高發區賁門癌KAI1/ CD82的表達及意義*

劉淑慧，周宋霞，謝澳斯，黃燕鵬，陳廣燦**

(1.汕頭大學醫學院病理教研室，廣東 汕頭 515041 2.汕頭大學醫學院第一附屬醫院胃腸外科，廣東 汕頭 515041)

高發區賁門癌KAI1/ CD82的表達及意義*

劉淑慧1，周宋霞1，謝澳斯2，黃燕鵬2，陳廣燦2**

(1.汕頭大學醫學院病理教研室，廣東 汕頭 515041 2.汕頭大學醫學院第一附屬醫院胃腸外科，廣東 汕頭 515041)

摘 要:目的:探討KAI1/ CD82蛋白在賁門癌組織中的表達及其與賁門癌臨床病理特征的關系。方法:應用免疫組織化學法檢測46例賁門癌組織和相應標本的46例非腫瘤性粘膜組織KAI1/ CD82蛋白的表達。結果:KAI1/ CD82蛋白在癌組織中表達較非腫瘤性粘膜明顯增強(P＜0.05)。KAI1/ CD82蛋白表達與賁門癌患者的年齡顯著性相關(P＜0.05)，與其它臨床病理特征沒有顯著性關系(P＞0.05)。結論:KAI1/ CD82蛋白的表達可能參與了賁門癌的發生發展。檢測KAI1/ CD82表達有助于進一步了解賁門癌發生發展的機制。

關鍵詞:賁門癌； 免疫組織化學法； 非腫瘤性粘膜

**通訊作者

Key words: Gastric cardia cancer； Immunohistochemistry； Non-tumor gastric tissue

我國食管癌賁門癌高發區存在著以華北太行山、陜豫秦嶺、鄂豫皖大別山、川北、閩粵、蘇北為主的六大地理分布區域。近15年來的流行病學資料調查顯示在傳統的食管癌高發區食管癌的發病呈現下降趨勢，而與食管癌地域分布一致的賁門癌發病率則呈顯上升趨勢[1]。地處閩粵交界的廣東潮汕地區是我國南方沿海的食管癌、賁門癌高發區，流行病學資料調查顯示1995年至2004年賁門癌的發病率僅次于食管癌居第二位[2]。KAI1/ CD82表達與高發區賁門癌的關系報道較少。本研究應用免疫組織化學技術檢測潮汕高發區賁門癌組織和相應標本非腫瘤性粘膜KAI1/ CD82的表達情況，探討其表達與賁門癌發生發展的關系。

1 資料與方法

1.1臨床資料:收集汕頭大學醫學院附屬醫院2011 年9月至2013年1月收治進行外科手術治療的賁門癌病例46例，分別取癌組織和距離癌組織5cm以上非腫瘤性粘膜標本。建立患者臨床病理資料數據庫，包括年齡、性別、腫塊大小、分化程度和淋巴結轉移情況等。

1.2方 法

1.2.1試劑:鼠抗人KAI1/ CD82單克隆抗體(Senta Cruze)及免疫組化二步法試劑盒(福州邁新試劑公司)，AEC顯色，抗體均用PBS稀釋。

1.2.2免疫組化染色:采用EnVision二步法進行免疫組化染色。高壓修復，一抗(工作濃度1∶100)4℃冰箱過夜，滴加辣根過氧化物酶標記的二抗(Ig-HRP)，室溫孵育30min，PBS沖洗后AEC顯色，蘇木素復染。以切片中淋巴細胞胞膜著色為陽性內對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3結果判定:顯微鏡下觀察，KAI1/ CD82表達定位于細胞膜和細胞漿，陽性細胞染色呈棕黃或棕褐色。陽性染色細胞數評分標準:0分為陰性，1分為陽性細胞數≤25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為＞75%；陽性細胞的染色強度評分:0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。兩項得分的乘積0為陰性(-)，≤2分為弱陽性(+)，4～8分為陽性(++)，≥8分為強陽性(+++)。在統計學分析時，為避免不同病理醫生之間結果判定的差異，將染色結果分成兩組進行統計，分別是低表達組(陰性和1+)以及高表達組(2+和3+)[3]。

1.4統計學處理:采用SPSS16.0統計軟件(SPSS for Windows 16.0)對所得數據進行分析。組間定性資料比較采用X2檢驗。繪制患者的年齡和腫瘤最長徑ROC曲線以確定年齡和腫瘤最長徑分組的界值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1免疫組化檢測:KAI1/ CD82蛋白在不同賁門組織中的表達:KAI1/ CD82蛋白主要在細胞膜和細胞漿中表達。KAI1/ CD82蛋白在非腫瘤性粘膜中陽性表達率65.22%(1+以上)，其中高表達率為17.39%(2+和3 +)，在賁門癌組織中的陽性表達率為63.04%，其中高表達率為36.96%。KAI1/ CD82在非腫瘤性粘膜和賁門癌中的陽性率相近，但是在非腫瘤性粘膜中多數為低表達，而在賁門癌中的高表達率明顯升高，差別有統計學意義(P =0.035)(表1，圖1，2)。

圖1　非腫瘤性粘膜KAI1/ CD82的表達(400×)

圖2　賁門癌組織KAI1/ CD82的表達(400×)

表1　非腫瘤性粘膜和賁門癌組織KAI1/ CD82表達比較

2.2年齡與腫瘤最長直徑ROC曲線繪制:利用Youden index法繪制患者的年齡和腫瘤最長徑ROC曲線( receiver operating characteristic curve，ROC curve)，結果顯示當年齡＞56歲、最長徑≤5cm時，尤登指數分別是0.24和0.17為最大值，表明該點的敏感性和特異性均較好，故確定年齡和最長徑的切點值分別為56歲和5cm，利用這兩個切點值分組進行卡方檢驗(圖3，4)。

