UPLC-MS/MS法檢測抗疲勞類保健品中4種化學(xué)藥物

●周玉玲湯祝華康蕊姜海燕

UPLC-MS/MS法檢測抗疲勞類保健品中4種化學(xué)藥物

●周玉玲1湯祝華1康蕊1姜海燕2

目的 建立檢測抗疲勞類保健品中4種非法添加化學(xué)藥物的方法。 采用超高效液相色譜－質(zhì)譜串聯(lián)法（UPLC-MS/MS法），Acquity UPLC C18（1.7μm，2.1*50mm）色譜柱，乙腈－0.1%甲酸水為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，選擇正離子反應(yīng)監(jiān)測掃描方式檢測。育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非方法的平均回收率為97.8%、98.6%、102.6%、99.1%；RSD分別為1.2%、2.6%、1.9%、2.1%（RSD＜5%，n=6）。方法的線性范圍均為1～50ng/mL，相關(guān)系數(shù)r 均為0.999。結(jié)果表明，該方法快速、簡單、準(zhǔn)確地檢測出4種非法添加藥物。

UPLC-MS/MS；非法添加；抗疲勞

目前，國家食品藥品監(jiān)督總局制定了保健食品中可能非法添加的物質(zhì)名單（第一批），共11種化學(xué)物質(zhì)。目前已有較成熟的HPLC-MS/ MS測定方法，而針對(duì)于以上11種以外的化學(xué)物質(zhì)，如育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非等非法添加物，經(jīng)營者公然宣稱：“不屬于國家相關(guān)政策禁止的范圍”、“不會(huì)被檢測出來”。因此，若這幾種化學(xué)成分一旦被添加入保健食品，其隱蔽性和危害性不言而喻[1-10]。

1 儀器與試劑

Waters Vevo TQ-S型超高效液質(zhì)聯(lián)用儀，配有液相泵、自動(dòng)進(jìn)樣器及二極管陣形列檢測器。乙腈為色譜純，水為超純水。達(dá)泊西汀對(duì)照品購自武漢貝爾卡生物醫(yī)藥有限公司；鹽酸育亨賓、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非對(duì)照品購自中國食品藥品檢定研究院，鹽酸育亨賓,批號(hào)：520024－201401；甲磺酸酚妥拉明，批號(hào)：100110-201103；二乙氨基前他達(dá)拉非，批號(hào)：520043－201401。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：AcQuity UPLC C18（1.7μm，2.1*50mm），流動(dòng)相：乙腈－0.1%甲酸水，流速0.3 ml/min，柱溫：40℃，進(jìn)樣量1.0μl。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI）正離子模式，采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）掃描模式采集信號(hào)，毛細(xì)管電壓：3.0KV，去溶劑溫度：500℃。4種化學(xué)藥物的母離子、子離子、錐孔電壓、碰撞電壓見表1

表1 4種化學(xué)藥物的母離子、子離子、錐孔電壓、碰撞電壓

2.3 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備

準(zhǔn)確稱取鹽酸育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非對(duì)照品約10 mg，分別置5 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，得上述各對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.4 供試品溶液的制備

2.4.1 液體試樣

準(zhǔn)確吸取液體制劑5ml，置于25 ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻后經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，取濾液待測。

2.4.2 固體試樣

準(zhǔn)確稱取固體劑粉末狀（片劑去除包衣后粉碎研細(xì)，，膠囊去除囊殼取內(nèi)容物研細(xì)混勻）約1g，置于25 ml容量瓶中，用15 ml乙腈超聲30min，用乙腈定容至刻度，搖勻后經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，取濾液待測。

2.5 線性關(guān)系與檢出限

吸取上述各對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL置100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度線，搖勻，得育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非4種混合對(duì)照(以下稱4種混合對(duì)照)標(biāo)準(zhǔn)混合中間液，濃度約為20 μg/ mL。

吸取4種混合對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)混合中間液0.5 mL置100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度線，搖勻，得4種混合對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)混合使用液，濃度約為100 ng/ mL。

