術前新輔助化療及腸內營養對胃癌患者Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達的影響

魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏

術前新輔助化療及腸內營養對胃癌患者Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達的影響

魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏

目的 探討術前新輔助化療（NAD）及腸內營養（EA）對胃癌患者胃癌組織內Akt1、Bcl-2、Bax蛋白影響。方法 選取胃癌患者75例，隨機分為對照組25例、NAD組25例和NAD+EA組25例，分別檢測干預治療前后胃癌組織中Akt1、Bcl-2、Bax蛋白的表達情況。結果 NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前均顯著降低(P＜0.05)，NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較對照組顯著降低(P＜0.05)。NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低(P＜0.05)，Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高(P＜0.05)，NAD組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P＜0.05)，NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低(P＜0.01)，NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照組顯著升高(P＜0.05)。結論術前NAD結合EA能降低胃癌組織內Akt1、Bcl-2蛋白，提高Bax蛋白水平，可能通過改變蛋白含量抑制腫瘤進程。

胃癌；新輔助化療；Akt1；Bcl-2；Bax

新輔助化療（neoadjuvant chemotheraphy，NAD）是一種治療胃癌的綜合性療法，在消化道惡性腫瘤的治療上，已得到越來越廣泛的應用[1]。營養支持是緩解胃癌患者營養不良的必要措施。Akt1又稱蛋白激酶B，可調控細胞增值和生長，目前研究發現其在細胞凋亡和糖代謝方面起到重要作用，Akt1基因位點的突變與腫瘤的發生及生成關系密切[2]。Bcl-2/Bax的比例也是決定細胞凋亡的關鍵，當比例增大時，細胞凋亡受抑制，反之則促進[3]。本研究對胃癌患者給予NAD及對應腸內營養（enteral nutrition，EA）支持，觀察胃癌組織內Akt1、Bcl-2、Bax蛋白表達變化，以探討NAD及EA支持對胃癌抑制的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8月～2014年6月在河南大學附屬醫院的胃癌患者75例，隨機分成3組，各25例。對照組：確診后直接手術；NAD組：NAD后直接手術；NAD+EA組：為在行術前NAD加用EA支持后再行手術。所有入組患者術前均有內鏡活檢病理，并將活檢標本及術后標本存液氮備用。對照組男15例，女10例，平均年齡（54.4±1.6）歲，中分化13例，低分化12例，TNMⅡ期12例，TNMⅢ期13例；NAD組男18例，女7例，平均年齡（51.4±3.2）歲，中分化11例，低分化14例，TNMⅡ期11例，TNMⅢ期14例；NAD+EA組男15例，女10例，平均年齡（52.2±1.0）歲，中分化9例，低分化16例，TNMⅡ期13例，TNMⅢ期12例。各組年齡及性別組間兩兩比較，差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 新輔助化療 第1天靜脈滴注奧沙利鉑（130mg/ m2）；第1～14天，口服卡培他濱（1000mg/m2），2次/d。進行2個療程后行手術治療。

1.2.2 腸內營養 采用高脂低糖、含ω-3脂肪酸且熱量供給為62.76～83.68kJ/（kg·d）的營養標準供給。其他2組自然進食。

1.3 檢測方法

1.3.1 試劑 兔抗人AKt1單克隆抗體，Bcl-2、Bax、兔抗人多克隆抗體，SABC試劑盒，DAB顯色試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供。

1.3.2 藥品 注射用奧沙利鉑（齊魯制藥有限公司，批號：20130216）；卡培他濱片（上海羅氏制藥有限公司，批號：20121208）。

1.3.3 Western blot檢測AKt1蛋白的表達 術后剪取適量（30～80mg）胃癌組織,加入約500μL RIPA蛋白裂解液和5μL PMSF蛋白保護液，4℃、12000r/min離心15min后取上清液，測定其中蛋白濃度。行電泳分離，低溫轉膜后在TBST溶液中常溫封閉4h，然后加入兔抗人AKt1單克隆抗體（1∶10000稀釋）和小鼠抗人β-action單克隆抗體（1∶10000稀釋），4℃孵育過夜，顯影，定影。蛋白的相對表達量用灰度值表示，采用Quantity One軟件分析。

