C1型尼曼-匹克氏癥小鼠的腎臟功能及病理變化*

劉彥禮， 喬 梁， 張金珠， 楊 芬， 閆 巖， 閆 欣△， 林俊堂△

(1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 2河南省醫(yī)用組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 河南 新鄉(xiāng) 453003)

C1型尼曼-匹克氏癥小鼠的腎臟功能及病理變化*

劉彥禮1, 2， 喬 梁1, 2， 張金珠1， 楊 芬1， 閆 巖2， 閆 欣1△， 林俊堂1, 2△

(1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,2河南省醫(yī)用組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 河南 新鄉(xiāng) 453003)

目的： 探討Npc1基因突變小鼠腎臟功能及病理生理的變化，為C1型尼曼-匹克氏癥(NPC1)患者臨床上藥物的使用及腎功能的維持提供理論依據(jù)。方法: 用PCR法確定小鼠基因型；選取出生后第60天(P60)的野生型NCPC1(Npc1+/+)和突變型NCPC1(Npc1-/-)小鼠，檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性及尿素(Urea)、尿酸(UA)和肌酐(Cr)的含量來(lái)評(píng)價(jià)Npc1-/-小鼠的肝腎功能變化；進(jìn)一步常規(guī)冷凍切片后通過(guò)β-半乳糖苷酶染色及Masson染色來(lái)分別評(píng)價(jià)Npc1-/-小鼠腎臟衰老及纖維化情況。結(jié)果: 與P60的Npc1+/+小鼠相比，Npc1-/-小鼠的體重和腎臟重量顯著降低(P<0.01)；肝腎功能明顯減退：ALT、AST及LDH活性顯著升高(P<0.05)，Urea、UA及Cr的含量顯著增加(P<0.05)；冷凍切片染色結(jié)果表明腎臟組織衰老明顯(P<0.01)，纖維化程度顯著增強(qiáng)(P<0.01)。結(jié)論:Npc1基因突變導(dǎo)致的脂質(zhì)異常代謝可加速腎間質(zhì)纖維化，促使腎臟衰老，最終導(dǎo)致腎功能減退。

C1型尼曼-匹克氏癥； 腎臟； 纖維化；Npc1基因

作為一種罕見(jiàn)的致死性常染色體隱性遺傳疾病，C1型尼曼-匹克氏癥(Niemann-Pick disease type C1，NPC1)是由Npc1基因突變引起的神經(jīng)系統(tǒng)及機(jī)體內(nèi)臟脂類代謝異常疾病[1-2]。該病多發(fā)于幼兒，少數(shù)在中青年發(fā)病，新生兒患病率約為1/120 000，患者多在發(fā)病后的5～20年內(nèi)死亡。NPC1患者臨床初期表現(xiàn)為肝脾腫大，后期主要表現(xiàn)為進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)受損，如共濟(jì)失調(diào)、肌張力障礙、癡呆和癲癇等，其主要原因是Npc1蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂類運(yùn)輸障礙，引起細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)體中未酯化的膽固醇、鞘糖脂等沉積，進(jìn)而促使細(xì)胞變性死亡[3-5]。目前，國(guó)內(nèi)外尚缺乏有效的治療手段，主要以對(duì)癥治療、預(yù)防和支持治療為主，最大限度延長(zhǎng)患者壽命，改善患者生活質(zhì)量。

前期研究已表明Npc1基因自發(fā)突變所產(chǎn)生的Npc1-/-小鼠(BALB/cNctr-Npc1m1N/J)臨床表型及相關(guān)病理學(xué)變化與人類NPC1神經(jīng)病變相似，是研究NPC1的理想動(dòng)物模型[6]。目前，NPC1的研究多集中于神經(jīng)系統(tǒng)病變，而對(duì)機(jī)體其它臟器病理變化研究較少[2-3, 5]。因此，本實(shí)驗(yàn)將以Npc1-/-小鼠為對(duì)象，研究其晚期腎臟的病理變化，探討Npc1基因突變對(duì)腎臟影響的潛在機(jī)制，進(jìn)一步為臨床上改善患者生活質(zhì)量和延長(zhǎng)壽命提供支持。