圖3　年齡ROC曲線

圖4　腫瘤最長徑ROC曲線

2.3KAI1/ CD82在賁門癌組織中的表達與臨床病理參數的相關性分析:KAI1/ CD82的表達與患者的年齡相關(p = 0.028)，患者的年齡越大癌組織中KAI1/ CD82的表達越強，而與患者的性別、瘤體最長徑、淋巴結轉移和分化程度等其它臨床病理因素無關(P＞0. 05)，見表2。

表2　KAI1/ CD82蛋白表達與賁門癌臨床病理參數的關系

瘤體最長徑　2.78　0.095 ≤5cm　17　13 ＞5cm　13　3分化程度　0.069　0.793高中分化　12　6低分化　19　8淋巴結轉移情況　0.065　0.798 無14　5 有14　6

3 討 論

KAI1/ CD82基因最早由美國國立環境健康研究院(NIEHS) Dong等從人類染色體上分離，并將其命名為KAI1，該基因定位于人類染色體11P11.2上，其編碼蛋白由267氨基酸殘基組成，因該蛋白和已發現的CD82結構相同，故kai-1基因又稱為KAI1/ CD82基因[4]。起初發現該基因的表達能抑制人前列腺癌細胞的轉移，認為該段基因具有抑制腫瘤轉移的功能。后來的研究發現其他惡性腫瘤如:黑色素瘤、肺小細胞癌、膀胱癌、胃癌、大腸癌等均存在該基因失活或表達異常，且與腫瘤發生遠處轉移具有相關性。近年來胃癌與KAI1/ CD82表達關系的研究報道相對較多，但尚存在爭論[5]，將賁門癌作為獨立疾病研究KAI1/ CD82表達的報道較少。

本研究結果示KAI1/ CD82蛋白在賁門癌組織中的陽性表達率為63.04%(29/46)，在非腫瘤性粘膜中的陽性表達率為65.22%(30/46)，兩者的陽性率接近。但是賁門癌組織中kai-1/ cd82的表達較非腫瘤性粘膜明顯增強，兩者的差異具有統計學意義(P＜0.05)。該結果與在結腸癌和皮膚黑色素瘤中的研究結果相似。但是還有一些研究則得出與本結果相反的結論，認為癌組織KAI1/ CD82蛋白的表達較正常組織下降。造成這種不同結果的原因尚不太清楚，可能與不同腫瘤細胞基因表達不同或標本來源的人群差異等有關。

在本研究中我們采用ROC曲線法為患者的年齡和腫瘤的最長徑分組確定界值，使分界值同時具備較好的敏感性和特異性。我們發現KAI1/ CD82蛋白的表達與患者的年齡相關，較年輕的患者KAI1/ CD82蛋白的表達較弱。有研究認為較年輕的賁門癌患者腫瘤生長速度較快，轉移發生較早，這是否與較年輕的患者KAI1/ CD82蛋白表達減弱有關還需進一步的研究。我們還發現腫塊大、分化差的賁門癌KAI1/ CD82蛋白的表達弱，與胃癌研究結論相似，該結果僅表現為百分率的差異，今后應擴大樣本量進一步驗證KAI1/ CD82蛋白的表達與賁門癌的演進的關系。

參考文獻:

[1] 陳志峰，董稚明.食管-胃交界腺癌地域發病特點與思考[J].中國腫瘤臨床，2011，38(1):57～60.

[2] Su M，Liu M，Tian DP，et al. Temporal trends of esophageal cancer during 1995-2004 in Nanao Island，an extremely high-risk area in China[J]. Eur Epidemiol 2007，22(1): 43～48.

[3] Chih-Hung Lin，Chia-Hsing Liu，Chien-Hui Wen，et al. Differential CD133 expression distinguishes malignant from benign papillary lesions of the breast[J]. Virchows Arch，2015，466(2):177～184.

[4] 杜興龍.Kai-1/ cd82基因在鼻咽癌組織中的表達和意義[J].2011.

[5] Knoener M，Krech T，Puls F，et al. Limited value of KAI1/ CD82 protein expression as a prognostic marker in human gastric cancer[J]. Dis Markers，2012，32(6):337～342.

Clinical Significance and Expressions of KAI1/ CD82 in Gastric Cardia Cancer

LIU Shuhui，ZHOU Songxia，et al
(Medical College of Shantou University，Guangdong Shantou 515041，China)

Abstract:Objective: To investigate the expression of KAI1/ CD82 in gastric cardia cancer tissue and its correlation with clinical pathological parameter. Method: KAI1/ CD82 expression level was detected in 46 cases of gastric cardia cancer tissue and the corresponding non-tumor gastric tissues by the immunohistochemistry. Result: The expression level of KAI1/ CD82 was significantly higher in gastric cardia cancer tissue compared with non-tumor gastric tissues(P＜0.05).The expression of KAI1/ CD82 had no relationship with histological grade.The expression of KAI1/ CD82 correlated with patient age(P＜0.05) and had no relationship with other pathological parameters. Conclusion: The expression of KAI1/ CD82 may participate in the development of gastric cardia cancer. Detecting KAI1/ CD82 will help to learn the mechanism of gastric cardia cancer development.

文獻標識碼:A

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.01.002

文章編號:1006-6233(2016)01-0004-04

*基金項目:廣東省醫學科研基金項目資助，(編號:B201511)