乙肝表面抗原陽性的非霍奇金淋巴瘤患者化療前后T淋巴細胞亞群的變化

范小紅，孟亞紅，鄒　健，王雪蓮，孫麗華

(復旦大學附屬中山醫院青浦分院，上海 201700)

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乙肝表面抗原陽性的非霍奇金淋巴瘤患者化療前后T淋巴細胞亞群的變化

范小紅，孟亞紅，鄒健，王雪蓮，孫麗華

(復旦大學附屬中山醫院青浦分院，上海 201700)

[摘要]目的探討非霍奇金淋巴瘤(NHL)合并乙肝表面抗原(HBsAg)陽性患者化療前后T淋巴細胞亞群和輔助性T淋巴細胞(Th)的異常漂移變化，為該病的治療提供更多依據。方法根據HBsAg是否陽性將82例NHL患者分為陽性組26例和陰性組56例，觀察2組的療效及治療前后腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-10、IL-6、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD4+CD25+Treg和NK細胞水平的變化。結果陽性組的完全緩解率明顯低于陰性組(P<0.05)。2組治療前TNF-α、IL-10、IL-6、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD4+CD25+Treg和NK細胞水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)；2組治療后IL-10、IL-6、CD8+、CD19+、CD4+CD25+Treg均較治療前明顯降低(P均<0.05)，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK細胞水平均較治療前明顯升高(P均<0.05)，而陰性組變化較陽性組更為明顯(P均<0.05)；治療后陽性組的TNF-α水平明顯高于治療前和陰性組(P均<0.05)。結論NHL合并HBsAg陽性患者化療效果明顯低于HBsAg陰性患者，其機制可能與HBV加劇機體的細胞和體液免疫紊亂及Th細胞的異常漂移有關。

[關鍵詞]非霍奇金淋巴瘤；乙型肝炎；化療；T淋巴細胞亞群

非霍奇金淋巴瘤(NHL)是世界七大惡性腫瘤之一，其發病與HIV病毒、人T細胞白血病病毒、幽門螺桿菌和EB病毒感染有關。目前研究表明乙肝病毒(HBV)與淋巴組織具有較高的親嗜性，HBV可使NHL發病危險增加[1]。NHL是一種免疫性疾病，預后與機體的免疫狀態具有密切的關系，可能與輔助性T淋巴細胞(Th)的異常漂移，機體Th1和Th1的失衡等具有明顯的相關性。但NHL合并HBV患者預后是否與Th的異常漂移及Th1和Th1的失衡有關報道較少。為此筆者進行了相關研究，以探討NHL合并乙肝表面抗原(HBsAg)陽性患者化療前后T淋巴細胞亞群和Th的異常漂移變化，現將結果報道如下。

1臨床資料

1.1一般資料選擇2013年1月—2015年6月在我院住院的NHL患者82例，均行骨髓穿刺結合輔助學檢查符合NHL的診斷。排除化療前發生肝腎功能異常者，有肝轉移灶者，合并有其他病毒類型肝炎者，孕婦或者妊娠者，化療方案、治療療程不符合本研究者，使用對本研究結果有影響藥物者，有大三陽者。根據HBsAg是否陽性分為2組：陽性組26例，男14例，女12例；年齡30～60(46.66±10.16)歲；病程2～8(4.12±1.36)年。陰性組56例，男34例，女22例；年齡30～60(45.18±8.98)歲；病程2～8(3.75±1.18)年。2組年齡、性別、病程等資料比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.2治療方法2組均采用CHOP方案或CHOP與利妥昔單抗聯合方案化療，治療前常規給予5-HT受體拮抗劑預防性止吐及質子泵抑制劑護胃治療。CHOP方案：長春新堿1.4 mg/m2靜推，第1天；環磷酰胺 750 mg/m2靜推，第1天；阿霉素50 mg/m2靜推，第1天；潑尼松100 mg/d口服，第1—5天。利妥昔單抗375 mg/m2靜脈緩慢注射，用藥前30 min給予甲基潑尼松龍40 mg靜脈注射。均以 3 周為1個療程，連續化療3個療程。