材 料 和 方 法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Npc1+/-小鼠由浙江大學(xué)段樹(shù)民院士提供；6～8周SPF級(jí)BABL/c小鼠，體重(24±2)g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[許可證號(hào)SCXK(京)2012-0001]。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于室溫(22±1)℃，濕度控制在40%～70%，12 h/12 h明暗交替。飼料、墊料和飲水均經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌處理后使用；實(shí)行自由采食和飲水，墊料1周更換2次。

2 主要試劑

鼠尾基因組DNA提取試劑盒及PCR相關(guān)試劑(康為世紀(jì)生物科技有限公司)；β-半乳糖苷酶染色試劑盒及封片液(碧云天生物技術(shù)有限公司)；Masson染色試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

3 主要方法

3.1Npc1-/-小鼠的獲得及鑒定 2月齡雌性BABL/c小鼠與雄性雜合子(Npc1+/-)小鼠按照2∶1配對(duì)合籠，交配后獲得野生型(+/+)、雜合型(+/-)和突變型(-/-)子鼠。子鼠于3周左右斷奶，根據(jù)性別分籠。基因型鑒定程序如下：鼠尾基因組DNA提取后，分別采用圖1A所示引物對(duì)Npc1+/+和Npc1-/-小鼠進(jìn)行基因型鑒定，具體PCR反應(yīng)條件為:94 ℃ 3 min;94 ℃ 30 s,63 ℃ 45 s,72 ℃ 45 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 2 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。判斷標(biāo)準(zhǔn)為：野生型(Npc1+/+)173 bp；雜合型(Npc1+/-)173 bp和475 bp；突變型(Npc1-/-)475 bp。

3.2 血清中肝腎功能相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè) 取出生后第60天(postnatal day 60，P60)的Npc1-/-和Npc1+/+小鼠各5只，稱重后采用摘眼球法收集血液約0.6 mL于促凝管中，立即送至新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三方醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。其中血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)及乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)活性通過(guò)速率法檢測(cè)；血清中尿素(urea)、尿酸(uric acid，UA)及肌酐(creatinine，Cr)含量分別通過(guò)脫氫酶法、尿素酶法及氧化酶法進(jìn)行測(cè)定。

Figure 1.The results of mouse genotype identification. A: the primers used to identify different genotypes of NPC1 mice; B: PCR results of three genotypes for NPC1 mice after electrophoresis.Npc1+/+: wild type;Npc1+/-: heterozygote;Npc1-/-: mutant.

圖1 野生型與突變型小鼠鑒定所需引物及結(jié)果

3.3 組織取材及切片 將上述采血后小鼠快速打開(kāi)腹腔，摘取腎臟稱重后轉(zhuǎn)移至4 ℃預(yù)冷處理的PBS液漂洗3次，置于4%多聚甲醛(paraformaldehyde，PFA)中，4 ℃搖床過(guò)夜；取出組織吸干液體，經(jīng)15%和30%蔗糖溶液梯度過(guò)夜脫水，待組織沉淀到管底部時(shí)取出吸干液體；用錫箔紙做一直徑為1 cm的柱狀模型，加入適量OCT包埋劑，使腎臟豎立，確定腎臟位于柱狀模型的正中央，置于液氮中冷凍后放-80 ℃冰箱保存；切片時(shí)取出已包埋的組織在冷凍切片機(jī)上固定，厚度20 μm切片后，于烤片機(jī)上37 ℃烤片30 min以上。

3.4 β-半乳糖苷酶染色 將冰凍切片于室溫下固定30 min(β-半乳糖苷酶染色固定液)，PBS漂洗3次，每次5 min；棄去PBS后加入適量染色工作液(按試劑盒說(shuō)明配制)，置于濕盒內(nèi)37 ℃孵育過(guò)夜；封片后于體式顯微鏡及普通光學(xué)顯微鏡下觀察；每種基因型(Npc1-/-和Npc1+/+)至少檢測(cè)3只小鼠。隨后，將原始圖片轉(zhuǎn)換成黑白圖片，應(yīng)用Motic Images Advanced 3.2軟件進(jìn)行灰度值掃描并量化。

