鹿花盤粉對四氯化碳誘導大鼠急性肝損傷的保護作用

黃彬彬　南璐璐　趙　越　陳思瑤　楊　柳　徐　峰　劉　磊　周　涌

(吉林醫藥學院護理學院，吉林　吉林　132013)

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鹿花盤粉對四氯化碳誘導大鼠急性肝損傷的保護作用

黃彬彬南璐璐趙越陳思瑤1楊柳徐峰劉磊1周涌2

(吉林醫藥學院護理學院，吉林吉林132013)

〔摘要〕目的研究鹿花盤粉對四氯化碳(CCl4)誘導的大鼠急性肝損傷的保護作用。方法Wistar大鼠60只，雌雄各半，隨機分為空白對照組、CCl4模型組、陽性藥物組(聯苯雙酯50 mg/kg)、鹿花盤粉低(0.75 g/kg)、中(1.50 g/kg)和高(3.00 g/kg)劑量組，每組10只，連續灌胃給藥20 d。末次給藥12 h后,各組大鼠腹腔注射60%CCl4花生油，雌性4.00 ml/kg、雄性3.50 ml/kg，空白對照組給予等量花生油。24 h后處死大鼠，取肝組織蘇木素-伊紅(HE)染色觀察病理改變；取血液分光光度法測定血清谷氨酸氨基轉移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活性；取肝組織制備勻漿，測定其中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力及丙二醛(MDA)含量。結果與CCl4模型組比較，鹿花盤粉中劑量組大鼠血清ALT、AST活性明顯降低，肝臟組織中MDA含量明顯降低，GSH-PX活力明顯升高(P<0.05)；鹿花盤粉高劑量組肝臟組織中SOD活力較CCl4模型組明顯升高(P<0.05)。HE染色結果顯示，鹿花盤粉中劑量組肝內病灶發生率下降，脂肪變性、壞死程度及炎性浸潤均明顯減輕。結論鹿花盤粉對CCl4誘導的大鼠急性肝損傷有一定的保護作用。

〔關鍵詞〕鹿花盤粉;四氯化碳;急性肝損傷;抗氧化

鹿花盤別名角盤、鹿角盤、珍珠盤、花盤〔1〕，是鹿科動物據茸后殘留的角根于第二年新茸萌發時脫落的部分，已知化學成分主要為蛋白質、多肽、氨基酸、脂類及鈣、磷等礦物質。據《神農本草經》記載，鹿花盤具有強筋壯骨，溫補肝腎，活血消腫，治乳癰初起，陰癥瘡瘍等功效。現代醫學對鹿花盤藥理作用的研究主要集中在其抗氧化、治療乳腺增生、抗疲勞、抑菌、免疫作用及抗癌等方面〔2～8〕，但有關鹿花盤肝臟保護方面的研究少見報道。本實驗探討鹿花盤粉對大鼠急性肝損傷的保護作用。

1材料與方法

1.1實驗動物Wistar大鼠60只，雌雄各半，6～8周齡,體重(210±20)g，購自吉林大學實驗動物中心，使用許可證號：SYXK(吉)2008/0010。

1.2儀器、材料和試劑722可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)；TD5A臺式離心機(湖南凱達科學儀器有限公司)；DY89-Ⅱ型電動玻璃勻漿機(寧波新芝生物科技股份有限公司)、DM1000顯微鏡(德國萊卡)；DP71圖像分析系統(日本奧林巴斯)。鹿花盤粉(購于吉林市龍潭山鹿場)；聯苯雙酯滴丸(浙江萬邦藥業股份有限公司)；四氯化碳(CCl4)(天津市永大化學試劑有限公司)；丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷氨酸氨基轉移酶(ALT)及天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3動物分組及模型建立將實驗動物隨機分為空白對照組、CCl4模型組、陽性藥物組和鹿花盤粉低、中、高劑量組，每組10只。陽性藥物組按50 mg/kg聯苯雙酯灌胃給藥，實驗組分別按0.75 g/kg、1.50 g/kg和3.00 g/kg鹿花盤粉灌胃給藥,空白對照組和CCl4模型組給予等量生理鹽水，連續20 d。末次給藥12 h后,除空白對照組外，各組大鼠分別腹腔注射60% CCl4花生油，雌性4.00 ml/kg、雄性3.50 ml/kg，空白對照組給予等量花生油。