1.3觀察指標①2組臨床療效。②于治療前和治療3個療程后抽取2組患者空腹靜脈血，采用Freedom Evolyzer 2150 型全自動酶標儀以酶聯免疫法測定腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-10、IL-6水平，用直接免疫熒光標記全血溶血法和流式細胞技術檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD4+CD25+Treg和NK細胞水平。試劑盒均購自美國R&D公司，所有檢測項目均嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.4療效評價標準淋巴結無法觸及，細胞學檢查陰性，CT提示淋巴結直徑不超過1 cm，骨髓的形態學和組織學正常，至少穩定保持28 d為完全緩解(CR)；可測的病灶較原先縮小50%以上為部分緩解(PR)；病灶增大不超過25%或者縮小不足50%為穩定(SD)；可測病灶較原先增大超過25%，或者出現新的病灶為進展(PD)。

2結果

2.12組療效比較陽性組CR率明顯低于陰性組(P<0.05)。見表1。

表1　2組療效比較　例(%)

注：①與陰性組比較，P<0.05。

2.22組治療前后TNF-α、IL-10和IL-6水平比較2組治療前TNF-α、IL-10、IL-6水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。2組治療后IL-10和IL-6均較治療前明顯降低(P均<0.05)，且陰性組降低更為明顯(P均<0.05)； 陽性組治療后TNF-α均較治療前和陰性組明顯升高(P均<0.05)。見表2。

2.32組治療前后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較2組治療前CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。2組治療后CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較治療前明顯升高(P均<0.05)，CD8+較治療前明顯降低(P均<0.05)，且陰性組升高或降低更為明顯(P均<0.05)。見表3。

表2　2組治療前后TNF-α、IL-10和IL-6水平比較

注：①與治療前比較，P<0.05;②與陰性組比較，P<0.05。

表3　2組治療前后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較

注：①與治療前比較，P<0.05;②與陰性組比較，P<0.05。

2.42組治療前后CD19+、CD4+CD25+Treg和NK細胞水平比較2組治療前CD19+、CD4+CD25+Treg和NK細胞水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。2組治療后CD19+、CD4+CD25+Treg均較治療前明顯降低(P均<0.05)，NK細胞水平較治療前明顯升高(P均<0.05)，且陰性組降低或升高更為明顯(P均<0.05)。見表4。

表4　2組治療前后CD19+、CD4+CD25+Treg和NK細胞水平比較

注：①與治療前比較，P<0.05;②與陰性組比較，P<0.05。

3討論

HBV與淋巴組織具有較高的親嗜性，同時NHL患者由于免疫力低下，導致NHL患者更易被HBV感染。NHL的治療主要以化療為主，化療對機體的免疫功能可能會造成負面影響；而HBV感染也會引起機體的免疫功能下降，導致原癌基因激活，細胞凋亡機制出現紊亂[2-4]，且HBV感染單核細胞引起癌基因的轉錄，可以引發NHL；HBV感染內皮細胞后，導致TNF-α產生，引起淋巴細胞的增殖，從而促進腫瘤的生長[5-7]。

