地牯牛對燙傷大鼠的治療作用*

第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院(西安 710038)　郭淑云　張　薇　張文娟　戚志華

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地牯牛對燙傷大鼠的治療作用*

第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院(西安 710038)郭淑云張薇張文娟戚志華

摘要目的：探討地牯牛外用對燙傷大鼠模型創(chuàng)面修復(fù)的影響。方法：大鼠背部皮膚用100℃ 水蒸氣持續(xù)10 s造成燙傷模型；觀察地牯牛外敷對燙傷大鼠創(chuàng)傷部位修復(fù)情況及相應(yīng)時間內(nèi)血清TNF、VEGF、IL的表達。結(jié)果：模型建立成功，結(jié)果顯示地牯牛組組織形態(tài)學(xué)變化顯著，創(chuàng)面愈合明顯優(yōu)于其他組。大鼠血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達地牯牛組高于其他組(P<0.05)，血清腫瘤壞死因子(TNF)、白介素(IL)的表達地牯牛組低于其他組(P<0.05)。結(jié)論：地牯牛外用對大鼠燙傷模型有顯著的治療效果。

主題詞燒傷血管內(nèi)皮生長因子腫瘤壞死因子白細(xì)胞介素-1 大鼠 @地牯牛

地牯牛為脈翅目蟻蛉的幼蟲，歷來有入藥記載，具有清熱解毒、消腫散結(jié)等功效。臨床用來治療高熱驚厥、跌打損傷、瘧疾和外用于癰瘡腫毒、中耳炎等癥；有文獻報道地牯牛醇提物有明顯的鎮(zhèn)痛、消腫及抗血栓作用；還有臨床研究發(fā)現(xiàn)以地牯牛為主要成分的外敷散劑對褥瘡的治療有令人滿意的效果，促進肉芽組織生長，潰瘍愈合的效果明顯優(yōu)于其他對照組[1]。但現(xiàn)代藥理學(xué)機制尚不清楚。不利于其在臨床治療中的推廣應(yīng)用。本實驗通過建立大鼠燙傷模型，以麻油為陰性對照、表皮生長因子為陽性對照藥，觀察大鼠血中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血清腫瘤壞死因子(TNF)、白介素(IL)的表達，燙傷創(chuàng)面變化、組織形態(tài)學(xué)改變，探討地牯牛促進大鼠創(chuàng)面皮膚修復(fù)的作用機制，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

材料與方法

1材料地牯牛(經(jīng)我院中醫(yī)科郭瑞林教授鑒定)，表皮生長因子(20131206)，麻油(上海太太樂食品有限公司)，TNF、VEGF、IL、ELISA試劑盒(欣博盛生物科技有限公司)MK3型酶標(biāo)儀(芬蘭 Thermo公司)。

2模型制備與分組SD大鼠由第四軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心提供[許可證號：SCXK-(軍)2012-0007]共60只，雌雄不限，體質(zhì)量200±10 g，適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)1周，背部用電動脫毛器脫毛，取約2 cm厚度泡沫板一塊，上挖面積2 cm×2 cm洞兩個，置于裝有沸水的燒杯上方，燒杯下方置電加熱套持續(xù)加熱。抓住大鼠頭尾部，背部緊貼泡沫板挖洞處10 s，造成大鼠背部1處III度燙傷創(chuàng)面，傷后即刻腹腔注射生理鹽水抗休克。(面積2 cm×2 cm經(jīng)組織病理學(xué)切片證實)。

3方法①分組及造模：觀察創(chuàng)面大體情況。將上述燙傷大鼠隨機分5組：地牯牛治療組，陽性藥物治療組，基質(zhì)對照組，燙傷組，空白組每組12只，分別涂抹治療藥物。于造模后24 h、48 h、1 周、2周、3周分別取血，并取皮膚組織標(biāo)本，用4%甲醛固定，石蠟包埋做病理學(xué)切片。②給藥：造模后，各治療組大鼠立即連續(xù)涂敷相應(yīng)藥物，治療組(燙傷大鼠用地牯牛藥粉加麻油調(diào)糊狀，1次/d)，陽性藥物對照組(燙傷大鼠用表皮生長因子， 1次/d)，基質(zhì)對照組(燙傷大鼠麻油涂抹， 1次/d)，燙傷組(燙傷大鼠不給藥物治療)，空白組(正常無燙傷大鼠)。

4檢測指標(biāo)及方法①創(chuàng)面大體觀察：傷后24 h、48 h、1 周、2周、3周觀察創(chuàng)面大體變化，記錄創(chuàng)面愈合時間。觀察不同組間大鼠造模后創(chuàng)面愈合時間、感染及創(chuàng)面結(jié)痂情況。②造模后不同時間點取動物血清檢測VEGF、TNF、IL免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果。③創(chuàng)面組織形態(tài)學(xué)觀察：造模后于不同時間點取創(chuàng)傷面皮膚標(biāo)本置于10%甲醛中固定24 h，蒸餾水漂洗，梯度乙醇脫水后常規(guī)石蠟包埋切片行HE染色后進行組織形態(tài)學(xué)觀察。

結(jié)果

1創(chuàng)面大體觀察見圖1～3。燙傷后，各組大鼠創(chuàng)面紅腫突出，與周圍正常皮膚區(qū)別明顯，無滲出。傷后1周，燙傷部位開始結(jié)痂。地牯牛組與陽性對照藥組在燙傷后3 d左右開始結(jié)痂，21 d左右傷口基本愈合，創(chuàng)面處留輕微愈合傷。