1.3.4 Western blot檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達 術后剪取適量（30～80mg）胃癌組織,加入約500μL RIPA蛋白裂解液和5μL PMSF蛋白保護液，4℃、12000r/min離心15min后取上清液，測定Bcl-2、Bax蛋白濃度。具體操作步驟嚴格按照說明書進行。蛋白的相對表達量用灰度值表示，采用Quantity One軟件分析。

1.4 統計學方法 采用SPSS14.0統計軟件進行數據分析，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組治療前后Akt1蛋白含量表達比較 NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前均顯著降低（P＜0.05），NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較對照組顯著降低（P＜0.05）。見表1。

表1 各組治療前后Akt1蛋白含量表達比較（x±s）

2.2 各組治療前后Bcl-2/Bax蛋白含量表達比較 NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低（P＜0.05），Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高（P＜0.05），NAD組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低（P＜0.05），NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量較對照組顯著降低（P＜0.01），NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照組顯著升高（P＜0.05）。見表2。

表2 各組Bcl-2/Bax檢測IOD值比較（x±s）

3 討論

胃癌患者手術前常存在營養不良，影響腫瘤術后的預后及總體療效；因此，術前給予EA，糾正營養不良以更利于治療進行。但單一的營養支持又可能促進癌細胞的增殖，引發術后復發或轉移[4]。NAD在殺滅癌細胞同時，會使患者出現消化道不良反應，影響預后。所以在術前給予EA同時加入NAD，既可以達到抑制癌細胞的作用，又可以供給機體足夠的營養，作為胃癌綜合治療的一種手段，有利于延長患者生存期，提高生活質量，降低手術風險及術后并發癥[5]。

Akt又稱蛋白激酶B，Akt1是其三個分型之一，Akt通過磷酸化caspase-9前體，發揮抗凋亡作用，從而促進細胞生長、存活及腫瘤生成[6-7]，Bcl-2/Bax的比例也是決定細胞凋亡的關鍵[8]，當比例增大時，細胞凋亡受抑制，反之則促進。Bcl-2是一種跨膜蛋白，存在于線粒體膜,改變膜的通透性抑制細胞色素C釋放實現抑制凋亡作用[9-10]。

本研究結果顯示，NAD組及NAD+EA組治療后Akt1蛋白含量均較治療前、對照組顯著降低（P＜0.05）。NAD組及NAD+EA組治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前均顯著降低（P＜0.05），Bax蛋白含量均較治療前均顯著升高（P＜0.05），NAD組及NAD+EA治療后Bcl-2蛋白含量均較治療前、對照組顯著降低（P＜0.05），NAD組及NAD+EA組治療后Bax蛋白含量均較對照前顯著升高（P＜0.05），提示使用NAD+EA均可能通過降低Akt1、Bcl-2蛋白，提高Bax蛋白，抑制抗凋亡作用，促進腫瘤細胞凋亡實現抑制抗腫瘤作用，進而達到了治療效果。

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Objective To evaluate the effect of of neoadjuvant chemotherapy combined with enteral nutrition on Akt1, Bcl-2, Bax protein in patients with gastric cancer. Methods 75 patients with gastric cancer were randomly divided into the control group (n=25), neoadjuvant chemotherapy group (NAD group, n=25) and neoadjuvant chemotherapy plus enteral nutrition group (NAD+EA group, n=25). The content of Akt1, Bcl-2, Bax protein in gastricancer tissue were detected by westernblot before and after treatment. Results The content of Akt1 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment(P＜0.05). The content of Akt1 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than control group (P＜0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment (P＜0.05). The content of Bax were increased after treatment in NAD group and NAD+EA group than before treatment (P＜0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD group than control group (P＜0.05). The content of Bcl-2 were decreased after treatment in NAD+EA group than control group (P＜0.01). The content of Bax were increased after treatment in NAD group and NAD+EA group than control group (P＜0.05). Conclusion Preoperative neoadjuvant chemotherapy combined with enteral nutrition can decrease the content of Akt1, Bcl-2, increase the Bax protein, the inhibition of tumor procession may realize by changing the protein content.

Gastric cancer; Neoadjuvant chemotherapy; Akt1; Bcl-2; Bax

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.26.001

河南大學校內基金（No:2013YBZR021）

河南 475000 河南大學附屬淮河醫院消化內科 （魏倫收 張娟娟 康玉華 丁春生 索智敏）

索智敏 E-mail：suozhiminkf@126.com