紅千層組織培養快繁技術研究

朱尾銀

摘 要：該研究以優選紅千層新萌發的嫩芽莖段為外植體進行組培快繁。結果表明：紅千層的啟動培養基以MS+6-BA1.0mg/L + NAA0.2～0.3mg/L最為合適；增殖培養基以改良MS+6-BA0.6mg/L +KT0.2mg/L +NAA0.2mg/L較好；生根培養基以改良1/3MS+NAA0.2mg/L+IBA0.25mg/L+Ac0.15g/L為最佳，生根率可達95%以上。

關鍵詞：紅千層；離體培養；莖段

中圖分類號 S79 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）10-0094-03

Tissue Culture and Rapid Propagation of Callistemon rigidus

Zhu Weiyin

（The Experiment Center of Forestry Science and Technique of Fujian Province，Nanjing 363600，China）

Abstract：Using the stem-segment with single bud as the explant，we studied the rapid propagation of Callistemon rigidus. The results indicated that the suitable culture medium at different culture stages was：initial medium MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L，the subculture medium should be MS+6-BA0.6mg/L +KT0.2mg/L +NAA0.2mg/L and the best rooting medium was 1/3 MS+NAA0.2mg/L +IBA0.25mg/L +Ac0.15g/L，the rooting rate was above 95%

Key words：Callistemon rigidus；In vitro culuture；Stem section

紅千層Callistemon rigidus R.Br，屬桃金娘科紅千層屬常綠樹種，小喬木，原產澳大利亞，樹皮堅硬，灰褐色；嫩枝有棱，葉片堅革質，線形，先端尖銳，葉柄極短；穗狀花序生于枝頂，萼管略被毛，萼齒半圓形，近膜質；花瓣綠色，卵形，長6mm，寬4.5mm，有油腺點；雄蕊長2.5cm，鮮紅色，花藥暗紫色，橢圓形；花柱比雄蕊稍長，先端綠色，其余紅色；屬陽性樹種，喜溫暖、濕潤氣候，能耐烈日酷暑和嚴寒，抗性好，病蟲害少，耐貧瘠，具生長快、萌芽力強、耐修剪等優點。紅千層是一種優良的園林及盆栽觀賞植物，其樹冠茂密，樹形美麗，花密集聚生，雄蕊伸出，紅艷奪目，十分美麗奇特，適宜作為庭院美化觀花樹、行道樹、園林樹、風景樹等，還可修剪成高貴盆景，極具觀賞價值，近幾年來其園林觀賞價值受到人們的重視，在園林工程中得到了廣泛應用。為了大量繁殖苗木，盡快滿足社會對紅千層優質苗木的旺盛需求，國內對紅千層的組織培養已進行了不少的探索，并取得了一定的成效[1-2]。本研究開展了不同基礎培養基與激素類型組合的對比試驗，通過誘導系數、增殖系數、生根率的比較，進行誘導培養基、增殖培養基、生根培養基的篩選，以實現紅千層組培快繁技術優化，提高組培效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 以紅千層春季萌發的嫩芽為外植體，消毒后接種于誘導培養基，參加誘導培養基對比試驗；以誘導培養基上生長健壯的芽為增殖培養基對比試驗接種材料；以增殖培養基上增殖生長健壯的芽，為生根培養基對比試驗接種材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒 先用洗衣粉清洗表層，然后用自來水沖洗干凈再進行消毒，用75%酒精消毒30～60s，無菌水漂洗2次，1%次氯酸鈉處理10～15min，無菌水漂洗5次以上。

1.2.2 培養條件 接種后材料放在（27±2）℃培養室中的培養，每天光照時間10～12h，光照強度為1 500～2 000lx。

1.2.3 試驗設計 誘導培養對比試驗、增殖培養對比試驗包含6個處理（見表1、表2），生根培養對比試驗包含3個處理（見表3）。各種培養基中，糖30g/L（生根培養基糖25g/L），卡拉膠5.4g/L，pH值5.8～5.9。各試驗均設置3次重復。

1.3 數據采集與數據分析 誘導培養基對比試驗：接種后每隔5d觀察1次出芽情況，并在25d時調查誘導芽數，計算誘導系數；增殖培養基對比試驗：接種后每隔5d觀察1次芽的生長情況，并在30d時調查增殖芽數，計算增殖系數；生根培養基對比試驗：接種后每隔5d觀察1次生根情況，并在15d時調查生根率。對試驗誘導系數、增殖系數、生根率等數據進行單因素方差分析和多重比較，多重比較采用新復極差法。