1.4生化指標檢測24 h后處死大鼠，腹主動脈取血，分離血清，按試劑盒說明檢測血清中ALT 和AST 活力；取肝臟組織于生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，加預冷生理鹽水于冰浴中制成10%勻漿，4℃離心(4 000 r/min，10 min)，分離上清，按試劑盒說明測定肝組織勻漿MDA含量和SOD、GSH-PX活力。

1.5肝臟病理切片制備取各組大鼠肝右葉相同位置肝組織，用預冷生理鹽水漂洗，濾紙拭干，4%福爾馬林固定，脫水透明，石蠟包埋，切片，貼片，蘇木素-伊紅(HE)染色并封片，光鏡下(200倍)觀察各組大鼠肝臟組織病理學變化并拍照。

1.6統計學分析采用SPSS17.0軟件行單因素方差分析、最小顯著差數法(LSD)檢測。

2結果

2.1鹿花盤粉對CCl4所致急性肝損傷大鼠血清ALT、AST 的影響CCl4模型組與空白對照組比較，血清ALT和AST活力顯著升高(P<0.01)，說明CCl4致大鼠急性肝損傷造模成功。與CCl4模型組比較，陽性藥物組和鹿花盤粉中劑量組血清ALT和AST活力均明顯降低(P<0.05，P<0.01)。見表1。

2.2鹿花盤粉對CCl4致急性肝損傷大鼠肝臟MDA、SOD和GSH-PX的影響CCl4模型組與空白對照組比較，大鼠肝臟組織SOD和GSH-PX活力明顯下降，MDA含量明顯升高(P<0.01)，說明CCl4致大鼠急性肝損傷造模成功。陽性藥物組和鹿花盤粉中劑量組肝臟組織中MDA含量與CCl4模型組比較明顯降低(P<0.05)；陽性藥物組和鹿花盤粉高劑量組肝臟組織中SOD活力與CCl4模型組比較明顯升高(P<0.05)；陽性藥物組和鹿花盤粉中劑量組大鼠肝臟組織中GSH-PX活力與CCl4模型組比較顯著升高(P<0.01)。見表2。

表1各組血清ALT、AST水平比較(x±s,n=10,U/L)

組別ALTAST空白對照組22.1±5.361.8±7.5CCl4模型組118.3±28.52)237.0±20.82)陽性藥物組75.1±14.62)150.0±11.93)鹿花盤粉低劑量組93.8±15.5228.4±23.8鹿花盤粉中劑量組91.5±11.42)167.3±13.33)鹿花盤粉高劑量組110.6±29.8196.9±18.3

與空白對照組比較：1)P<0.01；與CCl4模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01，下表同

2.3鹿花盤粉對CCl4致急性肝損傷大鼠肝臟病理改變的影響空白對照組大鼠肝小葉以中央靜脈為中心呈放射狀排列,肝細胞索排列整齊,肝細胞呈多邊形,核大而圓,細胞分界清楚；CCl4模型組大鼠肝組織結構被嚴重破壞,肝實質少量的纖維組織增生,匯管區炎性細胞浸潤,肝細胞胞發生了脂肪變性，周邊區可見壞死細胞，肝靜脈淤血；陽性藥物組大鼠肝組織切片中肝細胞脂肪變性、炎細胞浸潤均較CCl4模型組明顯減輕，且肝組織中無明顯纖維增生，提示聯苯雙酯對CCL4性肝損害有顯著的保護作用；鹿花盤粉中劑量組、情況較CCl4模型組有所改善，肝內病灶發生率下降，脂肪變性、壞死程度及炎性浸潤均明顯減輕,僅見少量肝細胞變性和點狀壞死，肝小葉輪廓較清晰。鹿花盤粉末低劑量組和高劑量組情況較中劑量組效果不理想。綜上所述,鹿花盤粉中劑量組的效果優于低劑量組和高劑量組,但不如陽性藥物組。見圖1。

