細(xì)胞DNA定量分析聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)在宮頸癌篩查中的臨床應(yīng)用研究?

譚景浪， 陳 瓊， 喬莎莎， 覃勤英， 鄧娟榮， 李美良， 陸厚良(廣西壯族自治區(qū)來賓市人民醫(yī)院病理科， 廣西 來賓 524000)

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細(xì)胞DNA定量分析聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)在宮頸癌
篩查中的臨床應(yīng)用研究?

譚景浪， 陳 瓊， 喬莎莎， 覃勤英， 鄧娟榮， 李美良， 陸厚良
(廣西壯族自治區(qū)來賓市人民醫(yī)院病理科， 廣西 來賓 524000)

摘 要:目的:研究細(xì)胞DNA定量分析聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)在宮頸癌篩查中的臨床應(yīng)用。方法:從2013年10月至2014年10月，選取實(shí)施宮頸癌篩查并且有活檢結(jié)果的病例1496例。所有病例均是使用宮頸刷進(jìn)行取材，行液基方式制片兩張，一張實(shí)施巴氏染色，用來進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞學(xué)TBS診斷。另外一張進(jìn)行Feu1gen染色處理，用來進(jìn)行細(xì)胞DNA定量分析診斷。結(jié)果:本文一共篩查檢測1496例適齡的婦女，活檢結(jié)果顯示癌5例，CIN1共40例，CIN2共6例，CIN3共5例。其中6例的CIN2病例中，實(shí)施細(xì)胞DNA定量分析檢測后結(jié)果顯示為陽性。有5例CIN1實(shí)施細(xì)胞DNA定量分析后結(jié)果顯示為可疑，進(jìn)而使得活檢被延遲。僅僅使用常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行診斷，有4例CIN2病例被診斷是ASCUS，或會(huì)由于被建議進(jìn)行復(fù)查進(jìn)而導(dǎo)致活檢被延遲，使得病情被貽誤，特別是有2例宮頸癌也被診斷有ASCUS。有12例CIN1被診斷表現(xiàn)為陰性，30例CIN1診斷表現(xiàn)為ASCUS。在對(duì)較高級(jí)別的宮頸癌前的相關(guān)病變進(jìn)行檢測時(shí)，細(xì)胞DNA定量分析方式的敏感性明顯大于常規(guī)的細(xì)胞學(xué)檢測。一旦使用聯(lián)合方式診斷，其敏感性明顯得到提升。然而和常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，細(xì)胞DNA定量分析檢測方式的特異性較低。在聯(lián)合使用情況下，特異性和常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，盡管特異性降低，但是敏感性進(jìn)一步得到提升。結(jié)論:DNA定量細(xì)胞學(xué)和常規(guī)的液基細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，能有效提高陽性細(xì)胞的檢出率和高級(jí)別病變檢出的敏感性。兩者聯(lián)合使用，敏感性進(jìn)一步得到提升，能夠有效提升細(xì)胞學(xué)檢測的質(zhì)量，對(duì)宮頸癌篩查起到較為積極的作用。

關(guān)鍵詞:細(xì)胞DNA定量； 液基細(xì)胞學(xué)； 宮頸癌； 篩 查

本文特此研究細(xì)胞DNA定量分析聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)在宮頸癌篩查中的臨床應(yīng)用，進(jìn)行技術(shù)對(duì)比和討論，旨在探索有效提升細(xì)胞學(xué)檢測質(zhì)量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料:從2013年10月至2014年10月，選取我院進(jìn)行宮頸癌篩查并且有活檢結(jié)果的病例共1496例，年齡24～65歲。標(biāo)本的收集均由婦科醫(yī)師來操作完成:將宮頸刷伸入到檢測者的宮頸口處，旋轉(zhuǎn)3～5周，刷取宮頸部位的移行區(qū)的脫落細(xì)胞；將宮頸刷刷頭取下，放入細(xì)胞保存液中，貼好標(biāo)簽之后，送至病理科由病理醫(yī)師實(shí)施檢測(所有檢測試劑由麥克奧迪醫(yī)療診斷有限公司提供)。

