青藏高原蕨麻種質資源遺傳多樣性POD同工酶分析
2016-06-03 11:12:20劉賀賀蔣紅霞白世俊包錦淵韋梅琴李軍喬
西北農業學報 2016年3期
劉賀賀,蔣紅霞,富 貴,白世俊,包錦淵,韋梅琴,李軍喬
(1.青海民族大學 化學化工學院，西寧 810007；2.青海省生物技術與分析測試重點實驗室，西寧 810007；3.青海大學 農牧學院，西寧 810016)
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青藏高原蕨麻種質資源遺傳多樣性POD同工酶分析
劉賀賀1,2,蔣紅霞1,2,富貴1,2,白世俊1,2,包錦淵1,2,韋梅琴3,李軍喬1,2
(1.青海民族大學 化學化工學院，西寧810007；2.青海省生物技術與分析測試重點實驗室，西寧810007；3.青海大學 農牧學院，西寧810016)
摘要采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術分析75份蕨麻過氧化物同工酶，結果與形態學標記、細胞水平、分子標記研究的結果一致，顯示蕨麻的遺傳多樣性豐富。證實蕨麻具有豐富遺傳變異,為合理保護與科學利用蕨麻資源提供科學依據。檢測顯示,蕨麻葉片過氧化物同工酶電泳共出現14條酶帶；酶帶多態位點百分率為100%；NTSYSpc 2.1軟件計算的遺傳相似系數為0.214～1.000，平均值為0.681；以遺傳相似系數為基礎，采用非加權類平均法進行聚類分析，在相似系數為0.67時分為2大類，第1類為蕨麻，第2類為鵝絨委陵菜。蕨麻種質資源遺傳多樣性及遺傳變異均較豐富。說明，蕨麻豐富的遺傳多樣性是在青藏高原復雜的地理環境中長期進化的結果。
關鍵詞蕨麻；遺傳多樣性；過氧化物同工酶；聚丙烯酰胺凝膠電泳；相似系數；多態位點百分率
蕨麻(Potentillaanserina)屬薔薇科委陵菜屬(Potentilla)，是鵝絨委陵菜(PotentillaanserinaL.)的變種，以葉為鋸齒狀奇數羽狀復葉，匍匐莖，單生小花，多年生草本植物為特征，因葉片被有白色絨毛而得名，生河岸、路邊、山坡草地及草甸，海拔500～4 100 m，在甘肅、青海、西藏高寒地區，根部膨大，含豐富淀粉[1]。蕨麻是藥食兼用的保健品，能夠提高機體免疫能力，具有抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗菌、抗病毒、抗真菌、抑制腫瘤、保肝護肝、降低血脂及膽固醇等功效[2]。傳統形態學分類上，塊根膨大的為蕨麻，塊根不膨大的為鵝絨委陵菜。
種質資源是遺傳育種的物質基礎，對種質資源遺傳多樣性和親緣關系的正確評價是合理利用種質資源的前提。遺傳多樣性是確保物種延續和不斷進化的關鍵，開展蕨麻遺傳多樣性研究，對蕨麻品種擴大遺傳基礎和選育新品種均有重要作用。2010年開始，蕨麻研究中心利用形態學標記、細胞學研究和分子標記的方法研究蕨麻種質資源的遺傳多樣性，表明蕨麻不僅具有豐富的遺傳多樣性，而且蕨麻的遺傳變異較高。通常情況下，植物的表現型與基因型一致，3種方法分析顯示大部分的蕨麻材料同樣符合這一規律，少數蕨麻材料存在不一致的情況，為證實差異的存在，筆者應用生理生化標記的方法研究蕨麻種質資源的遺傳多樣性。
同工酶的酶譜同等位基因之間有明確的對應關系，因此成為一種十分有效的遺傳多樣性的檢測標記[3-4]。 同工酶分析技術從蛋白質水平反映物種的遺傳差異，且材料來源豐富、實驗技術簡單、結果易于比較，是一種十分有效的遺傳標記[5]。丁玲等[6-7]、沈鏑等[8]和易剛強等[9]采用同工酶的方法分析了菊花、芋和梔子的遺傳多樣性，得到理想的結果。本試驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術，分析75份蕨麻種質資源進行過氧化物同工酶(POD)酶譜差異研究，從蛋白質水平上對遺傳多樣性進行分析，以期進一步證實蕨麻種質資源的遺傳多樣性及復雜的遺傳變異，為合理保護與科學利用蕨麻資源提供科學依據。
1材料與方法
1.1試驗材料
