FGFR-1、cyclinD1在乳腺癌中的表達及其臨床意義

鄧敏　解瑞飛　王惠.杭州市富陽區第一人民醫院病理科，浙江杭州3400；.杭州市腫瘤醫院信息科，浙江杭州3000

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FGFR-1、cyclinD1在乳腺癌中的表達及其臨床意義

鄧敏1解瑞飛2王惠1
1.杭州市富陽區第一人民醫院病理科，浙江杭州311400；2.杭州市腫瘤醫院信息科，浙江杭州310002

[摘要]目的探討成纖維生長因子受體（fibroblast growth factor receptor，FGFR-1）及細胞周期蛋白D1（cyclinD1）在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義。方法應用原位雜交及免疫組織化學S-P法檢測乳腺癌、乳腺纖維腺瘤和正常乳腺組織中FGFR-1、cyclinD1 mRNA及蛋白水平的表達。結果在乳腺癌中，FGFR-1蛋白和FGFR-1基因的陽性率分別為70.0%（21/30）、70.0%（21/30），cyclinD1蛋白和cyclinD1基因的陽性率分別為66.7%（20/30）、76.7% （23/30），明顯高于纖維腺瘤與正常乳腺組織（P<0.05），FGFR-1表達與cyclinD1表達一致。結論FGFR-1的過表達在人類乳腺癌的發生、發展中起重要作用，其機制可能通過上調cyclinD1的表達發揮作用，FGFR-1、cyclinD1的過度表達可作為判斷乳腺癌預后的重要指標。

[關鍵詞]FGFR-1；cyclin D1；乳腺癌；免疫組化；原位雜交

[Key woeds]FGFR-1;Cyclin D1;Breast carcinoma;Immunohistochemistry;In situ hybridization

成纖維細胞生長因子受體（FGFR）是由糖蛋白的胞外免疫球蛋白（Ig）樣結構域、疏水跨膜區和含有酪氨酸激酶結構域的細胞質部分組成。研究發現FGFR-1、FGFR-2基因表達于許多腫瘤細胞，與患者的預后密切相關。在甲狀腺癌、結直腸癌、胃癌等腫瘤中均可見FGFR-1的高表達[1，2]。

細胞周期蛋白（cyclin）對細胞周期進行正調控，與細胞生長、發育及腫瘤的發生關系極其密切。研究發現：在原發性乳腺腫瘤中，cyclinD1和FGFR-1的共同擴增與患者存活顯著減少相關，表明這兩種蛋白之間存在相互作用[3，4]。然而目前FGFR-1在乳腺癌中的表達及其高表達是如何促進腫瘤細胞增殖、與cyclinD1的關系如何，國內尚無報道。本文采用原位雜交及免疫組織化學技術，對30例乳腺癌組織中cyclinD1和FGFR-1的mRNA及蛋白表達進行研究。現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集我院2007年3月～2014年8月手術切除的乳腺纖維腺瘤患者15例、乳腺癌患者30例。所有標本術前均未進行放化療，術后病理診斷為乳腺癌、纖維腺瘤。另取15例癌旁正常乳腺組織作對照。患者年齡35～63歲，平均（46.0±3.2）歲，乳腺癌組伴有淋巴結轉移18例，無淋巴結轉移者12例。30例乳腺癌標本中，獲得滿5年隨訪者24例，其中已死亡病例6例，尚生存病例18例。

1.2實驗儀器和試劑

（1）主要儀器：萊卡DM-3000顯微鏡、萊卡切片機RM2235、萊卡脫水機ASP300S等。

（2）主要試劑：FGFR-1、cyclinD1免疫組化和mRNA原位雜交試劑盒，均購自武漢博士德。

1.3方法

分別采用免疫組化和原位雜交法檢測FGFR-1、cyclinD1蛋白和mRNA的表達，免疫組化及原位雜交染色具體操作方法參照文獻[5，6]并嚴格按照試劑盒說明進行。用己知陽性片作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液分別代替一抗作陰性對照。