3.5 Masson染色 將冰凍切片于室溫下用4%PFA固定15 min，PBS漂洗3次；核染液染色60 s，沖洗液沖洗30 s；漿染液染色60 s，沖洗液沖洗30 s；分色液分色10 min后，復(fù)染液染色1 min；無(wú)水乙醇沖洗，封片后于體式顯微鏡及普通光學(xué)顯微鏡下觀察，并對(duì)由膠原纖維沉積形成的斑塊進(jìn)行量化；每種基因型(Npc1-/-和Npc1+/+)至少檢測(cè)3只小鼠。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有檢測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，用SPSS 13.0軟件完成統(tǒng)計(jì)，采用Student’st檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1Npc1-/-小鼠的鑒定

提取新生小鼠尾部DNA，利用野生型和突變型引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果如圖1B所示。Npc1+/-小鼠可擴(kuò)增出大小分別為475 bp和173 bp的2條目的條帶；Npc1+/+小鼠僅能擴(kuò)增出1條173 bp的條帶；而Npc1-/-小鼠僅能擴(kuò)增出1條475 bp的條帶。

2 晚期Npc1-/-小鼠腎臟重量及肝腎功能的檢測(cè)

Npc1-/-小鼠腎臟重量檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，與Npc1+/+小鼠相比，Npc1-/-小鼠無(wú)論在體重及腎臟重量上均顯著減少(P<0.01)。進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)血清中與肝臟及腎臟相關(guān)的關(guān)鍵酶活性及活性物質(zhì)的含量變化來(lái)評(píng)價(jià)晚期Npc1-/-小鼠肝腎功能，結(jié)果如表1所示：與Npc1+/+小鼠相比，Npc1-/-小鼠血清中urea、Cr及UA含量均顯著升高(P<0.05)，同時(shí)LDH、 ALT及AST的活性也有顯著升高(P<0.05)。

Figure 2.The body weight and kidney weight ofNpc1+/+andNpc1-/-mice at P60. Mean±SD.n=22.**P<0.01vsNpc1+/+mice.

圖2 P60Npc1+/+與Npc1-/-小鼠體重及腎臟重量比較

3 晚期Npc1-/-小鼠腎臟組織衰老的檢測(cè)

Npc1+/+與Npc1-/-小鼠的β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性(靛藍(lán)色)細(xì)胞均定位在腎皮質(zhì)，髓質(zhì)中鮮有表達(dá)；與Npc1+/+小鼠相比，Npc1-/-小鼠腎臟的β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性區(qū)域靛藍(lán)色程度明顯增加，且大部分腎小管出現(xiàn)彌漫性陽(yáng)性染色；隨后，將原始圖片轉(zhuǎn)換成黑白圖片，灰度值掃描結(jié)果顯示Npc1+/+與Npc1-/-小鼠的β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性區(qū)域著色程度具有顯著差異(P<0.01),見(jiàn)圖3。

表1 肝腎功能相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

Table 1.The activity of key enzymes and content of urea, UA and Cr in the serum ofNpc1+/+ andNpc1-/- mice at P60 (Mean±SD.n=5)

IndexesNpc1+/+Npc1-/-Urea(mmol/L)7.00±0.3011.53±1.31*Cr(μmol/L)11.33±0.5816.67±2.43*UA(μmol/L)102.00±20.81302.33±47.07**LDH(U/L)789.67±276.512014.33±560.42*ALT(U/L)37.33±9.54560.67±41.31**AST(U/L)128.67±27.54983.67±36.85**

Cr: creatinine; UA: uric acid; LDH: lactate dehydrogenase; ALT: alanine aminotranferase; AST: aspartate aminotranferase.*P<0.05,**P<0.01vsNpc1+/+mice.