蕨麻分布廣泛，生長區域地理氣候條件差別較大，很難同時采集到不同地區同一個生長期內的野生蕨麻，課題組為了規避這一問題，從2008年開始逐步采集中國各地區的蕨麻進行移栽，目前已在青海省互助縣、湟源縣分別建立了2個蕨麻種質資源圃，共有種質資源128份。有些地區的蕨麻種質資源剛剛成活或植株僅有1～2株，故選擇有一定區域代表性且生長旺盛的75份種質資源進行同工酶測定。選取的75份蕨麻種質資源材料詳見表1。
取幼苗期生長健壯的健康完整植株，剪取幼嫩葉片1.0～2.0 g，使用蒸餾水簡單沖洗葉片上的泥土和其他雜物，放入冰盒內低溫保存。采集當天帶回實驗室，放入4℃冰箱內遮光保存，3 d內完成同工酶的提取。
表1 供試蕨麻種質材料
(續表1Continued table 1)
序號No.樣品編號Samplenumber地點Location海拔/mAltitude經度Longitude緯度Latitude塊根是否膨大Swollenrhizomeornot40化隆-02 Hualong-02青海海東 HaidongQinghai2621102°17.295'E36°02.487'N否 No41興海-01 Xinghai-01青海海南州 HainanQinghai344699°55.883'E35°39.998'N否 No42興海-02 Xinghai-02青海海南州 HainanQinghai345399°55.908'E35°39.970'N是 Yes43貴德-02 Guide-02青海海南州 HainanQinghai2795101°19.588'E35°51.040'N否 No44貴南-01 Guinan-01青海海南州 HainanQinghai3359101°05.599'E35°30.091'N是 Yes45河南-03 Henan-03青海黃南州 HuangnanQinghai3566101°42.719'E34°42.876'N是 Yes46河南-04 Henan-04青海黃南州 HuangnanQinghai3625101°47.097'E34°37.760'N是 Yes47久治-01 Jiuzhi-01青海果洛州 GuoluoQinghai3983101°05.663'E33°25.852'N是 Yes48久治-02 Jiuzhi-02青海果洛州 GuoluoQinghai3869101°18.054'E33°23.342'N是 Yes49久治-03 Jiuzhi-03青海果洛州 GuoluoQinghai3631101°28.321'E33°25.508'N是 Yes50平安-02 Ping`an-02青海海東 HaidongQinghai3266101°20.528'E37°37.522'N否 No51湟源-01 Huangyuan-01青海海北州 HaibeiQinghai2927101°01.570'E36°51.399'N否 No52湟源-02 Huangyuan-02青海海北州 HaibeiQinghai2915101°11.165'E36°32.503'N否 No53祁連-灰葉 Qilian-Greyleaf青海海北州 HaibeiQinghai2928100°23.006'E38°04.296'N否 No54祁連-04 Qilian-04青海海北州 HaibeiQinghai3634100°13.359'E38°03.005'N是 Yes55循化-01 Xunhua-01青海海東 HaidongQinghai2639102°18.535'E35°44.638'N否 No56循化-02 Xunhua-02青海海東 HaidongQinghai3255102°14.507'E35°42.038'N否 No57循化-03 Xunhua-03青海海東 HaidongQinghai2527102°07.121'E35°36.311'N否 No58循化-04 Xunhua-04青海海東 HaidongQinghai2760102°10.442'E35°33.643'N否 No59玉樹-01 Yushu-01青海玉樹州 YushuQinghai422596°34.639'E33°12.087'N是 Yes60玉樹-02 Yushu-02青海玉樹州 YushuQinghai444496°42.716'E33°07.125'N是 Yes61玉樹-13 Yushu-03青海玉樹州 YushuQinghai421196°45.528'E32°53.083'N否 