表2鹿花盤粉對CCl4致急性肝損傷大鼠肝臟MDA、SOD和GSH-PX的影響(x±s,n=10)

組別MDA(nmol/mgprot)SOD(U/mgprot)GSH-PX(U/mgprot)空白對照組1.14±0.19108.42±15.96283.96±30.86CCl4模型組1.82±0.261)80.36±8.831)151.93±23.91)陽性藥物組1.05±0.152)98.72±19.772)226.76±14.893)鹿花盤粉低劑量組1.71±0.2188.03±12.56186.46±16.14鹿花盤粉中劑量組1.13±0.182)83.36±14.06231.65±19.933)鹿花盤粉高劑量組1.42±0.1998.03±11.762)198.56±18.76

圖1　大鼠肝臟組織病理變化(HE，×200)

3討論

各種有害因素引起的肝損傷都會導致肝細胞變性、壞死或凋亡，而這又引發后續的炎癥和纖維化病變，表現為脂肪肝、肝纖維化、肝壞死、膽汁淤積、肝硬化及肝癌等嚴重威脅人類健康的病變〔9，10〕，因此目前對肝損傷的防治成為一個全球性的嚴峻課題。CCl4誘導的急性肝損傷模型是最經典的肝損傷模型，被廣泛應用于肝損傷及再生的機制研究〔11，12〕。有研究發現，CCl4在體內代謝生成CCl3·自由基,后者可與氧發生反應生成CCl3OO·，此種自由基在體內可通過兩種方式損傷細胞：一種為直接途徑,與膜蛋白或脂質結合,尤其是內質網系統,造成烷化反應以及酶的失活；另一種為間接途徑,通過與細胞膜及不飽和脂肪酸的相互作用從而增強脂質過氧化反應〔13〕。MDA是體內自由基攻擊脂質產生脂質過氧化物的代謝終產物〔14〕,是反映脂質過氧化的敏感指標，其含量的高低還可間接地反映肝損傷的程度〔15〕，脂質過氧化物增多可使MDA含量升高。脂質過氧化反應還可導致細胞膜完整性損傷，使肝細胞質內ALT、AST釋放入血，血清AST、ALT活性升高〔16〕。另一方面SOD和GSH-Px活性反映機體清除活性氧自由基的能力〔17，18〕。SOD可清除自由基，起到保護細胞膜結構與功能的作用。GSH-PX可阻斷自由基對機體的進一步損傷〔19〕。當機體產生過多自由基時，引起抗氧化體系的耗竭及氧化物和抗氧化物的動態失衡，使SOD和GSH-PX水平下降〔20〕。本實驗結果顯示使用鹿花盤粉對實驗動物進行干預后，可使急性肝損傷大鼠肝內病灶發生率降低，脂肪變性、壞死程度及炎性浸潤均明顯減輕，提示鹿花盤粉對肝臟具有一定的保護作用，其保護機制可能與其抗氧化作用有關。且有研究表明氨基酸及某些微量元素對肝臟有保護作用〔21〕，因鹿花盤中含有豐富的蛋白質、氨基酸和少量脂類,并含大量的鈣、磷及鋅、鐵、錳、鍶等微量元素〔1，22〕，故猜測鹿花盤粉中起肝保護作用的成分可能是蛋白質和氨基酸，某些微量元素也可能對肝臟起到保護作用，其具體機制有待進一步研究。

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〔2014-11-04修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

〔中圖分類號〕R285.5

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)08-1817-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.012

通訊作者：周涌(1963-)，男，教授，主要從事營養與慢性病研究。

基金項目：吉林醫藥學院大學生科研基金資助項目(201211)

1吉林醫藥學院臨床醫學院2吉林醫藥學院附屬醫院

第一作者：黃彬彬(1990-)，女，本科在讀，主要從事臨床肝膽護理研究。