分別吸取4種混合對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)混合使用液0.1 mL、0.5mL、1mL、2mL、5 mL分別置于10 mL容量瓶，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得系列標(biāo)準(zhǔn)混合曲線。

4種化學(xué)藥物線性關(guān)系

2.6 精密度試驗(yàn)

用濃度為10 ng/ mL的4種混合對(duì)照液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表明，育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非峰面積的RSD分別為1.2%、2.6%、1.9%、2.1%。

2.7 回收率試驗(yàn)

取不含待測物的保健品樣品，加入上述4種混合對(duì)照液，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非的平均回收率為97.8%、98.6%、102.6%、99.1%。

2.8 樣品測定

取樣品適量，按2.4中方法制成供試品溶液，進(jìn)樣測定，與上述4種化學(xué)藥物的色譜峰和質(zhì)荷比進(jìn)行比較，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)市售137批抗疲勞保健品檢出以上四種化學(xué)物質(zhì)，說明海南市場中抗疲勞類保健品質(zhì)量情況較好。

3 結(jié)論

由于高效液相色譜法的靈敏度有限，無法準(zhǔn)確地進(jìn)行測定。且在抗疲勞保健品中，一是可能各組分含量均為少量，達(dá)不到液相的檢出限，容易蒙混過關(guān)。二是由于液相方法組份多時(shí)，峰分不開，耗時(shí)長等，開發(fā)簡單、快捷的質(zhì)譜方法，便于監(jiān)督保健品質(zhì)量，為百姓的生活提供安全保障。建立超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用方法，對(duì)抗疲勞保健品育亨賓、達(dá)泊西汀、甲磺酸酚妥拉明、二乙氨基前他達(dá)拉非4種非法添加化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行測定，達(dá)到有效的監(jiān)控。

（作者單位：1海南省食品檢驗(yàn)檢測中心，海南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；2海口市第四中學(xué)高中部）

[1]王靜文，黃湘鷺，曹進(jìn)等.超高效液相色譜法同時(shí)測定減肥類保健食品中 非法添加的 25 種藥物[J]. 色譜, 2014,2(32)：151-156.

[2]胡婷婷，蘆春梅、楊璐等.HPLC-MS/MS法檢測抗疲勞類保健食品中達(dá)泊西汀[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2015,5(10)：1528-1529.

[3]寧霄, 張偉清, 王鋼力等.HPLC-MS/MS法檢測抗疲勞保健食品中非法添加的8種壯陽類化合物[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工, 2015,6(6)：45-47.

[4]黃朝輝，蔡丹丹，陳仲益等.保健食品中他達(dá)拉非類似物去甲他達(dá)拉非的檢測研究[J]. 中國藥學(xué)雜志, 2015,2(4)：371-374.

[5]張劍，羅進(jìn)，耿萌輝等.反相高效液相色譜法同時(shí)測定壯陽類保健品中 達(dá)泊西汀和4種PDE5抑制劑[J]理化檢驗(yàn)-理化分冊(cè), 2014,50(3)：323-325.

[6]萬春花，魏強(qiáng)，龍洲雄等.高效液相色譜同時(shí)檢測保健食品 中五種違禁的性功能藥物成分[J]食品科技, 2008,34(3)：275-279.

[7]寧霄, 張偉清, 王鋼力等.保健食品中非法添加藥物檢測現(xiàn)狀及篩查策略研究[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào), 2015,5(5)：1876-1881.

[8]向智敏，張?bào)P，祝明等.HPLC和LC-MS/MS法鑒定鎖固精丸中非法添加的西地那非衍生物[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2010,2(27)：167-169.

[9]曲曉宇，董雷，張四喜等.HPLC-MS/MS法同時(shí)檢測抗疲勞藥物及保健品中非法添加的7種壯陽類化學(xué)藥物[J].藥品監(jiān)督, 2010,2(27)：3129-3130.

[10]董永成，杜士明，陳永順等.中在藥及保健品非法添加化學(xué)成分的類型、危害及對(duì)策[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2006,17(8)：1601-1602.