組56只在手術過程中處死35只，另外21只大鼠中有5只自然死亡，死亡率為23.81%，對照組56只在手術過程中處死35只，另外21只大鼠中有14只自然死亡，死亡率為66.67%，觀察組死亡率明顯比對照組低，2組差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 每組大鼠不同時段內大腦海馬區Nestin表達的變化情況 觀察組大鼠大腦海馬區Nestin 0～24時表達與對照組的對比差異不具有統計學意義。觀察組與對照組大鼠大腦海馬區的Nestin 0～24時表達明顯比空白組高，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 每組大鼠不同時間內大腦海馬區Nestin表達的變化情況對比（x±s，n=56）

2.3 每組大鼠不同時間內大腦海馬區NGF表達的變化情況對比 觀察組大鼠大腦海馬區NGF表達的第0～24時都明顯比對照組高，差異具有統計學意義（P＜0.05）；觀察組第0～16時明顯比空白組高，差異具有統計學意義（P＜0.05）；同時，觀察組大鼠海馬區NGF的表達會根據時間的增長而降低，到第24時降到空白組的水平，但此時的水平仍然比對照組高。見表2。

表1 每組大鼠不同時間內大腦海馬區NGF表達的變化情況對比（x±s，n=56）

3 討論

中樞神經系統損傷中應用神經節苷脂，能夠促使其快速修復，神經節苷脂對內源性神經營養因子前體具有重要的增強作用[4-6]，能夠促使神經營養因子的活性不斷增強，有助于神經快速生長與恢復，其作用機制還需要深入的進行探究。Nestin屬于中樞神經系統中的特殊中間絲蛋白，出生后快速降低直至消失，只是在部分保持神經發生功能處存在表達[7-8]。Nestin能夠將中樞神經系統的損傷情況及早地反映出來，同時，也是能夠較快應答的一種敏感標識。神經生長因子屬于最先發現的神經營養因子中的重要組成部分，也是神經系統中主要的生物活性物質，神經生長因子的2個重要功能分別為神經元營養功能、促突起生長雙重生物學功能，能夠調節神經元的損傷修復以及功能恢復。

本研究結果表明，神經節苷脂預防性的利用，能夠促使顱腦外傷模型大鼠大腦海馬區的NGF表達有顯著提高，能夠有效降低顱腦外傷造模大鼠的死亡率。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.008

江西 330006 江西省人民醫院神經外科 （孫衛）