2 結果與分析

2.1 不同誘導培養基對誘導效果的影響 從表1可以看出，誘導系數變化幅度為1.38～2.87，不同誘導培養基的誘導效果差異很大。方差分析結果表明，F=8.34>F0.01（5，17）=2.81，不同誘導培養基的誘導系數間存在極顯著差異。多重比較結果表明，A3、A4間無顯著差異，誘導系數最高，與A1、A2、A5、A6間差異均達到顯著或極顯著水平，A1、A2間無顯著差異，A5、A6間也無顯著差異。由此可見，本試驗設計中，NAA濃度不同，對誘導系數的影響不明顯，差異主要由基礎培養基引起。MS培養基對紅千層誘導的培養，誘導出的芽大部分是單芽，且萌芽的時間較長；改良MS培養基中不但誘導出的芽為叢生芽且萌芽時間短，在3/4MS培養基中誘導出的芽部分出現叢生芽，但大部分是單芽，萌芽時間相對于改良MS偏長。誘導出叢生芽，是提高誘導系數的關鍵，因此，誘導培養基適宜采用改良MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L。

2.2 不同增殖培養基對增殖效果的影響 從表2可知，不同增殖培養基的增殖系數差異較大，變化幅度為1.95～3.73。方差分析結果表明，F=10.13>F0.01（5，17）=2.81，不同增殖培養基的增殖系數間存在極顯著差異。多重比較結果（表2）表明，B4增殖效果最好，增殖系數達到3.73，與其他增殖培養基間均存在顯著或極顯著差異；B3次之，與其它增殖培養基間也均存在顯著或極顯著差異。B1、B2間無顯著差異，B5、B6間無顯著差異，B1、B2與B5、B6間存在顯著或極顯著差異，說明增殖系數的大小，受基礎培養基的影響較大。在改良MS培養基中繼代周轉周期為26d，芽生長比較壯，在MS和3/4MS培養基中周轉周期偏長一點，需要30d，芽生長偏細。B3、B4間差異顯著，說明在改良MS中，KT激素的添加對提高增殖系數有益。本試驗中，改良MS+6BA0.6mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.2mg/L是最佳增殖培養基。

2.3 不同生根培養基對生根效果的影響 把生長一致的紅千層小苗接種到生根培養基上培養，發現3種培養基均能誘導出根，生根率變化范圍為63.6%～95.8%，生根效果存在較大差異。方差分析結果表明，F=23.58>F0.01（2，8）=8.65，不同生根培養基的生根率間差異達統計學上的極顯著水平。多重比較結果（表3）表明，C1、C2、C3間均存在顯著或極顯著差異。C2生根率達95.8%，出根時間短只需10d，且根系粗壯，平均4根以上；而另外2種培養基雖能生根，但時間較長，生根率低，平均根數少，不利于移栽。因此，生根培養基以C2為最佳。

3 結論與討論

3.1 結論 試驗結果表明，6種誘導培養基中，A3、A4的誘導效果最好；6種增殖培養基中，以B4為最佳，增殖系數達到3.73，與其它增殖培養基間均存在顯著或極顯著差異；3種生根培養基中，以C2的生根率最高，達到95.8%，與C1、C3的生根率間差異顯著或極顯著。因此，本試驗中，紅千層組培的最佳誘導培養基為改良MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L，最佳增殖培養基為改良MS+6BA0.6mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.2mg/L，最佳生根培養基為改良1/3MS+NAA0.2mg/L+IBA0.25mg/L+Ac0.15g/L。

3.2 討論 紅千層組織培養是解決紅千層種苗來源的一個重要途徑，是實現紅千層種苗產業化生產的基礎。雖然目前已有少量有關紅千層組織培養獲得成功的文獻報道，但不同學者間的觀點還存在一定的分歧[2-3]。例如，紅洪如（2005）報道了紅千層的離體培養及組培快繁技術，認為繼代和增殖培養基以MS+6BA1mg/L+NAA0.25mg/L為最佳。本試驗中發現，基礎培養基是影響增殖效果的最主要因素，改良MS的增殖效果顯著高于MS，而所添加的激素組合的作用，在參試的幾個組合中，表現不明顯，這有待于進一步驗證。在生根試驗中，相同的激素添加下，不同的基礎培養基間的生根率差異達到極顯著差異水平，改良1/3MS分別是1/2MS、1/3MS的1.34倍和1.51倍，說明基礎培養基對紅千層的生根影響極大，這方面也有待于進一步研究。

參考文獻

[1]鄭耀恩.淺談紅千層的栽培與大苗移植[J].中國園林，1993，9（3）：35，60.

[2]江洪如，余發新，劉騰云.紅千層的離體培養及快速繁殖[J].園藝學報，2005，32（3）：541-543.

[3]龔偉，宮淵波，胡庭興，等.紅千層離體培養和植株再生[J].植物生理學通訊，2004，1（40）：66.

（責編：張宏民）