2形態(tài)學(xué)及病理學(xué)觀察傷后21 d，地牯牛組病例切片顯示皮膚組織輕度慢性炎(圖4)，陽性對照藥組病例切片顯示皮膚組織慢性炎伴炎性滲出，肉芽組織增生及多核巨細(xì)胞反應(yīng)(圖5)；麻油對照組病例切片顯示皮膚組織慢性炎伴炎性滲出，壞死及肉芽組織增生(圖6)。

3不同時間點動物血清TNF-α、VEGF、IL-1α免疫組織化學(xué)結(jié)果傷后隨著時間推移，地牯牛組大鼠創(chuàng)面愈合明顯。燙傷后24 h，48 h VEGF水平明顯高于陽性對照組(P<0.05)見表1。IL-1α、TNF-α水平地牯牛組與陽性藥對照組差異顯著(P<0.05)見表2。同時期病理組織切片顯示與其他檢測結(jié)果相符。

表1　不同時點血清VEGF的OD值比較

討論

本研究參考文獻建立動物燙傷模型[2]，并對建模方法進行改進。蒸汽燙傷模型制作簡單，可一人獨立完成，燙傷深度和面積均勻易控制，排除其他因素影響，穩(wěn)定性高，重復(fù)性強。模型建立后燙傷局部出現(xiàn)皮膚發(fā)紅、水腫，與臨床燙傷癥狀一致，同時期病理組織切片也可驗證燙傷結(jié)果。

實驗研究表明地牯牛對創(chuàng)面愈合作用明顯高于麻油組，HE染色結(jié)果也提示地牯牛能加速創(chuàng)面愈合。燙傷后，機體出現(xiàn)肌膚紅腫熱痛和滲出腫脹，大量炎性細(xì)胞浸潤創(chuàng)面，創(chuàng)面愈合的過程中產(chǎn)生多種生長因子，在不同的階段這些生長因子的表達隨著創(chuàng)面愈合的變化而改變[3]。在本次實驗中對VEGF、TNF、IL的表達進行了觀察。

VEGF是燙傷愈合過程中的關(guān)鍵。是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能細(xì)胞因子，可促進新生血管生成，增加血管通透性和促進單核細(xì)胞游走等功能。本次實驗中VEGF的表達在地牯牛組與陽性藥物對照組各時間點差異顯著，地牯牛組VEGF血清水平均高于陽性對照藥物組。兩組間隨時間變化趨勢走向大體相同，隨著愈合時間的增加VEGF的表達呈下降趨勢，變化規(guī)律明顯與大鼠創(chuàng)傷愈合的進程呈高度一致關(guān)系。

TNF與IL-1是參與炎癥反應(yīng)的重要因子之一[4]，本次研究結(jié)果顯示，燙傷后組織釋放大量炎癥因子，動物血清中TNF和IL-1增加，隨著時間改變逐漸減少。在這個過程中，地牯牛組大鼠血清中TNF和IL-1的表達均低于陽性對照藥物組，表明地牯牛能有效減少創(chuàng)面組織中TNF和IL-1等炎癥因子的產(chǎn)生和釋放，控制炎癥反應(yīng)強度，減輕過度炎癥反應(yīng)對創(chuàng)面的損傷。

地牯牛可加快燙傷創(chuàng)面愈合，增加動物血清中VEGF水平，同時降低血清炎性因子TNF-α與IL-1α的水平。本次實驗為地牯牛治療燙傷提供了實驗依據(jù)，為進一步加深對地牯牛的臨床研究提供理論支持。

參考文獻

[1]張勝，郭治友.黔南地區(qū)野生藥用昆蟲地牯牛資源初探[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報，2010，16：234.

[2]賈美美，李玉桑，裴蘭潔，等.三黃生膚油對兔III度燙傷創(chuàng)面的作用[J].中華燒傷雜志，2013，29(1)：50-54.

[3]李文彬，閆小寧，田慶，等.半枝蓮方對尋常銀屑病血熱證患者血清TNF-a及VEGF的影響[J].陜西中醫(yī)，2014 35(9)：1211-1213.

[4]鄧守恒，楊敬寧，曹鳳君，等.蘆薈多糖軟膏對淺II度燙傷小鼠創(chuàng)面組織的促修復(fù)作用[J].時珍國醫(yī)國藥， 2010，21(8)：1981-1982.

(收稿：2015-07-27)

Effects of antlion on rats scald model

Tangdu Hospital， Fourth Military Medical University of PLA (Xi’an 710038)

Guo ShuyunZhang WeiZhang Wenjuanet al

ABSTRACTObjective：To investigate the effects of antlion on rats scald model. Methods：By keeping the dorsum skin of rats in 100℃ water vapor for 10 seconds to establish the rats scald model.Observing the effects of antlion on scald area and pathological changes of TNF、VEGF and IL.Results：The scald model of rats was successfully established and the repair effects on wound skin of each antlion group was obviously better than that in other group. Compared with other group，the VEGF of antlion group increased(P<0.05)，but TNF and IL decreased significantly(P<0.05). Conclusion：The antlion in external application has positive effects on curing the local skin of rats scald model.

KEY WORDSBurnsVascular endothelial growth factorsTumor necrosis factorsInterleukin-1Rats@Antlion

【中圖分類號】R644

【文獻標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.02.001

·論著·基礎(chǔ)研究·

*國家自然科學(xué)基金資助項目(81102836)