Figure 3.Senescence-associated β-galactosidase staining in renal tissues ofNpc1+/+andNpc1-/-mice at P60. A: the images of β-galactosidase staining in renal tissues ofNpc1+/+andNpc1-/-mice under microscope; B: quantification of the color value in the transformed monochrome images. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNpc1-/-mice.

圖3 P60Npc1+/+與Npc1-/-小鼠腎臟組織β-半乳糖苷酶衰老染色結(jié)果

4 晚期Npc1-/-小鼠腎臟組織纖維化的檢測(cè)

Npc1-/-小鼠腎臟Masson染色纖維化部位(圖中黑色箭頭所指藍(lán)色部位)主要定位于腎小管間質(zhì)，可見(jiàn)大量膠原沉積，成條索狀或小片狀分布，著色深；而Npc1+/+小鼠腎臟Masson染色后未見(jiàn)明顯膠原沉積形成；量化結(jié)果表明二者在由膠原沉積產(chǎn)生的斑塊數(shù)量上具有顯著性差異(P<0.01)，見(jiàn)圖4。

Figure 4.Masson staining for renal fibrosis inNpc1+/+andNpc1-/-mice at P60 (the collagen plaques are indicated by black arrows). Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNpc1-/-mice.

圖4 P60Npc1+/+與Npc1-/-小鼠腎臟組織Masson染色結(jié)果

討 論

NPC1作為一種典型的神經(jīng)退行性疾病，是由Npc1基因突變所引起的，其所編碼的蛋白是由1 278個(gè)氨基酸殘基組成的細(xì)胞膜蛋白分子，可直接結(jié)合膽固醇后將其從脂質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)到質(zhì)膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡[7-9]。該病多發(fā)于幼兒，少數(shù)在中青年發(fā)病，由于NPC病因的不可逆性，國(guó)內(nèi)外目前尚缺乏有效的治療手段，主要以預(yù)防性和支持性治療為主，最大限度延長(zhǎng)患者壽命，改善患者生活質(zhì)量。

前期研究發(fā)現(xiàn)，NPC1患者神經(jīng)組織中存在大量異常膽固醇、鞘磷脂及糖脂的沉積，其主要病理特征為神經(jīng)軸突營(yíng)養(yǎng)不良伴有球狀軸突形成、神經(jīng)元變性以及進(jìn)行性脫髓鞘；進(jìn)一步的研究表明，NPC1患者海馬等腦區(qū)存在大量的神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFT)，除異常磷酸化的tau蛋白外，還發(fā)現(xiàn)NFT或球狀軸突內(nèi)聚集了大量高度磷酸化的細(xì)胞骨架蛋白[10-12]。近年來(lái)，針對(duì)該疾病經(jīng)典動(dòng)物模型Npc1-/-小鼠的深入研究發(fā)現(xiàn)，該小鼠的丘腦-皮質(zhì)系統(tǒng)在出生后3周左右即出現(xiàn)大量阿米巴樣的小膠質(zhì)細(xì)胞，其活性隨著病情的發(fā)展逐漸增強(qiáng)，而大腦的不同部位超磷酸化神經(jīng)細(xì)絲表達(dá)量也隨著病情發(fā)展顯著增加，產(chǎn)生大量的NFT，導(dǎo)致神經(jīng)元變性或死亡，引起海馬、丘腦、小腦和脊髓等多處神經(jīng)組織發(fā)生病理性變化[13-15]。

目前，針對(duì)NPC1的研究多集中于神經(jīng)及肝脾組織，對(duì)腎臟組織在疾病發(fā)展中的病理變化鮮有報(bào)道，僅明確在患者腎臟組織中存在典型的泡沫樣細(xì)胞[1, 4]。而腎臟作為機(jī)體內(nèi)容易受損、衰老的重要臟器，其功能運(yùn)轉(zhuǎn)情況深切影響患者生活質(zhì)量及壽命。因此，本研究首先針對(duì)晚期(P60)Npc1-/-小鼠腎功能指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與Npc1+/+小鼠相比，Npc1-/-小鼠腎臟重量不僅顯著降低，而且功能減退明顯。基于上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及已明確的Npc1基因突變會(huì)引起神經(jīng)細(xì)胞過(guò)早凋亡等事實(shí)，我們推測(cè)Npc1基因突變亦會(huì)引起腎臟組織過(guò)早衰老，隨后的β-半乳糖苷酶衰老染色結(jié)果也證實(shí)了Npc1-/-小鼠腎臟衰老程度要顯著高于Npc1+/+小鼠；而進(jìn)一步纖維化染色結(jié)果證明了Npc1-/-小鼠腎臟的衰老快速可能與其腎間質(zhì)纖維化有關(guān)。

