微柱凝膠技術應用于ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗價值評價

●蔣姝婷

微柱凝膠技術應用于ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗價值評價

●蔣姝婷

目的：總結性探討分析微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗價值。方法：采用228例疑似ABO新生兒溶血病患兒血標本，分別采用傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠技術進行放散實驗、間接抗人球蛋白試驗以及直接抗人球蛋白試驗，分析比較檢測結果。結果：所有疑似ABO新生兒溶血病患兒中檢測出ABO新生兒溶血病患兒200例，微柱凝膠法的直接、間接抗人球蛋白試驗以及放散試驗陽性檢出率分別為77%、91%、99%，傳統(tǒng)試管法的直接、間接抗人球蛋白試驗以及放散試驗陽性檢出率分別為60%、67%、79%，三個方面的差異都較為明顯（P＜0.05）。結論：微柱凝膠技術相比于傳統(tǒng)試管法的檢測陽性率高，值得在臨床工作中加大使用范圍。

微柱凝膠技術；ABO新生兒溶血病；傳統(tǒng)試管法；檢驗價值

新生兒溶血病(HDN)是因為母親體內有IgG血型抗體能夠結合胎兒紅細胞從而導致的被動免疫性疾病，如果不能對患者采取及時治療可導致并發(fā)癥的發(fā)生，嚴重的情況下導致患者的死亡[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年4月到2015年12月在我院診治的228例臨床表現(xiàn)為高膽紅素血癥且疑似新生兒溶血病患兒，男女比例為123：105，日齡是4h到10d.

1.2 檢測方法

1.2.1 傳統(tǒng)試管法

（1）放散試驗：新生兒紅細胞洗滌三次后，加入抗A、抗B分型血清，之后混合均勻并離心，將上清液去除后洗滌3次，將約一半體積的生理鹽水加入，將其放置于37℃水浴中進行充分分散，將分散液取出并和2%的抗人球蛋白混合均勻，之后離心觀察結果[2]。（2）間接抗人球蛋白試驗：事先準備3支干凈的試管，都放入2滴新生兒血清，再分別加入1滴配制好的5%的A,B,O型血液標本所制成的紅細胞鹽水懸液，如果出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，可以說明存在相應抗體，如果沒有出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，則加入4滴抗IgG的抗人球蛋白血清，混合均勻后離心1分鐘，觀察有無凝集現(xiàn)象。（3）直接抗人球蛋白試驗：新生兒的紅細胞采用生理鹽水洗滌3次，另外取出1支干凈試管，把抗人球蛋白血清和1滴配制好的濃度為5%的紅細胞鹽水懸液放入，混合均勻后離心1分鐘，觀察是否出現(xiàn)凝集反應[3]。

1.2.2 微柱凝膠技術

放散試驗：取500uL洗滌4次的壓積紅細胞置于試管中，并加入500uL的生理鹽水，將其56℃水浴中孵育l0分鐘，取出后離心5分鐘，離心轉速為2000r/min，取上清，將50uL標準A,B,0紅細胞分別加入微柱凝膠孔上，之后各加入50uL放散液，把此卡置孵育器37℃孵育15分鐘，取出離心3分鐘，離心轉速為1500r/min，結果判讀，以紅細胞聚集在凝膠中部或者凝膠帶上部為陽性反應[4]。（2）間接抗人球蛋白試驗：將50uL標準A,B,0紅細胞分別加入微柱凝膠卡在相應位置，之后將50uL患兒血清加入，把此卡置孵育器37℃孵育15分鐘，取出離心10分鐘，結果判讀同上；（3）直接抗球蛋白試驗：取新生兒靜脈血，離心，取壓積紅細胞，用生理鹽水洗滌3次后配制成約0.5%到1%的紅細胞懸液，在微柱凝膠孔加入50uL紅細胞懸液，離心5分鐘，結果判讀同上[5]。

1.3 HDN檢驗判斷標準

3 項試驗同時陽性則患者為HDN；間接抗人球蛋白試驗和/或直接抗球蛋白試驗陽性，然而放散實驗陰性，則要結合臨床癥狀具體分析。

1.4 統(tǒng)計學方法

本次臨床研究的所有計量資料、計數(shù)資料分別使用t檢驗、卡方檢驗，標準統(tǒng)計學分析采用SPSS13.0，以P＜O.O5為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對比兩種檢測方法抗體放散試驗陽性率