1.2研究方法:首先對(duì)制片進(jìn)行染色處理:將標(biāo)本進(jìn)行震蕩離心處理后，棄去上清液，留下細(xì)胞的沉淀物，再將其進(jìn)行稀釋到細(xì)胞懸液之后，加入細(xì)胞的分散劑。最后，將細(xì)胞懸液制作成為2張薄層的細(xì)胞玻片，一張進(jìn)行巴氏染色，用來進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞學(xué)TBS診斷。另外一張進(jìn)行Feu1gen染色處理，用來進(jìn)行細(xì)胞DNA定量分析檢測。①細(xì)胞DNA定量分析檢測:經(jīng)過Feu1-gen染色處理之后的玻片，使用MotiCytometer的全自動(dòng)細(xì)胞像分析系統(tǒng)(來自麥克奧迪醫(yī)療診斷系統(tǒng)有限公司，廈門，中國)實(shí)施掃描處理，并且取8000左右的細(xì)胞核。每一個(gè)細(xì)胞核均產(chǎn)生100多個(gè)參數(shù)的特征值。通過這些特征值，系統(tǒng)能夠自動(dòng)的對(duì)這些細(xì)胞核進(jìn)行分類處理。細(xì)胞DNA定量分析標(biāo)準(zhǔn):陰性:是以正常的二倍體細(xì)胞作為主，未見到倍體異常細(xì)胞，即DNA指數(shù)(DI)＜2.5，并且增生細(xì)胞占到檢測細(xì)胞總數(shù)量的百分之五以下，建議其定期進(jìn)行篩查。可疑:存在1～2個(gè)DI≥2.5的倍體異常細(xì)胞或者是增生細(xì)胞占到檢測細(xì)胞總數(shù)量的百分之五到百分之十，建議4～6個(gè)月進(jìn)行復(fù)查。陽性:存在3個(gè)及以上的DI≥2.5的倍體異常細(xì)胞或者是增生細(xì)胞占到檢測細(xì)胞總數(shù)量的百分之十以上，建議進(jìn)行陰道鏡檢查或者床臨活檢。②常規(guī)的細(xì)胞學(xué)檢測:根據(jù)2001年國際癌癥協(xié)會(huì)推薦使用的TBS分類標(biāo)準(zhǔn)為:正常范圍，未見上皮內(nèi)病變或惡性病變(NILM)；意義不明的不典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS)；不典型鱗狀上皮細(xì)胞不除外高度病變(ASC -H)；低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)；高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)；鱗狀細(xì)胞癌(SCC)以及非典型腺細(xì)胞等。

1.3觀察指標(biāo):常規(guī)細(xì)胞學(xué)和聯(lián)合檢測陽性準(zhǔn)確率；以≥CIN1以及≥CIN2作為陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)及常規(guī)細(xì)胞學(xué)和DNA定量分析檢測標(biāo)準(zhǔn)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)比較采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1兩種細(xì)胞學(xué)篩查方式和活檢的對(duì)照:一共篩查檢測1496例適齡的婦女，年齡24～65歲。活檢結(jié)果顯示癌5例，CIN1共40例，CIN2共6例，CIN3共5例。其中6例的CIN2病例中，實(shí)施細(xì)胞DNA定量分析檢測后結(jié)果顯示為陽性。有5例CIN1實(shí)施細(xì)胞DNA定量分析后結(jié)果顯示為可疑，進(jìn)而使得活檢被延遲，僅僅使用常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行診斷。有4例CIN2病例被診斷是ASCUS，或許會(huì)由于被建議進(jìn)行復(fù)查進(jìn)而導(dǎo)致活檢被延遲，使得病情被貽誤，特別是有2例宮頸癌也被診斷有ASCUS。有12例CIN1被診斷表現(xiàn)為陰性，30 例CIN1診斷表現(xiàn)為ASCUS。見表1。