綜上所述，本研究初步闡明了Npc1基因突變引起的脂質(zhì)代謝異常可加速腎間質(zhì)纖維化，促使腎臟衰老，最終導(dǎo)致患者腎功能減退。該結(jié)果可為NPC1患者臨床上藥物的使用及腎臟功能的維持提供借鑒，以期最大限度地改善患者生活質(zhì)量及延長(zhǎng)壽命。

[1] Vanier MT. Niemann-Pick disease type C[J]. Orphanet J Rare Dis, 2010, 5:16.

[2] 歐 翔，唐朝克. C 型尼曼-匹克蛋白 1 和 2 在細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)平衡中的作用[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2007, 23(4):820-824.

[3] Patterson MC, Hendriksz CJ, Walterfang M, et al. Re-commendations for the diagnosis and management of Niemann-Pick disease type C: an update[J]. Mol Genet Metab, 2012, 106(3):330-344.

[4] 湯 穎，劉 偉，劉俊平. C 型尼曼-皮克病的臨床和病理學(xué)進(jìn)展[J]. 中華病理學(xué)雜志, 2010, 39(5): 356-360.

[5] Mengel E, Klünemann HH, Louren?o CM, et al. Niemann-Pick disease type C symptomatology: an expert-based clinical description[J]. Orphanet J Rare Dis, 2013, 8:166.

[6] Loftus SK, Morris JA, Carstea ED, et al. Murine model of Niemann-Pick C disease: mutation in a cholesterol homeostasis gene[J]. Science, 1997, 277(5323): 232-235.

[7] Vanier MT. Complex lipid trafficking in Niemann-Pick disease type C[J]. J Inherit Metab Dis, 2015, 38(1): 187-199.

[8] Maulik M, Thinakaran G, Kar S. Alterations in gene expression in mutant amyloid precursor protein transgenic mice lacking Niemann-Pick type C1 protein[J]. PLoS One, 2013, 8(1):e54605.

[9] 李 慧, 楊志明, 肖傳實(shí), 等. 血管緊張素-(1-7)與血管緊張素Ⅱ?qū)HP-1巨噬細(xì)胞NPC1表達(dá)及膽固醇流出的影響[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2011, 27(3): 455-459.

[10]Kodam A, Maulik M, Peake K, et al. Altered levels and distribution of amyloid precursor protein and its processing enzymes in Niemann-Pick type C1-deficient mouse brains[J]. Glia, 2010, 58(11):1267-1281.

[11]Yan X, Yang F, Lukas J, et al. Hyperactive glial cells contribute to axonal pathologies in the spinal cord of Npc1 mutant mice[J]. Glia, 2014, 62(7): 1024-1040.

[12]Sarna JR, Larouche M, Marzban H, et al. Patterned Purkinje cell degeneration in mouse models of Niemann-Pick type C disease[J]. J Comp Neurol, 2003, 456(3): 279-291.

[13]Bi X, Liao G. Autophagic-lysosomal dysfunction and neurodegeneration in Niemann-Pick Type C mice: lipid starvation or indigestion?[J]. Autophagy, 2007, 3(6): 646-648.

[14]Bu B, Li J, Davies P, et al. Deregulation of cdk5, hyperphosphorylation, and cytoskeletal pathology in the Niemann-Pick type C murine model[J]. J Neurosci, 2002, 22(15): 6515-6525.