No62玉樹-18 Yushu-18青海玉樹州 YushuQinghai377897°04.816'E33°22.243'N是 Yes63玉樹-20 Yushu-20青海玉樹州 YushuQinghai446197°13.785'E33°20.760'N是 Yes64黃南-03 Huangnan-03青海黃南州 HuangnanQinghai3821101°26.603'E36°21.428'N是 Yes65黃南-04 Huangnan-04青海黃南州 HuangnanQinghai2909101°33.078'E36°16.371'N否 No66黃南-05 Huangnan-05青海黃南州 HuangnanQinghai2795101°19.588'E35°51.040'N否 No67黃南-06 Huangnan-06青海黃南州 HuangnanQinghai2795101°19.588'E35°51.040'N否 No68黃南-07 Huangnan-07青海黃南州 HuangnanQinghai3359101°05.599'E35°30.091'N是 Yes69黃南-08 Huangnan-08青海黃南州 HuangnanQinghai3292100°59.647'E35°30.529'N是 Yes70黃南-09 Huangnan-09青海黃南州 HuangnanQinghai3290100°44.773'E35°14.590'N是 Yes71黃南-10 Huangnan-10青海黃南州 HuangnanQinghai3371100°52.105'E35°12.951'N否 No72甘德-01 Gande-01青海果洛州 GuoluoQinghai4225100°05.053'E34°03.436'N是 Yes73甘德-02 Gande-02青海果洛州 GuoluoQinghai404599°53.085'E34°57.463'N是 Yes74達日-02 Dari-02青海果洛州 GuoluoQinghai402899°48.116'E33°37.535'N是 Yes75大通-02 Datong-02青海海北州 HaibeiQinghai2898101°27.368'E37°14.432'N否 No
1.2試驗方法
1.2.1酶液的制備稱蕨麻葉片1.0 g，蒸餾水沖洗3次，濾紙吸干后剪碎。放入4 ℃預冷的研缽中，加入2 mL 0.1 mol/L 的Tris-HCl(pH 8.9)的酶液提取液，冰浴下研磨至勻漿。低溫提取1 h，轉移至離心管中離心，4 ℃下10 000 r/min 離心15 min。取上清液，加等體積質量分數為40%的蔗糖溶液，混勻后置4 ℃ 冰箱保存，備用。
1.2.2凝膠制備采用垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳，膠板厚度為1.5 mm。分離膠質量濃度70 g/L，凝膠母液[6](表2)按A∶C∶G∶水=4∶5∶8∶4.5(G儲備液當天配制)的體積比混勻，混勻后從上部一側緩緩加入凝膠，約占整個膠板的3/4，加入過程中防止氣泡的產生。為保持膠面的平整，在上面加一層雙蒸水。在日光燈下凝聚，1 h 后當水面與膠面出現明顯界面時說明分離膠凝聚完成。用吸水紙吸去膠面上的水，加入濃縮膠，濃縮膠質量濃度為50 g/L，凝膠儲備液按B∶D∶E=2∶3∶4的體積比混勻。加完濃縮膠后插上梳子，日光燈下凝聚，1 h后濃縮膠凝聚完成。
1.2.3電 泳待膠完全凝聚后，取下梳子，加樣電泳。每樣孔進樣量20 μL，以溴酚藍為指示劑。電泳槽內加入pH 8.3的Tris-Gly電極緩沖液約500 mL，4 ℃冰箱中恒溫電泳。電泳初始電壓150 V，溴酚藍電泳至分離膠時穩壓300 V。溴酚藍電泳到分離膠底端1 cm處時，停止電泳。
1.2.4染 色POD同工酶顯色參考胡能書等[11]和郭堯君[12]采用的醋酸聯苯胺法，并進行改良。電泳完畢，小心剝取凝膠用蒸餾水漂洗數次，置醋酸聯苯胺染液5～10 min，出現清晰過氧化物酶帶后迅速倒出染液，蒸餾水洗數次，拍照、保存。染液配制：將1 g聯苯胺溶于9 mL冰醋酸中，再加36 mL蒸餾水，混勻配成聯苯胺溶液。使用時取5 mL聯苯胺溶液，2 mL 30 g/L的H2O2，93 mL蒸餾水，混勻。