淋巴細胞是免疫系統的主要細胞，根據細胞表面的標記，可以將其分為T細胞、B細胞和NK細胞等。T細胞中CD4+T細胞可協助B細胞進行分化和產生抗體，而CD8+T細胞具有殺傷和抑制作用[8]。CD4+T細胞亞群包括Th1、Th1和調節性T細胞(Treg)，其中Th1主要通過分泌TNF-α促進機體的免疫功能[9]，而TNF-α能夠激活機體的CD8+T細胞和NK細胞釋放細胞因子和穿孔素，從而抑制腫瘤細胞的生長。Th1和Treg有免疫抑制作用[10]，其中Th1主要通過分泌IL-6和IL-10發揮免疫抑制作用[11-12]。IL-10是一種多功能細胞因子，可以作用于多種免疫細胞亞群,并通過多種方式發揮免疫抑制作用,在機體腫瘤免疫逃逸中起重要作用，其可以抑制單核細胞和巨噬細胞的吞噬作用。IL-6是功能最為廣泛的細胞因子，其促進腫瘤生長作用大于機體的保護作用。CD4+CD25+Treg在維持外周自身免疫耐受及免疫應答穩態方面起著關鍵的作用,其數量或功能異常可引發多種自身免疫性疾病，大量CD4+CD25+Treg的出現使機體處于腫瘤逃逸狀態，使腫瘤細胞逃避機體免疫系統的監視和殺傷，促進腫瘤的發生發展，影響預后[13-14]。

本研究結果顯示，陽性組CR率明顯低于陰性組；2組治療后IL-10、IL-6、CD8+、CD19+、CD4+CD25+Treg水平均較治療前明顯降低，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK細胞水平均較治療前明顯升高，而陰性組降低或升高水平較陽性組更為明顯, 陽性組治療后TNF-α水平明顯高于治療前和陰性組。提示HBV能夠引起機體細胞免疫和體液免疫的紊亂，進而導致Th1和Th1紊亂，從而影響化學藥物治療NHL的臨床效果。

綜上所述，NHL合并HBsAg陽性患者化療的療效明顯差于HBsAg陰性患者，其機制可能與HBV加劇機體的細胞和體液免疫紊亂及Th細胞的異常漂移有關。

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Changes of T lymphocyte subsets in Hepatitis B surface antigen-positive patients with non-Hodgkin's lymphoma before and after chemotherapy

FAN Xiaohong, MENG Yahong, ZOU Jian, WANG Xuelian, SUN Lihua

(Qingpu Branch of Zhongshan Hospital Affiliated to Fudan University, Shanghai 201700, China)

Abstract:Objective It is to investigate the changes of T lymphocyte subsets and helper T lymphocytes (Th) drift in Hepatitis B surface antigen-positive (HBsAg+) patients with non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) before and after chemotherapy. Methods 82 patients with NHL were divided into positive group [26 cases, HBsAg(+)] and negative group [56 cases, HBsAg(-)] according to whether HBsAg positive, the efficacy, and the levels of tumor necrosis factor (TNF) -α, interleukin (IL) -10, IL-6, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+, CD19+, CD4+CD25+ Treg and NK cell before and after treatment were observed and compared in each group. Results The complete remission rate of the positive group was significantly lower than that of the negative group (P<0.05). There was no significant difference in the levels of TNF-α, IL-10, IL-6, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+, CD19+, CD4+CD25+ Treg and NK before treatment between the both groups (all P>0.05); after treatment, the levels of IL-10, IL-6, CD8+, CD19+ and CD4+CD25+ Treg after treatment were significantly lower and the levels of CD3+, CD4+ and CD4+/CD8+ and NK were significantly higher in the both groups (all P<0.05), and there were significant differences between the both groups (all P<0.05); the level of TNF-α of the positive group were significantly higher compared with before treatment and the negative group (all P<0.05). Conclusion The effect of chemotherapy in NHL patients with HBsAg(+) is significantly worse than that with HBsAg(-), their mechanism may be associated with the disorders of cellular and humoral immune, and the abnormal drift of Th cells by HBV.

Key words:non-Hodgkin’s lymphoma; hepatitis B; chemotherapy; T lymphocyte subsets

[收稿日期]2015-10-25

[中圖分類號]R55

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)09-0920-04

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.09.003

[基金項目]復旦大學附屬中山醫院青浦分院院內基金課題(QYT 2013-01)

[作者簡介]范小紅，女，主治醫師，研究方向為血液惡性腫瘤。[通信作者]孫麗華，E-mail:qpsunlh023@126.com