晚期胃癌患者血清miR-21和let-7i水平變化與奧沙利鉑化療療效的關系

羅麗華, 幸茂輝, 冉瑞智, 羅流芳

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫院, 湖北 恩施, 445000)

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晚期胃癌患者血清miR-21和let-7i水平變化與奧沙利鉑化療療效的關系

羅麗華, 幸茂輝, 冉瑞智, 羅流芳

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫院, 湖北 恩施, 445000)

摘要:目的探討晚期胃癌患者血清miR21、let7i的水平變化與奧沙利鉑化療療效的關系。方法選取本院腫瘤科收治的79例晚期胃癌患者作為病例組，同期60例健康體檢者作為對照組。測定2組外周血血清中miR21、let7i的水平，病例組采用奧沙利鉑方案(奧沙利鉑+卡培他濱或者5氟尿嘧啶+亞葉酸鈣+奧沙利鉑)進行化療，分析miR21、let7i與患者臨床病理特征、化療效果的關系。結果化療前，病例組患者的血清miR21測定值顯著高于對照組(P<0.05); 化療前, ECOG(0～1)級、高+中分化程度晚期胃癌患者的血清miR21測定值顯著低于ECOG 2級、低分化患者(P<0.05); 化療后, CR+PR組患者的血清miR21水平顯著低于SD+PD組患者(P<0.05)。CR+PR組(低水平miR21)患者的中位生存時間顯著長于SD+PD組(高水平miR21)(P<0.05)。結論晚期胃癌患者血清miR21的水平與ECOG分級、組織分化程度、療效及預后有關。

關鍵詞:胃癌; miR21; let7i; 奧沙利鉑

胃癌是臨床常見的惡性腫瘤類型。由于環境污染、身心壓力增加、飲食結構改變等原因，胃癌的發病率逐年遞增。中國是胃癌的高發地區，全世界約有42%的胃癌發生在中國。奧沙利鉑化療方案是治療胃癌的常用方案，可控制病情、抑制癌細胞的生長繁殖[1]。miRNA是一類內源性非編碼RNA，長度為21～25個核苷酸，通過類似癌基因、抑制癌基因等方法調控惡性腫瘤的發生、進展和轉歸，因此miRNA水平可在一定程度上反映癌癥患者的病情嚴重程度、藥物治療效果和預后情況[2]。檢測miR21、let7i可在一定程度上反映奧沙利鉑化療方案的療效。本研究探討晚期胃癌患者血清miR21、let7i的水平變化與奧沙利鉑化療方案的關系，現將研究結果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取本院腫瘤科收治的79例晚期胃癌患者作為病例組，同期60例健康體檢者作為對照組。病例組患者年齡45～76歲，平均年齡(55.5±11.9)歲，其中男45例，女34例，體力狀況ECOG評分標準0～2度；組織學分級：高分化16例、中分化28例、低分化35例；遠處轉移部位：肝臟39例、肺部16例、胰腺9例、腎上腺7例、骨11例。對照組年齡42～78歲，平均年齡(53.1±13.2)歲，其中男37例，女23例。2組的年齡、性別構成差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2納入及排除標準

納入標準: ① 所有晚期患者的診斷主要依據取病理組織活檢; ② 病例組患者入組前未接受過放化療治療; ③ 患者預計生存時間>3個月; ④ 具有可測量的影像學病灶; ⑤ 研究方案獲得醫學倫理委員會及患者本人的知情同意。排除標準: ① 合并其他部位原發性腫瘤性疾病的患者; ② 入組前接受過放化療治療、免疫治療的患者; ③ 預計生存期短于3個月的患者; ④ 對本研究化療藥物具有嚴重不耐受的患者。

1.3化療方法

采用奧沙利鉑方案進行化療，靜脈滴注奧沙利鉑85 mg/m2，2 h內滴完，第1天；口服卡培他濱1 000 mg/m2，2次/d，第1～14天。或者靜脈滴注奧沙利鉑85 mg/m2，2 h內滴完，第1天；亞葉酸鈣400 mg/m2，2 h內滴完，第1天；滴完后靜脈推注5-氟尿嘧啶400 mg/m2，后續泵注5-氟尿嘧啶2 400 mg/m2。以3周為1個療程。

1.4血清miR21、let7i的水平測定(熒光定量PCR法)

取靜脈血離心后取上清液加入氯仿反應，離心后取水相加入異丙醇，棄去上清液，取RNA沉淀。采用熒光定量PCR儀，退火溫度55～62℃，觀察目標基因與內參標準曲線斜率和相關系數。使用特異性探針對miR21、let7i進行實時定量PCR檢測。循環參數：95℃預變性5 min；95℃變性5 s，60退火延伸30 s，35個循環，每管3個復孔，結果根據內參校正[3]。