1.3數據處理
凝膠板上酶譜帶顏色深淺反應同工酶活性的強弱。根據電泳圖(圖1)，將酶活性分為強、較強、弱3個等級，繪制電泳模式圖(圖2)。分別計算酶帶遷移率(Rf=酶帶遷移距離/前沿指示劑距離)。根據電泳模式圖將酶帶分布情況轉化為0，1二態性數值，有酶帶記為“1”，無酶帶記為“0”，建立POD同工酶譜帶的相對遷移率和二態數據。
表2 凝膠儲備液配方
圖1 75份蕨麻過氧化物同工酶酶譜
圖2 蕨麻過氧化物同工酶模式
計算各酶的多態位點百分率[13](Percentage of Polymorphic Bands，PPB)，PPB=NPB/TNB×100 %，式中，NPB(Number of Polymorphic Bands)為多態性條帶數，TNB( Total Number of Bands)為總條帶數。使用NTSYSpc 2.1計算POD酶譜帶的遺傳相似系數(Genetic Similarity,GS)，計算公式[14]如下：GS=2a/(2a+b+c)，其中，a為2個物種群共有的多態條帶，b為X物種群特有條帶數，c為Y物種群特有條帶數。再用非加權組平均法(Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Average,UPGMA)進行聚類分析并繪制相似系數樹狀聚類圖。
2結果與分析
2.1POD同工酶分析
75份蕨麻種質資源葉片的POD電泳染色結果共出現14條酶帶。不同蕨麻材料出現3～10條不同酶帶，77%的材料含有6～9條酶帶，酶帶出現最多的是7號(日喀則-32)、9號(那曲-01)、10號(那曲-02)和69號(黃南-08)材料，有10條酶帶；出現最少的是52號(湟源-02)和71號(甘德-01)材料，僅有3條酶帶。
14條酶帶分別用POD-1、POD-2、POD-3、POD-4……POD-14表示，Rf值為0.103～0.793。根據酶帶的遷移率的大小，分為Ⅰ區、Ⅱ區、Ⅲ區。Ⅰ區(Rf<0.207)有4條酶帶，包括POD-1～POD-4；Ⅱ區(0.328
酶帶出現率為6.67%～96.00%，遷移率及出現頻率見表3。酶帶POD-1和POD-5的出現率低于10.00%，可作為特異性酶帶，特異性的酶帶是蕨麻材料的遺傳特異性表現，具有較強的特異性。酶帶出現率在80%以上的高頻率有3條酶帶，分別是POD-2(出現率為96%)、POD-7(出現率為93%)和POD-12(出現率為81%)。出現率在30%～80%的中頻率酶帶共6條，占條帶總數的42.9%。出現率在30%以下的低頻條代數為5條，占條帶總數的35.7%，說明POD同工酶的多態性極高。
按照多態位點百分率公式，多態位點百分數為100%。有72份材料含有酶帶POD-2，有70份材料出現酶帶POD-7，75份蕨麻種質資源材料沒有共有條帶，14條酶帶全部為多態性酶帶，說明酶帶POD-2和POD-7為蕨麻資源POD同工酶比較穩定遺傳的酶帶。多態性酶帶數和百分率直接反映材料的多態性，間接反映酶譜的多樣性信息含量，又可作為度量遺傳變異水平高低的指標。
2.275份蕨麻種質資源的相似系數
NTSYSpc 2.1軟件計算75份材料2 850對兩兩不同材料的相似系數，結果見表4。相似系數為0.214～1.000，平均值為0.681。
蕨麻材料7號(日喀則-32)與17號(合作-05)、71號(黃南-10)、75號(大通-02)，4號(林芝-57)與54號(祁連-04)，14號(那曲-17)與75(大通-02)號5組之間，相似系數最小(GS=0.214)，親緣關系最遠。同一個地區的材料如1號(林芝-41)和2號(大武-04)，雖同是來自自西藏林芝地區達孜縣，采樣點的不同，其同工酶的種類和酶帶的活性也不完全一樣，相似系數為0.929。66號(黃南-05)和67號(黃南-06)材料同樣來自同一地點，其相似系數僅為0.786。說明，居群內存在著一定的遺傳變異。
表3 蕨麻同工酶酶帶遷移率(Rf)及出現頻率(Af)
表4 蕨麻材料的相似系數(部分)
注：最上一行及最左側一列的編號是樣品編號。
Note：Numbers of top row and left-most column are sample number.