[15]Pressey SNR, Smith DA, Wong AMS, et al. Early glial activation, synaptic changes and axonal pathology in the thalamocortical system of Niemann-Pick type C1 mice[J]. Neurobiol Dis, 2012, 45(3):1086-1100.

(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅 森)

記憶提取過(guò)程中杏仁核積極和消極信息的不同路徑

眾所周知，基底外側(cè)杏仁核(basolateral amygdala, BLA)在積極和消極記憶信息的形成中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，但我們對(duì)于其相關(guān)信息的編碼和路徑知之甚少。Beyeler等記錄了在相關(guān)記憶提取過(guò)程中BLA神經(jīng)元的變化，并使用光遺傳學(xué)介導(dǎo)的光學(xué)示蹤技術(shù)來(lái)鑒定連接BLA與伏隔核(nucleus accumbens, NAC)、中央杏仁核(central amygdala, CEA)或腹側(cè)海馬回(ventral hippocampus, vHPC)的神經(jīng)元群的數(shù)量。研究發(fā)現(xiàn)，盡管每個(gè)群內(nèi)都發(fā)生了不同的神經(jīng)反應(yīng)，但被獎(jiǎng)勵(lì)預(yù)測(cè)回路興奮的BLA-NAc神經(jīng)元和被厭惡預(yù)測(cè)回路興奮的BLA-CeA神經(jīng)元數(shù)量均多于整個(gè)BLA。雖然已知BLA-vHPC投射回路可驅(qū)動(dòng)先天性消極行為，但這些神經(jīng)元并不傾向于編碼習(xí)得性消極行為。總之，這些研究結(jié)果表明，在BLA，兩價(jià)信息的編碼至少部分經(jīng)由解剖學(xué)意義上的神經(jīng)元群的不同活動(dòng)所介導(dǎo)。

Neuron, 2016, 90(2):348-361(范沖竹)

Renal function and pathological changes in Niemann-Pick disease type C1 mice

LIU Yan-li1, 2, QIAO Liang1, 2, ZHANG Jin-zhu1, YANG Fen1, YAN Yan2, YAN Xin1, LIN Jun-tang1, 2

(1CollegeofLifeScienceandTechnology,XinxiangMedicalUniversity,2HenanKeyLaboratoryofMedicalTissueRegeneration,Xinxiang453003,China.E-mail:pangyufu@aliyun.com;linjtlin@126.com)

AIM: To investigate the renal function and pathological changes inNpc1 mutant (Npc1-/-) mice. METHODS: Different genotypes of Niemann-Pick disease type C1 (Npc1) mice were identified by PCR. Subsequently, the renal function ofNpc1-/-andNpc1+/+mice at postnatal day 60 (P60) was evaluated by measuring the activity and content of important indicators in the serum including ALT, AST, LDH, urea, UA and Cr. Furthermore, β-galactosidase staining and Masson staining were performed to examine the aging and fibrosis of the renal tissues, respectively. RESULTS: Compared with theNpc1+/+mice, the body weight and kidney weight had a significant reduction (P<0.01) in theNpc1-/-mice. The results of hepatic and renal functions showed that the activities of ALT, AST and LDH, and contents of urea, UA and Cr had marked increases (P<0.05) in theNpc1-/-mice. Moreover, the results of senescence-associated β-galactosidase staining in the renal tissues demonstrated accelerated aging in theNpc1-/-mice (P<0.01), and these results were confirmed by Masson staining, which clearly showed the formation of collagen fibers (P<0.01).CONCLUSION: Mutation of theNpc1 gene results in abnormal lipid metabolism, which accelerates kidney senescence by promoting fibrosis in the renal tissue and subsequently causes reduction in renal function.

Niemann-Pick disease type C1; Kidney; Fibrosis;Npc1 gene

1000- 4718(2016)08- 1435- 05

2015- 12- 31

2016- 03- 10

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81400936)；國(guó)家自然科學(xué)基金-河南人才培養(yǎng)聯(lián)合基金資助項(xiàng)目(No. U1304808)；河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目計(jì)劃(No. 15A180009)

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.08.016

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