獻血者核酸篩查情況分析

趙燕

獻血者核酸篩查情況分析

趙燕

目的 分析棗莊市獻血者的核酸檢測情況，為以后更好的開展核酸檢測工作提供依據。方法 ALT檢測合格及酶聯免疫法檢測乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒陰性的獻血者標本9901例，進行HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA的聯合混樣檢測，對混樣陽性的標本再進行拆分檢測。并對拆分乙肝HBV-DNA陽性的樣本進行乙肝兩對半血清學的酶聯免疫檢測。結果 共完成9901例標本的核酸混樣檢測，拆分陽性的標本7例，陽性率為0.071%(7/9901)。HBcAb陽性或HBcAb陽性伴HBsAb強弱陽性占71.40%(5/7)，而HCV-RNA、HIV-RNA均陰性。對7例HBV-DNA陽性的標本進行乙肝兩對半檢測，結果顯示：HBcAb陽性2例（28.5%)，HBcAb陽性伴HBsAb強弱陽性3例(42.9%)，HBsAg弱陽性伴HBsAb陽性1例(14.3%)，兩對半結果全部陰性1例（14.3%)。結論 常規檢測后的獻血者依然有傳染性的可能，核酸檢測可有效降低傳染性的風險。

獻血者；血液安全；核酸篩查

輸血作為一種不可替代的臨床治療手段，已經發揮著越來越重要的作用。但血液的輸注雖搶救了患者的生命和治愈了疾病，但也存在著輸血性傳播疾病的危險。因此，為提高臨床輸血安全，盡量避免傳染性疾病通過需要傳播，是血站工作的核心任務之一。目前，我國采供血機構，依據衛生部相關標準，每份血液標本分別用兩種不同廠家的酶聯免疫試劑，對乙肝、丙肝、艾滋病和梅毒進行檢測，但是由于酶聯免疫試劑的靈敏度問題，但依然存在因漏檢而傳播的風險，這主要是“窗口期”問題而導致的。核酸擴增技術具有高度的敏感性和特異性，通過檢測病毒的核酸，可有效降低“窗口期”造成的漏檢，核酸檢測技術(NAT)在血站的應用彌補了酶聯免疫試的不足。因此，西方發達國家在上世紀末已經普遍應用NAT進行血液檢測[1]。近年來國內部分采供血機構也把核酸擴增技術應用于血液的檢測[2]。國家衛生和計劃生育委員會要求2013～2015年全面推進血站核酸檢測工作，并公布具體實施方案，到2015年，血液篩查核酸檢測基本覆蓋全國。為落實國家衛生和計劃生育委員會的要求，本站2015初年開始核酸檢測的探索，已開始全面應用于血液篩查。現將應用情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 檢測標本 棗莊血站2015年7月20日～2015年12月20日，各個采血點采集的獻血者標本共計10140例。采血現場每個獻血者留取標本3份，1份核酸檢測專用試管用于核酸檢測，2份EDTA-K2抗凝真空管用于ALT、血液酶免檢測。核酸檢測專用試管在現場離心，標本保存及運輸溫度要求在2℃～8℃。按照《獻血者健康檢查要求》的標準，對ALT速率法進行檢測，對乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒進行兩遍酶聯免疫檢測(ELISA法)。ALT檢測結果合格（≤40 IU/mL），乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒檢測結果陰性的獻血者標本共計9901例。

1.2 檢測試劑 酶免試劑：乙肝表面抗原試劑（廈門新創，北京萬泰）；丙肝抗體試劑（廈門新創、北京萬泰）；艾滋病抗體試劑（珠海麗珠、北京萬泰）；梅毒抗體試劑（廈門新創、珠海麗珠）；核酸檢測試劑：乙肝病毒、丙肝病毒、人類免疫缺陷病毒（1型）核酸檢測試劑（PCR-熒光法）（上海科華）。上述所有試劑均有批批檢報告并在有效期內使用。乙肝兩對半也用酶免法檢測，由棗莊市立三院進行。

1.3 儀器 哈美頓STAR全自動加樣儀（瑞士）；澳斯邦24/20全自動酶免后處理機；Olympus AU480全自動生化儀（日本奧林巴斯）；上海科華核酸檢測系統：Hamilton MICROLAB STAR全自動混樣提取儀、ABI 7500核酸擴增檢測儀。

1.4 方法 對10140份獻血者標本先進行ALT速率法檢測、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒的酶免法檢測。去掉所有陽性標本，得到全部合格的標本共9901份。對9901份標本進行核酸HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA聯合檢測。8個標本混樣到1個pool，其中每個樣本吸樣180?L，對混樣陽性pool進行單個樣本(每個樣本吸樣1.44 mL)拆分實驗。對HBVDNA陽性樣本，做乙肝兩對半檢測，即乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)的檢測。