材料來源較近的8號(日喀則-34)與12號(那曲-06)，20號(碌曲-03)、21號(碌曲-05)和49號(久治-03)，41號(興海-01)、72號(甘德-01)和73號(甘德-02)，48號(久治-02)、60號(玉樹-02)和61號(玉樹-13)，50號(平安-02)、59(玉樹-01)號和62(玉樹-18)號兩兩之間13組，地域相距較遠的材料1號(林芝-41)與32號(大武-03)，16號(合作-01)與44號(貴南-01)，31號(大武-01)與45號(河南-03)，34號(大武-05)與38號(拉雞山-02)4組，共17組材料間的相似系數最大(GS=1.000)，親緣關系最近。可見，地域相距近和遠的地區均存在變異小、親緣關系近的蕨麻材料。
2.3蕨麻種質資源的聚類分析
使用NTSYSPC 2.1軟件進行聚類分析，繪制樹狀圖，見圖3。結果表明，在相似系數為0.72時分為5類，第1類包括28份蕨麻材料，其中西藏有11份材料，甘肅有2份材料，青海有15份材料；第2類包括16份蕨麻材料，其中西藏有3份，甘肅有7份，青海有6份；第3類包括7份蕨麻材料，其中甘肅有1份，青海有6份；第4類包括14份蕨麻材料，其中西藏有1份，甘肅有3份，青海有10份；第5類包括10份蕨麻材料，全部來自青海，5份材料來自玉樹，海東和黃南地區各2份材料，果洛地區1份材料；第1類與第2類在相似系數為0.70時聚為一類即第1大類，親緣關系相對較近，44份材料中塊根膨大的36份，為蕨麻。第3類與第4類在相似系數為0.67時聚為一類，并在相似系數為0.74時與第5類聚為第2大類，31份材料中塊根不膨大的17份，為鵝絨委陵菜。
圖3 75份蕨麻過氧化物同工酶聚類結果
西藏的15份蕨麻材料中有14份聚在第1大類，15號(那曲-18)聚類到第2大類。甘肅的13份材料有9份材料也聚在第1大類，其余4份材料聚類到第2大類，47份青海的蕨麻材料在第1大類中有20份，第2大類中有26份。可見，蕨麻的種質資源中遺傳差異最大的是青海，其次是甘肅，最小是西藏。海拔3 000 m的18份材料，6份聚類到第1大類，12份聚類到第2大類，海拔3 000～4 000 m的材料和海拔4 000 m以上的材料也出現類似情況，且在第2大類中均有分布。
3結論與討論
3.1蕨麻種質資源遺傳多樣性豐富
遺傳多樣性包括一個物種所有個體間遺傳變異的總和，是居群生存和發展的前提[15]。遺傳變異是種群長期適應環境變化的結果，遺傳多樣性丟失導致小種群對環境變化(如污染、氣候變化)的響應能力非常有限[16]。蕨麻研究中心采用的形態學標記、細胞學研究和分子標記的方法研究表明蕨麻種質資源多樣性豐富。多態性酶帶數和多態位點百分率可以直接反映材料的多態性，間接反映酶譜的多樣性信息含量，還可作為度量遺傳變異水平高低的指標。相似系數可用來比較群體或個體間相似程度的度量參數，相似系數越高，說明相似程度越大，遺傳背景相似性越強[17]。本試驗使用生化標記的方法揭示蕨麻14條POD同工酶酶帶全部為多態性酶帶數和多態位點百分率達到最大100%，顯示蕨麻種質遺傳多樣性豐富，與形態學標記、細胞學研究和分子標記的研究結果一致。
研究顯示，75份蕨麻材料的14條POD同工酶酶帶中無共同酶帶，未檢測到同工酶酶帶及活性完全一致的材料。僅有部分材料，如1號(林芝-41)與32號(大武-03)等17組材料的相似系數為1.000，僅具有相同的酶帶及酶帶條數，酶帶的活性并不一致，可見，蕨麻種質資源的豐富性使不同地區間的蕨麻材料存在一定差異，這與蕨麻廣闊的生態適應性相一致。因而蕨麻在食用、藥用及生態應用上的開發前景巨大，在研究、利用和保護野生蕨麻種質資源時，應注意不同地區和居群的代表性。
3.2蕨麻種質資源親緣關系復雜
本試驗聚類結果顯示，50份蕨麻材料中僅有36份聚為蕨麻一類，剩余的14份聚到鵝絨委陵菜一類中，25份鵝絨委陵菜材料中17份聚到鵝絨委陵菜類中，此聚類結果與形態學標記和分子標記的聚類結果——不同比例的蕨麻材料聚到鵝絨委陵菜中的結果一致。在采樣時發現同一地區的蕨麻性狀也存在較大的差異，在甘肅臨潭蕨麻原變種和灰葉蕨麻變種共同生長，在多數采樣地，甚至同一株蕨麻，其塊根的性狀及色澤都不盡相同。表明蕨麻的遺傳變異高、遺傳關系復雜。蕨麻的表型是環境是基因決定還是由二者共同決定，需要進一步深入研究。
蕨麻這種遺傳復雜的關系是長期在復雜的地理環境中適應的結果，使得蕨麻能在環境復雜的情況下正常生長發育繁殖。同樣，人們能夠獲得不同品質的蕨麻資源，也為遺傳育種提供了豐富變異。
目前研究表明，許多植物在冰期時存在避難所，而在最后一次大冰期后，不同的植物甚至同種植物的不同種群表現不同的進化反應(擴張或者不擴張)，這些研究為植物分布區中心和邊緣，種群繁殖分配策略的比較研究提供了基礎[18-20]。蕨麻在青藏高原廣泛分布，與其他許多植物一樣在冰川時期存在避難所。本試驗研究的蕨麻材料來自中國三大自然區之一的青藏高原，其自然環境的垂直變化和水平分異與低海拔區域迥然不同，具有獨特的地生態現象及其空間格局。目前報道的36種高山植物的譜系地理分析顯示，譜系地理模式主要表現為：一、冰期退卻到高原邊緣的避難所，冰后期回遷到高原面；二、地理隔離造成冰期存在多處避難所(含微型避難所)，冰后期發生局域性擴張[21-22]。由蕨麻復雜的親緣關系推測蕨麻的譜系地理模式為上述的第2種，即蕨麻在冰川時期就地尋找避難所，躲過了嚴酷的環境條件，并在冰川時期結束后逐漸分布青藏高原。生境變化較小的蕨麻發生較小甚至不發生變異，保持了較為原始生長類型，生境變化大的蕨麻材料發生了較大的變異。
青藏高原及其周圍地區，由于特殊的環境條件使得蕨麻在青藏高原的分布一直處于野生狀態，為了生存繁衍，蕨麻需要適應各種不同的微環境，環境的變化影響蕨麻同工酶基因的表達，惡劣的環境條件是導致蕨麻表現豐富的遺傳多樣性的重要原因。
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Received 2015-04-08Returned2015-06-24