1.4結果判斷

FGFR-1、cyclinD1 mRNA陽性表達定位于細胞膜或細胞質，cyclinD1免疫組化陽性表達定位于細胞核，綜合染色強度和陽性腫瘤細胞的百分比進行分級[5]。將染色強度分為：無著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將陽性腫瘤細胞的百分比分為：<10%為0分，10%～50%為1分，51%～75%為2分，>75%為3分。兩項相加后分陰性（-）和陽性（+）：0～1分為（-），2分以上為（+）。

1.5統計學分析

采用SPSS19.0統計學分析軟件，計數資料采用χ2檢驗法和Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1cyclin D1、FGFR-1 mRNA在各組中的表達

2.1.1cyclin D1在各組中的表達cyclin D1 mRNA 在30例乳腺癌中有23例呈陽性表達（圖1），正常對照組、纖維腺瘤組、乳腺癌組逐步增高，陽性率分別為20.0%（3/15）、33.3%（5/15）、76.7%（23/30），纖維腺瘤組與對照組差異無統計學意義（P>0.05）；乳腺癌組與纖維腺瘤組及對照組之間，差異均有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.1.2FGFR-1 mRNA在各組中的表達FGFR-1 mRNA在30例乳腺癌中有21例呈陽性表達（圖2），正常對照組、纖維腺瘤組、乳腺癌組逐步增高，陽性率分別為13.3%（2/15）、20.0%（3/15）、70.0%（21/30），纖維腺瘤組與對照組差異無統計學意義（P>0.05）；乳腺癌組與纖維腺瘤組及對照組之間，差異均有統計學意義（P< 0.05）（表1）。

表1　FGFR-1和cyclinD1 mRNA的各組中的表達[n（%）]

2.2cyclin D1、FGFR-1蛋白在各組中的表達

2.2.1cyclin D1蛋白在各組中的表達cyclin D1蛋白在30例乳腺癌中有20例呈陽性表達（圖3），正常對照組、纖維腺瘤組、乳腺癌組逐步增高，陽性率分別為26.7%（4/15）、33.3%（5/15）、66.7%（20/30），纖維腺瘤組與對照組差異無統計學意義（P>0.05）；乳腺癌組與纖維腺瘤組及對照組之間，差異有統計學意義（P<0.05）（表2）。

2.2.2FGFR-1蛋白在各組中的表達FGFR-1蛋白在30例乳腺癌中有21例呈陽性表達（圖4），正常對照組、纖維腺瘤組、乳腺癌組逐步增高，陽性率分別為6.7%（1/15）、26.7%（4/15）、70.0%（21/30），纖維腺瘤組與對照組差異無統計學意義（P>0.05）；乳腺癌組與纖維腺瘤組及對照組之間，差異有統計學意義（P<0.05）（見表2）。

表2　FGFR-1和cyclinD1蛋白在各組中的表達[n（%）]

3　討論

乳腺癌在染色體8p11-8p12和11q12-11q14的共擴增時常發生，表明在腫瘤形成過程中這些區域的基因之間可能存在合作。FGFR-1所在的染色體區域8p11.2，在腎癌、肺癌、前列腺癌中均擴增[7]。多項研究已經證實FGFR-1在乳腺癌中擴增（8p11.2～p12擴增）[8，9]，FGFR-1和FGFR-2均為受體型酪氨酸激酶，主要分布于細胞膜表面。在細胞表面酪氨酸激酶受體呈單二聚體形式，在受體內的蛋白具有酪氨酸激酶活性。當FGFR與特異的酪氨酸激酶受體結合后，會導致形成穩定的二聚體，隨后其下游信號通路的受體自身磷酸化和活化，導致細胞增殖調節發生紊亂，激活細胞內多種信號通路，從而導致癌的發生[10]，與本研究一致，乳腺癌組織中FGFR-1蛋白的表達明顯增高[11]，顯著高于正常乳腺組織和良性乳腺腺瘤組織，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