1.5化療的近期療效

參照RECIST實體瘤療效評價標準分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩定(SD)、疾病進展(PD)。CR：可見病灶完全消失；PR：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小達到50%以上；SD：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小<50%，增大<25%；PD：患者出現1個或多個病灶的腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積>25%。總有效率=(CR+PR+SD)/本組樣本量×100%。

1.6統計學方法

數據分析采用SAS 9.0軟件包處理，對于正態分布的計量指標采用均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗；生存分析采用Kaplan-meier法，中位生存時間比較采用Log-rank法。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.12組研究對象血清miR21、let7i的水平比較

化療前，病例組患者的血清miR21測定值為(1.4308±0.4120)2-△△t，顯著高于對照組的(0.5214±0.1127)2-△△t(P<0.05)；病例組和對照組血清let7i的水平為(1.9862±0.6905) 2-△△t和(1.8709±0.3384) 2-△△t，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2晚期胃癌患者血清miR21的水平與患者的臨床病理因素、化療效果的關系

化療前，ECOG(0～1)級、高+中分化程度晚期胃癌患者的血清miR21測定值顯著低于ECOG 2級、低分化患者(P<0.05)，血清miR21測定值在不同年齡、性別、CEA水平、CA-199水平分組患者間差異無統計學意義(P>0.05)；經過化療治療，達到CR的有0例患者、PR的有31例患者、SD的有39例患者、PD的有9例患者，化療后CR+PR組患者的血清miR21水平顯著低于SD+PD組患者(P<0.05)。見表1。

表1　血清miR21的水平與患者的臨床病理因素、

與同一指標的另一亞項比較, *P<0.05。

2.3不同血清miR21的水平與晚期胃癌患者遠期預后的關系

CR+PR組(低水平miR21)患者的中位生存時間為13.7個月，顯著長于SD+PD組(高水平miR21)的9.2個月(Log-rank χ2=9.068,P<0.05)。見圖1。

圖1 不同血清miR21的水平胃癌患者的生存函數圖

3討論

胃癌是消化道的常見腫瘤，與不良飲食習慣、精神因素、過度勞累等諸多因素有關，嚴重危害患者的身心健康。由于胃癌早期缺乏特異性癥狀，因此約有1/3以上的患者在確診時已到達晚期[4]。胃癌是一種對化療敏感的惡性腫瘤，目前臨床一般采用根治性手術聯合化療治療本病。對于胃癌的化療，目前尚無標準方案，已有的臨床試驗和實驗室試驗[5]均證實鉑類對胃癌具有良好的治療效果，以奧沙利鉑與氟尿嘧啶為基礎的化療方案在臨床應用較多。奧沙利鉑以腫瘤細胞的DNA為作用靶點，鉑原子與DNA分子形成鏈內、鏈間交聯，從而阻斷腫瘤細胞DNA的復制和轉錄[6]。卡培他濱是氟尿嘧啶的新型衍生物，通過口服給藥，在小腸迅速吸收，在肝內經羧酸酯酶作用催化生成5-氟尿嘧啶而發揮抗癌效果[7]。兩種藥物聯用，作用途徑互補，可起到協同增效的作用。

近年來，隨著對抗癌藥物的研究不斷深入，如何篩選出高抗癌活性、低毒性的抗癌藥物已成為研究重點[8]。在化療前進行相應的篩選，將奧沙利鉑治療方案應用于預期對該方案敏感的患者，以避免無效化療延誤病情，造成個人經濟和社會醫療資源的浪費，也避免給患者造成不必要的毒副反應傷害[9]。大量的研究結果[10]證實，腫瘤組織中的某些miRNA異常表達與化療敏感性存在著一定的相關性。

目前臨床對于血清miR21與化療效果相關性的臨床研究較少，大多數研究都是通過取腫瘤組織進行勻漿、離心，提取RNA進行檢測[11]。但是腫瘤組織需要進行穿刺、手術切除等手段獲取，對患者的創傷較大，尤其是不愿意接受手術治療者，標本的獲取比較困難[12]。此外，由于腫瘤組織的異質性，穿刺獲取的標本往往并不能代表整塊腫瘤組織的情況。因此，抽取靜脈血進行血清miR21檢測不失為一種好的方法。本研究中，化療前病例組患者的血清miR21測定值顯著高于正常對照組，提示miRNA在胃癌患者血清中呈現高表達，與臨床報道的miRNA在胃癌患者組織中呈現高表達一致，將血清miR21作為反映胃癌患者病情和治療效果的評價指標是可行的。病例組患者的血清let7i水平與正常對照組無顯著差異，提示血清let7i水平不能作為反映胃癌患者病情和治療效果的評價指標。

將胃癌患者根據分化程度進行分組比較，發現ECOG(0～1)級、高+中分化程度晚期胃癌患者的血清miR21測定值顯著低于ECOG 2級、低分化患者，提示ECOG(0～1)級、高+中分化程度晚期胃癌患者的治療反應性可能會更好。經過奧沙利鉑方案化療后，CR+PR組患者的血清miR21水平顯著低于SD+PD組患者，提示采用CR+PR化療方案的效果更好。隨訪觀察發現，CR+PR組(低水平miR21)患者的中位生存時間顯著長于SD+PD組(高水平miR21)患者，提示miR21可作為評估患者預后的一項指標，低水平miR21患者的預后明顯優于高水平miR21患者。

參考文獻

[1]張彤, 任國平, 張蕊, 等．紫杉醇、奧沙利鉑、氟尿嘧啶方案聯合自體CIK細胞輸注治療Ⅳ期胃癌的療效與安全性研究[J]. 中國全科醫學, 2012, 15(21): 2418-2420.