表1　兩種細(xì)胞學(xué)篩查方式和活檢的對(duì)照n(%)

2.2常規(guī)細(xì)胞學(xué)和聯(lián)合檢測陽性準(zhǔn)確率對(duì)比:常規(guī)細(xì)胞學(xué)和聯(lián)合檢測陽性準(zhǔn)確率對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2　常規(guī)細(xì)胞學(xué)和聯(lián)合檢測準(zhǔn)確率比較

表3　以≥CIN1作為陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)常規(guī)細(xì)胞學(xué)和DNA定量分析靈敏度特異度及預(yù)防值

表4　以≥CIN2作為陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)常規(guī)細(xì)胞學(xué)和DNA定量分析檢測標(biāo)準(zhǔn)性對(duì)比n(%)

2.3以≥CIN1或≥CIN2作為陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)常規(guī)細(xì)胞學(xué)和DNA定量分析檢測標(biāo)準(zhǔn)性對(duì)比:在對(duì)較高級(jí)別的宮頸癌前病變進(jìn)行檢測時(shí)，細(xì)胞DNA定量分析方式的敏感性明顯大于常規(guī)的細(xì)胞學(xué)檢測。一旦使用聯(lián)合方式診斷，其敏感性明顯得到提高。然而和常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，細(xì)胞DNA定量分析檢測方式的特異性較低。在聯(lián)合診斷實(shí)施的情況下，特異性和常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，盡管特異性降低，但是敏感性進(jìn)一步得到提高。見表3、4。

3　討 論

宮頸癌作為危害廣大婦女身心健康的最為多見的惡性腫瘤之一，實(shí)施定期篩查是對(duì)宮頸癌進(jìn)行預(yù)防的有效方式[1]。從宮頸的癌前病變逐步發(fā)展到宮頸癌，大約要花費(fèi)5～15年的時(shí)間，因而讓宮頸癌得以及早發(fā)現(xiàn)及早治療創(chuàng)造了有利時(shí)機(jī)。如今，在許多較為發(fā)達(dá)的國家進(jìn)行常規(guī)的宮頸癌篩查，已被證實(shí)可以有效地降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。然而細(xì)胞學(xué)檢測作為形態(tài)學(xué)診斷，要保證技術(shù)人員具有較為豐富的操作經(jīng)驗(yàn)，否則可能導(dǎo)致敏感性降低、假陰性和假陽性發(fā)生率增高。近年來，雖然液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)極大程度上解決了取材制片上的局限性，但是由于閱片醫(yī)師水平的局限性和細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變?nèi)狈^為客觀的判斷標(biāo)準(zhǔn)，使得細(xì)胞學(xué)診斷的結(jié)果可重復(fù)性不佳，對(duì)宮頸癌篩查結(jié)果造成了一定的影響。

本文研究發(fā)現(xiàn)，在對(duì)較高級(jí)別的宮頸癌前病變進(jìn)行檢測時(shí)，細(xì)胞DNA定量分析檢測的敏感性明顯大于常規(guī)的細(xì)胞學(xué)檢測。一旦使用聯(lián)合方式檢測，其敏感性明顯得到提高。然而和常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，細(xì)胞DNA定量分析檢測方式的特異性較低。在聯(lián)合診斷實(shí)施的情況下，特異性和常規(guī)的細(xì)胞學(xué)進(jìn)行對(duì)比，盡管特異性降低，但是敏感性進(jìn)一步得到提高。液基薄層細(xì)胞學(xué)的相關(guān)檢測作為近幾年來逐步發(fā)展起來的一項(xiàng)全新的檢測方式，有效提高了找到宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的敏感度[2]。DNA定量分析方式是通過對(duì)體內(nèi)的DNA水平進(jìn)行測定，進(jìn)而掌握以及了解患者腫瘤細(xì)胞的相關(guān)遺傳基因不斷變異的過程。在許多宮頸鱗狀細(xì)胞癌以及較高級(jí)別的HSIL病例中，均能夠找到DNA倍體的異常細(xì)胞[3]。在我國，特別是一些基層的地區(qū)，具有一定資歷的細(xì)胞學(xué)的醫(yī)師較為匱乏，80%以上的宮頸癌患者就是來源于這些地區(qū)。所以本文研究中，除了液基薄層細(xì)胞學(xué)之外，輔助使用全自動(dòng)的細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)操作，以此評(píng)估該技術(shù)在一些基層地區(qū)開展宮頸癌篩查的使用價(jià)值。全自動(dòng)細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)的操作簡單，對(duì)掌握技術(shù)要求的門檻較低，可以通過短期的培訓(xùn)之后，技術(shù)員即可進(jìn)行操作，相對(duì)于常規(guī)細(xì)胞學(xué)的診斷來說，更適合用于臨床篩查。