圖1　（10x20）cyclin D1 mRNA在各組中的表達（A：對照組；B：纖維腺瘤組；C：乳腺癌組）

圖2　（10x20）FGFR-1 mRNA在各組中的表達（A：對照組；B：纖維腺瘤組；C：乳腺癌組）

圖3　（10x20）cyclin D1蛋白在各組中的表達（A：對照組；B：纖維腺瘤組；C：乳腺癌組）

圖4　（10x20）FGFR-1蛋白在各組中的表達（A：對照組；B：纖維腺瘤組；C：乳腺癌組）

cyclinD1又名CCND1，定位于11q13區，即原癌基因，根據大量研究結果顯示：多種人類腫瘤存在11q13區擴增現象[12]，而cyclinD1位于該區中間部位。cyclin D1轉基因鼠引起乳腺增生和乳腺上皮腫瘤，乳腺癌組織中cyclin D1的高表達將使腫瘤細胞增殖，從而使得腫瘤持續生長[13]。本研究發現乳腺癌組織中cyclin D1蛋白的表達明顯增高，顯著高于正常乳腺組織和良性乳腺腺瘤組織，差異具有統計學意義（P＜0.05）。Etsu等[14]體外實驗研究中發現：FGFR-1表達增加通過cyclin D1過表達激活pRB/E2F通路而參與乳腺癌的發生，首次提出cyclin D1/pRB/E2F通路參與調節成纖維生長因子受體的表達。有學者指出cyclin D/cdk4復合物可使FGFR的795號絲氨酸pRB激活磷酸化，使用FGFR抑制劑后，位于795號染色體的絲氨酸pRB磷酸化減弱，cyclin D/cdk4復合物活性被抑制。異位cyclin D1表達能夠拮抗FGFR-1抑制劑的抗增殖作用，與本實驗結果一致，因此本實驗指出：FGFR-1介導的信號可能通過細胞周期蛋白D的調節連接于細胞周期，調控pRB磷酸化參與腫瘤發生、發展。為了增加實驗的科學性和嚴謹性，本實驗還采用原位雜交方法，檢測各組cyclin D、FGFR-1的mRNA表達水平，結果顯示兩種因子表達呈一致性，進一步說明FGFR-1在轉錄和翻譯水平對cyclinD1進行調節。我們的研究結果提供證據表明：FGFR-1擴增是高度增生乳腺癌的驅動力之一，為乳腺癌新的治療靶點提供了理論依據，FGFR-1抑制劑可能是有效的治療藥，不僅能抑制血管的生成，而且還抑制乳腺癌的生長[15-20]。

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Expression and clinical significance of FGFR-1,cyclinD1 in breast carcinoma

DENG Min1XIE Ruifei2WANG Hui1
1.Department of Pathology,the First People's Hospital of Fuyang District in Hangzhou City,Hangzhou311400,China;
2.Department of Information,Hangzhou Cancer Hospital,Hangzhou310002,China

[Abstract]Objective To study the expression and significance of FGFR-1,cyclinD1 in breast carcinoma.Methods In situ hybridization and immunohistochemistry S-P method were adopted to detect the expression of FGFR-1,cyclinD1 mRNA and protein level in cases of breast cancer,cases of breast fibroadenoma and cases of normal breast tissue.Results In breast carcinoma,the positive rates of FGFR-1 protein and FGFR-1 mRNA were 70.0%(21/30),70.0%(21/30), the positive rates of cyclinD1 protein and cyclinD1 mRNA were 66.7%(20/30),76.7%(23/30),respectively.It was found that the expression of FGFR-1,cyclinD1 in breast carcinoma was obviously higher than in fibroadenoma and normal tissue(P<0.05).The expression of FGFR-1 was coincidence with the cyclinD1.Conclusion The abnormal expression of FGFR-1 plays an important role in the carcinogenesis and progression of human breast carcinoma,the mechanism of which may be up-regulating the expression of cyclinD1.Abnormal expression of FGFR-1 and the overexpression of cyclinD1 could be considered as the useful makers for determining metastasis and prognosis of human breast carcinoma.

[中圖分類號]R737.9

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-9701（2016）04-0001-04

[基金項目]浙江省公益性技術應用研究計劃項目（2015C 33268）；浙江省富陽市科技項目（富科[2011]22號）

收稿日期：（2015-11-11）