千斤拔的二氯甲烷提取物化學成分研究

程靜怡，黃蘭芳

（1.中南大學護理學院；2.中南大學化工學院：長沙 410083）

蔓性千斤拔，分布在中國南部及西南部[1]。具有壯腰健腎、活血通絡和消瘀解毒等功效，用于治療風濕骨痛、腰肌勞損、跌打損傷和婦女白帶多等癥[2]。千斤拔含有黃酮類、糖類和揮發油等活性成分，具有較強的藥理活性，因而研究千斤拔化學成分有很重要的意義[3-7]。本研究采用加速溶劑萃取法提取千斤拔化學成分，用GC-MS結合化學計量學分辨法對其化學成分進行研究，以期為千斤拔的進一步開發和藥理藥效研究奠定物質基礎[8-12]。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

Shimadzu 2010型氣相色譜-QP2010型質譜聯用儀（GC-MS），電子天平（FR2202CN），ASE200快速溶劑萃取儀，RapidVap N 2/48氮氣蒸發器。

蔓性千斤拔購于長沙藥店，二氯甲烷為分析純，二次水為實驗室自制。

1.2 提取方法

將2.0 g千斤拔適當破碎后，放入ASE200快速溶劑萃取儀的萃取池中，用二氯甲烷進行萃取，選定萃取溫度185℃，泵入萃取池溶劑量為池體積的100%，萃取30 min，將萃取后得到的提取液用快速濃縮儀濃縮到約1.5 mL。

1.3 GC-MS分析條件

OV-101石英毛細管色譜柱30 m×0.25 mm，液膜厚度0.25 μm，分流體積比10:1，汽化溫度280℃，接口溫度230℃。程序升溫：起始溫度50℃，維持8 min，以8℃/min升至250℃，維持10 min；載氣為氦氣，體積流量0.6 mL/min。離子源為EI，離子源電子能量70 eV，離子源溫度230℃；倍增電壓1.20 kV；掃描范圍40～600 amu，掃描速率0.2 s/次。

1.4 數據分析

數據分析在Intel Pentium IV計算機上進行，所有程序用Matlab 6.5編寫。應用HELP法對二維數據進行解析以得到各組分的純色譜和質譜[9]；用所分辨的質譜在NIST標準質譜庫中進行檢索以定性分析，采用總體積積分和歸一化法對各化合物的相對含量進行分析。

2 結果與討論

2.1 定性分析

在上述GC-MS條件下，獲得千斤拔二氯甲烷提取物化學成分的總離子流譜如圖1。

由圖1可知，提取物為一個復雜的分析體系，盡管優化了色譜條件，但也有些色譜峰出現重疊現象，如用NIST質譜庫直接定性則相似程度很低。采用HELP法對所有重疊峰進行分辨，定性準確度顯著提高[9]。

圖1 千斤拔二氯甲烷提取物的色譜總離子流譜Fig 1 The TIC of dichloromethane extracts of Fleningia philippinensis

以峰簇C（t=11.70～11.95 min）為例來說明數據處理過程。經PCA法扣除背景和基線漂移后，用固定尺寸窗口漸進因子分析法（FSMWEFA）獲得秩圖[10]。依秩圖用HELP法直接分辯峰簇C中各組分純質譜，得到各組分純質譜后，可獲其純色譜，如圖2。

圖2 峰簇C原色譜和分辯后色譜Fig 1 The original TIC(A)and the resolved chromatogram of cluster C(B)

由圖2可知，用NIST質譜庫定性，1和2分別為2,5-二丁基呋喃和乙酸龍腦酯，相關系數分別為0.961和0.947，而3因相關系數太低而未能定性。同樣地，采用類似方法得到其它組分定性結果，結果如表1。

2.2 定量分析

在解析出各組分的純色譜和質譜以后，采用總體積積分和歸一化法得到各組分的定量結果，定量組分占總質量的89.41%，結果也列于如表1。其中長葉烯、香芹酚、杉木烯和橘烯含量依次最高。

3 結論

以二氯甲烷為溶劑，采用加速溶劑萃取法提取千斤拔化學組分，提取物用GC-MS檢測，結合化學計量學組合方法，對其化學組分進行系統研究。與單純采用相似度匹配來處理數據的方法相比，定性定量結果的準確度顯著提高。共分辨出73個色譜峰，其中得到54個組分的定性結果，定性組分含量占總質量的89.41%。

千斤拔二氯甲烷提取物中主要組分為烯類和酚類，主要組分為長葉烯、香芹酚、杉木烯和橘烯等。方法簡便快速，所得結果能為千斤拔樣品指紋圖譜建立提供基礎，以用于千斤拔的識別和質量控制，也為開發和利用該千斤拔提供科學依據。

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