[2]姬穎華, 楊曉煜, 陳美玲, 等. XELOX方案與SOX方案治療老年Ⅳ期腸型胃癌療效對比[J]. 中國老年學雜志, 2015(10): 2723-2724.

[3]周頎, 蔣敬庭, 吳昌平, 等. 微小RNA-21在含奧沙利鉑的二藥聯合方案治療晚期胃癌患者中的意義[J]. 中華實驗外科雜志, 2013, 30(2): 252-255.

[4]Sauli Elingarami, Ming Liu, Jing Fan, et al. Applications of Nanotechnology in Gastric Cancer: Detection and Prevention by Nutrition[J]. Journal of nanoscience and nanotechnology, 2014, 14(1): 932-945.

[5]杜靜, 黃偉, 陳有為, 等. 微RNA-101調控人胃癌細胞系增殖、遷移、侵襲的體內外研究[J]. 中華消化雜志, 2015(8): 510-515.

[6]李立平, 吳煒景, 吳偉洪, 等. MiR-21、幽門螺旋桿菌CagA與胃癌相關性研究進展[J]. 華南國防醫學雜志, 2012, 26(4): 389-391.

[7]郭鵬輝, 杜艷蕾, 聶玉強, 等. miRNA-191在胃癌組織中的表達[J]. 廣東醫學, 2012, 33(11): 1560-1562.

[8]孫鐵為, 陳曉寧, 劉軍, 等. 胃癌中微小RNA表達譜及miR-429表達水平的研究[J]. 中華實驗外科雜志, 2012, 29(3): 385-387.

[9]凌萌智, 黃治國, 劉揚河, 等. mircoRNA-21在胃癌患者血漿中的表達及其與外周血Th1與Th2細胞關系[J]. 中國老年學雜志, 2015, (16): 4475-4476.

[10]周旭軍, 鄧斌, 關秀軍, 等. 血清CEA、CA125、CA19-9和CA72-4聯合檢測在胃癌診斷及治療中的意義[J]. 現代儀器與醫療, 2015, 21(3): 95-97.

[11]周頎. microRNA-21在含奧沙利鉑的二藥聯合方案治療晚期胃癌患者中的意義[D]. 蘇州大學, 2012.

[12]Zhang T, Zheng Z, Liu Y. et al. Overexpression of methionine adenosyltransferase II alpha (MAT2A) in gastric cancer and induction of cell cycle arrest and apoptosis in SGC-7901 cells by shRNA-mediated silencing of MAT2A gene[J]. Acta Histochemica: Zeitschrift fur Histologische Topochemie, 2013, 115(1): 48-55.

Relationship between changes of serum miR-21, let-7i and efficacy of oxaliplatin chemotherapy in patients with advanced gastric cancer

LUO Lihua, XING Maohui, RAN Ruizhi, LUO Liufang

(TheCentralHospitalofEnshiAutonomousPrefecture,Enshi,Hubei, 445000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the relationship between changes of serum miR21, let7i and efficacy of oxaliplatin chemotherapy in patients with advanced gastric cancer. MethodsA total of 79 patients with advanced gastric cancer were designed as case group, and 60 normal people were designed as control group. Serum miR21 and let7i levels in peripheral blood were detected between two groups. The case group was treated with oxaliplatin(oxaliplatin+capecitabine or 5-fluorouracil+leucovorin + oxaliplatin)chemotherapy, and relationship between miR21, let7i and clinicopathological features, efficacy of chemotherapy was analyzed. ResultsBefore chemotherapy, serum miR21 value in the case group was significantly higher than that in the control group (P<0.05). The serum miR21 value in patients with ECOG (0～1) and middle-high advanced gastric cancer was significantly lower than that in patients with ECOG 2 and low advanced gastric cancer(P<0.05). The serum miR21 value in group CR+PR was significantly lower than that in group SD+PD (P<0.05). The median survival time in group CR + PR (low miR21) was significantly longer than that in group SD+PD (high level miR21) (P<0.05). ConclusionSerum miR21 level was correlated with ECOG grade, histological differentiation, efficacy of chemotherapy and prognosis in patients with advanced gastric cancer.

KEYWORDS:gastric cancer; miR21; let7i; oxaliplatin

中圖分類號:R 735.2

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)09-060-04

DOI:10.7619/jcmp.201609017

通信作者:幸茂輝

收稿日期:2015-12-15