兩種檢測方法抗體放散試驗陽性率的差異較為明顯（P＜0.05）；詳見表1；

表1.對比兩組患者抗體放散試驗陽性率

3 討論

紅細胞表面上很多免疫系統(tǒng)都能導致新生兒溶血病，ABO血型系統(tǒng)是最為常見的，其主要原因為胎兒和母親的血型不合。臨床工作中檢測疑似新生兒溶血病時常采用放散試驗、間接、直接抗人球蛋白試驗，其中檢測紅細胞上抗原的類型時采用放散試驗，血清中抗體具體類型以及是否存在抗體則采用間接抗人球蛋白試驗，檢測紅細胞是否受到不完全致敏則采用直接抗人球蛋白試驗[6]。傳統(tǒng)的試管法檢測時操作過程復雜，步驟繁多，干擾因素多，使最終檢驗結果出現(xiàn)偏差的可能性大。微柱凝膠法是一種新型的血清檢測方法，且其在新生兒溶血病的檢測中的使用越來越廣泛。檢測血清時，游離的紅細胞能夠自由穿過凝膠柱，然而抗原抗體反應出現(xiàn)凝集的紅細胞因為體積過大，所以不能夠自由穿過凝膠柱的分子篩，凝集的紅細胞會在凝膠柱上懸浮，區(qū)分凝集紅細胞和游離紅細胞[7]。

本次臨床研究將傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠技術同時運用于ABO新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗中，結合本次臨床研究的結果，微柱凝膠法的直接、間接抗人球蛋白試驗以及放散試驗陽性檢出率分別為77%、91%、99%，傳統(tǒng)試管法的直接、間接抗人球蛋白試驗以及放散試驗陽性檢出率分別為60%、67%、79%，微柱凝膠技術在三個方面的檢驗陽性率都比傳統(tǒng)試管法高。所以微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗中有更高的價值。

國內外其他學者的研究也顯示了類似的結果，如馬靖貞[8]等學者的臨床結果顯示微柱凝膠法的直接、間接抗人球蛋白試驗以及放散試驗陽性檢出率分別為81.4%、86.0%、90.7%，試管法的直接、間接抗人球蛋白試驗以及放散試驗陽性檢出率分別為65.1%、72.1%、76.7%，可知微柱凝膠法在三個方面的檢驗陽性率都高于試管法，與本次臨床研究的結果是類似的。

綜上所述，微柱凝膠技術相比于傳統(tǒng)試管法的檢測陽性率高，在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的價值高，易觀察結果，值得在臨床工作中推廣使用。

(作者單位：河南省人民醫(yī)院 輸血科)

2014年河南省重點科技攻關計劃項目” 編號是“142102310126”項目名稱“保存期內紅細胞功能計量單位研究” 負責人“燕備戰(zhàn)”

[1]李明強,楊曉明.ABO溶血病新生兒178例血清學檢測及其意義[J].中國醫(yī)藥科學,2015，05(21)：150-152

[2]黎海瀾,焦偉.ABO新生兒溶血病實驗室檢測方法及臨床應用[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013，10(02)：200-202

[3]常靜秋.兩種微柱凝膠卡和試管法在臨床血型鑒定中的應用評價[J].中國繼續(xù)醫(yī)學教育,2015,07(25)：27-29

[4]蔣峻峰.微柱凝膠免疫檢測法在新生兒溶血病中的應用研究[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2014,11(17)：2362-2363

[5]粟明麗.微柱凝膠技術在檢測新生兒溶血病中的應用[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2014.11(32)：154-156

[6]吳晶晶,袁萬博,謝思思等.微柱凝膠技術在新生兒溶血病檢測中的應用[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2015,36(07)：872-874

[7]鐘水權.微柱凝膠卡式法與試管法在ABO新生兒溶血病檢測中的對比分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2014,11（09）：34-36

[8]馬靖貞,郝愛兵.微柱凝膠法與試管法檢測新生兒溶血病免疫性抗體的比較[J].基層醫(yī)學論壇,2014,18(23)：3118-3119

Objective To summarize the discussion of microcolumn gel technique in ABO hemolytic disease of newborn children with blood transfusion before the test value. Methods the 228 cases of suspected ABO hemolytic disease of newborn children with blood samples, respectively, using the traditional tube method and micro column gel technology diffusion experiment, indirect anti human globulin test and direct anti human globulin protein test and analysis results were compared. Results all suspected ABO hemolytic disease of newborn children detect ABO hemolytic disease of newborn children with 200 cases, micro column gel method of direct and indirect anti people globulin test and elution test positive rate was 77%, 91%, 99% , traditional tube method of direct and indirect anti people globulin test and elution test positive detection rate were 60% and 67%, 79%, three aspects of the differences are more obvious (P ＜ 0.05). Conclusion the microcolumn gel technique compared to conventional tube test positive detection rate, it is worth in the clinical work increase the scope of use.

micro column gel technique; ABO hemolytic disease of newborn; traditional test tube method; test value