參考文獻(xiàn):

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[2] 劉會(huì)芳，趙元華，何榮霞，等.葉黃素對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版)，2015，11(1)：14～17.

[3] 楊玉濤，張帆，鐘美，等.細(xì)胞DNA定量分析聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)對(duì)宮頸病變篩查的應(yīng)用價(jià)值[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，36(3)：5～8.

Clinical Application of DNA Quantitative Analysis Combined with Liquid
Based Cytology in Cervical Cancer Screening

TAN Jinglang， CHEN Qiong， QIAO Shasha， et al
(The People's Hospital of Laibin，Guangxi Laibin 524000，China)

Abstract:Objective:To study the c1inica1 app1ication of DNA quantitative ana1ysis combined with 1iquid based cyto1ogy in cervica1 cancer screening. Method: From October 2013 to October 2014，1496 cases of cervica1 cancer screening and biopsy resu1ts were se1ected in our hospita1. In a11 cases，two pieces were prepared by using the cervica1 brush，and the 1iquid based method was used to carry out the PAP staining，which was used for routine TBS diagnosis. In addition，a Feu1gen staining was used for quantitative ana1ysis of DNA ce11s. Result: A tota1 of 1496 cases of DNA were detected，Biopsy resu1ts showed 5 cases of carcinoma，40 cases of CIN1，6 cases of CIN2，5 cases of CIN3. Among them 6 cases of CIN2，and 6 cases of CIN2were detected. The resu1ts showed that the ce11s were positive after quantitative ana1ysis. The resu1ts of 5 cases of CIN1 imp1ementation after the DNA quantitative ana1ysis showed suspicious，and then the biopsy was de1ayed. Using on1y conventiona1 cyto1ogic diagnosis，4 cases of CIN2 were diagnosed as ascus，biopsy was de1ayed perhaps for being recommended for reviewing and then condition was de1ayed，especia11y two cases of cervica1 cancer were diagnosed with ASCUS. 12 cases of CIN1 were diagnosed as negative，30 cases of CIN1 were disignosed as ASCUS. The sensitivity of DNA quantitative ana1ysis method was significant1y higher than that of conventiona1 cyto1ogy in the detection of high grade cervica1 precancerous 1esions. Once used in combination，the sensitivity was significant1y improved. However，compared with the conventiona1 cyto1ogy，the specificity of DNA quantitative ana1ysis method was 1ower than that of conventiona1 cyto1ogy. In the combined use of cases，specificity and conventiona1 cyto1ogy were compared，a1though the specificity decreased，the sensitivity was further improved. Conclusion: DNA quantitative cyto1ogy and conventiona1 1iquid based cyto1-ogy can effective1y improve the detection rate of positive ce11s and the sensitivity of the detection of highgrade 1esions. In combination of the two methods，the sensitivity was further improved，which can effective1y improve the qua1ity of cyto1ogy test and p1ays a more positive ro1e in cervica1 cancer screening.

Key words:DNA quantitative； Liquid based cyto1ogy； Cervica1 cancer； Screening； App1ication

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.031

文章編號(hào):1006-6233(2016)02-0261-04

基金項(xiàng)目：?廣西壯族自治區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目，(編號(hào)：0993003B-29)