2 結果

共完成9901例標本的核酸混樣檢測，拆分15批次，其中乙肝核酸拆分陽性的標本7例，核酸檢測陽性率為0.071%(7/9901)。HBcAb陽性或HBcAb陽性伴HBsAb強弱陽性占71.40%(5/7)。沒有檢出HIV-RNA或HCV-RNA陽性標本。對7例HBV-DNA陽性的樣本進行乙肝兩對半血清學標志物檢測。見表1。

表1 7例酶免陰性HBV-DNA陽性標本乙肝兩對半結果［n（%）］

3 討論

如何降低乙肝、丙肝和艾滋病病毒“窗口期”感染風險，已成為血液檢測領域亟待解決的問題。現有的酶聯免疫等血清學檢測方法檢測的是抗原或抗體，而核酸檢測技術檢測的是病毒核酸[3]，能更早地發現病毒感染，減少經血傳播疾病的潛在風險。這項技術目前可將乙肝、丙肝和艾滋病病毒的檢測“窗口期”分別由原來的50天、72天和22天縮短到25天、59天和11天[4]，臨床輸血安全將更有保障。

本站核酸檢測結果，從9901例獻血者ALT、乙肝、丙肝和艾滋病檢測全部合格的標本中，用NAT檢測篩查并鑒定出7例HBV-DNA陽性，陽性率0.071%(7/9901)，低于我國相關報道的0.15%[5]和0.47%[6]，這可能與乙肝的流行區域差異有關，也與人員操作、儀器和試劑有一定的關系，也可能與檢測的標本例數較少有關。從本結果看出，常規酶聯免疫法對乙肝標本檢測后，仍然存在漏檢的可能。對乙肝、丙肝和艾滋病檢測出處于窗口期的而且隱匿性感染的獻血者，酶聯免疫試劑方法是檢測不出來的，說明核酸檢測的重要性和必要性[7]。從7例獻血者的兩對半檢測結果看出，HBsAg酶免陰性、HBV-DNA陽性乙肝血清學標志物共出現4種情況：其中以HBcAb陽性或HBcAb陽性伴HBsAb強弱陽性占比例最大，總共達71.40%(5/7)，與廣州番禺地區的63.8%[8]相近。1例HBsAb強陽性伴HBsAg極弱陽性，是否為乙型肝炎病毒的PreS/S基因變異株所致，由于本站條件所限，無法進行病毒核酸測序確認。其中有1例獻血者乙肝兩對半的檢測結果全部陰性，對此獻血者準備跟蹤調查，如果檢測結果顯示其HBsAg、HBeAg轉為陽性，那么獻血者“窗口期”感染的可能性較大。由于本站開展獻血者的NAT檢測時間較短，標本數數量較少，加之獻血者的丙肝、艾滋病的感染率較低，所以暫未檢出HIV-RNA或HCV-RNA陽性標本。

[1] 王芳，欒燕，劉顯智．在獻血者人類免疫缺陷病毒篩查中的應用[J]．中國輸血雜志，2010，23(10)：892-894．

[2] 顏秀娟，陸祝選，邱昌文，等．核酸檢測技術應用于血清學篩查合格的獻血者標本檢測[J]．中國輸血雜志，2012，25(12)：1322-1323.

[3] 歐山海，林永財，倪宏英，等．核酸檢測后血液檢測模式的探討[J]．中國輸血雜志，2012，25(3)：244-246．

[4] 壬迅，鄭嵐，張晰，等．核酸擴增技術(NAT)在上海血液篩檢中的初步應用[J]．中國輸血雜志，2003，16(3)：157-160．

[5] 任芙蓉．核酸檢測技術在國內外血液篩檢中的應用[J]．北京醫學，2008，30(8)：561.

[6] 劉麗，楊忠思，許雷．HBsAg陰性HBV DNA陽性的無償獻血者血清學模式及其意義[J].中國輸血雜志，2013，26(1)：49-50.

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[8] 藍文莉，謝敬文．廣州番禺地區開展核酸血液篩查的應用情況[J]．中國輸血雜志，2015，28(4)：235-236.

Objective Analysis of NAT in Zaozhuang blood donors, provide the basis for better development of NAT work. Methods Qualif i ed ALT and ELISA in detection of hepatitis B, hepatitis C, syphilis and HIV negative blood specimens, HBV-DNA and HCV-RNA and HIV-RNA combined with separation detection of mixed samples and the positive samples. And ELISA of two pairs of semi–hepatitis, the sample is HBV-DNA positive. Results This study conduct 9901 mix sample test in total, 7 samples are split positive, and the ratio is 0.071% (7/9901), while HCV-RNA and HIV-RNA are negative. Two pairs of semi–hepatitis test of 7 HBV-RNA samples showed that, 2 of them are HBcAb positive (28.5%), 3 of them are HBcAb positive with HBsAb weak positive (42.9%), 1 of them is HbsAg weak positive with HBsAb positive(14.3%), and 1 is negative (14.3%). Conclusion After the routine detection of blood donors is still contagious, NAT can effectively reduce the risk.

Blood Donors; Blood safety; NAT

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.20.022

山東 277101 山東省棗莊市中心血站（趙燕）