Foundation itemTransformation Fund in Agricultural Sci-tech Achievement of Ministry of Science and Technology (No.2010GB2G00514); NNSF of China (No.30607026,No.30660019); Fund Project in Natural Science of Qinghai Province(No.2012-Z-907).
First authorLIU Hehe,male,master student.Research area:medicinal plant resourcesdevelopment and utilization.E-mail:516098384@qq.com
(責任編輯：潘學燕Responsible editor:PAN Xueyan)
Genetic Diversity ofPotentillaanserinain Qinghai-Tibetan Plateau of China Based on Peroxidase Isozyme
LIU Hehe1,2,JIANG Hongxia1,2,FU Gui1,2,BAI Shijun1,2,BAO Jinyuan1,2,WEI Meiqin3and LI Junqiao1,2
(1.College of Chemistry and Chemical Engineering,Qinghai University for Nationalities,Xining810007,China;2.Qinghai Provincial Biotechnology and Analytical Test Key Laboratory,Xining810007,China;3 Agriculture and Animal Husbandry College,Qinghai University,Xining810016,China)
AbstractWe used technique of polyacrylamide gel electrophoresto analyze the peroxidase isozyme in 75 Potentilla anserina. The results showed that biochemical markers were consistent with the results in morphological markers,cell level and molecular markers,and Potentilla anserinehad genetic diversity .By peroxidase isoenzyme electrophoresis,we found 14 enzyme bands of Potentilla anserina leaf;percentage of polymorphic bands was 100%;genetic similarity coefficient calculated by the software NTSYSpc 2.1 ranged from 0.214 to 1.000,and the average value was 0.681; Based on the genetic similarity coefficient,cluster analysis was done by method of unweighted pair group method with arithmetic mearns used Potentilla anserina material ,Potentilla anserina was divided into two categories when the genetic similarity was 0.67,the main one of the first category was Potentilla anserina material,the main one in the second category was Potentilla anserine material. In conclusion,rich genetic diversity and variations of Potentilla anserina was caused by evolution in the complicated geographical environment of the Qinghai Tibet Plateau in long time.
Key wordsPotentilla anserina;Genetic diversity;POD isozyme; Polyacryamide gel electrophoresis; Genetic similarity; Percentage of polymorphic bands
Corresponding authorLI Junqiao,female,Ph.D,professor.Research area:medicinal plant resources development and utilization.E-mail:ljqlily2002@126.com
中圖分類號Q814.9
文獻標志碼A
文章編號1004-1389(2016)03-0413-10
通信作者：李軍喬，女，博士，教授，研究方向為植物資源開發與利用。E-mail：ljqlily2002@126.com
基金項目：科技部農業科技成果轉化基金(2010GB2G00514);國家自然科學基金(30607026,30660019);青海省自然科學基金(2012-Z-907)。
收稿日期：2015-04-08修回日期：2015-06-24
網絡出版日期：2016-03-06
網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20160306.1611.026.html
第一作者：劉賀賀，男，在讀碩士，研究方向為藥用植物資源開發與利用。E-mail：516098384@qq.com
