4種中藥對(duì)廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用*

吳賢麗，龐載元，敖茂程，華　毅

(攀枝花市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川攀枝花 617067)

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·論著·

4種中藥對(duì)廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用*

吳賢麗，龐載元△，敖茂程，華毅

(攀枝花市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川攀枝花 617067)

摘要:目的研究黃芩等4種中藥對(duì)廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(XDRAB)的抑菌作用，為臨床治療XDRAB感染尋找新的途徑。方法采用試管倍比稀釋法測(cè)定黃芩、連翹、黃連、金銀花4種藥物的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果黃芩、連翹、黃連、金銀花對(duì)XDRAB的MIC平均值分別為30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黃連的抑菌作用最強(qiáng)。攀枝花市與外地收集的菌株抑菌作用比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論4種中藥對(duì)XDRAB均有不同程度的抑菌作用。

關(guān)鍵詞:中藥；廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌；體外抑菌試驗(yàn)

鮑曼不動(dòng)桿菌是一種獲得耐藥性和克隆傳播能力都非常強(qiáng)大的細(xì)菌，廣泛耐藥、多重耐藥、全耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌在全世界范圍內(nèi)都呈流行趨勢(shì)，目前已經(jīng)成為我國院內(nèi)感染最重要的病原菌之一[1]。廣泛耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌(XDRAB)是指對(duì)臨床常用的5類抗菌藥物都耐藥，而僅對(duì)1至2種抗菌藥物，主要是替加環(huán)素和(或)多黏菌素敏感的菌株[2-3]。多黏菌素類藥物的神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)發(fā)生率高且具有腎毒性。由于多黏菌素E異質(zhì)性耐藥的存在，在臨床中常需要聯(lián)合其他抗菌藥物一起使用[4-6]。耐亞胺培南鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素有較好的敏感性[7-9]，但替加環(huán)素血藥濃度、腦脊液濃度低，而且常需與其他抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用，價(jià)格過于昂貴[10]。雖然解決該菌耐藥性問題的途徑還有開發(fā)新的抗菌藥物，但投資大、周期長是新藥開發(fā)會(huì)遇到的難題。常用的抗菌中草藥有近百種，而且中藥治療感染性疾病有悠久的歷史[11]。本研究采用試管倍比稀釋法對(duì)4種中藥配方顆粒的體外抗XDRAB活性進(jìn)行了檢測(cè)，參考了文獻(xiàn)[12]的相關(guān)方法并做了相應(yīng)的改進(jìn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1菌株的選取收集2010年4月至2011年4月分離自本院和浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院(外院)臨床標(biāo)本的XDRAB 30株，選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853、ATCC25922、ATCC25923用于對(duì)比分析。

1.2儀器與耗材包括孵箱、1 000 μL無菌吸頭、1 000 μL加樣槍、帶帽無菌試管、試管架、比濁儀、API 0.85% 3 mL無菌鹽水管、梅里埃公司生產(chǎn)的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏試驗(yàn)專用肉湯。

1.3方法

1.3.1中藥的選取與制備通過查閱文獻(xiàn)，選擇有抗菌活性的4種中藥配方顆粒。這4種中藥配方顆粒包括黃連、金銀花、黃芩、連翹，均由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)。將中藥配方顆粒溶解于無菌蒸餾水中，使其生藥的質(zhì)量濃度為1 000 mg/mL。

1.3.2細(xì)菌的培養(yǎng)與稀釋將選定的實(shí)驗(yàn)菌株接種于血平板培養(yǎng)基，于37 ℃孵箱中孵育24 h后挑取菌落于API 3 mL 0.85%無菌鹽水管中并配制成0.5麥?zhǔn)媳葷釂挝坏募?xì)菌,使其細(xì)菌密度為1.5×108CFU/L。

1.3.3最低抑菌濃度(MIC)的測(cè)定按臨床標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)推薦的液體稀釋法測(cè)定實(shí)驗(yàn)菌株的MIC值，稀釋液為梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏試驗(yàn)用肉湯。

1.3.4操作步驟10支無菌試管中各加入1 mL肉湯，于第1管加入1 mL中藥藥液(生藥濃度為1 000 mg/mL)，充分混勻后取出1 mL加入第2管，混勻后再取出1 mL加入第3管，反復(fù)操作至第9管。混勻后，從第9管取出1 mL液體丟棄，第10管不加入藥液，作為MIC測(cè)定的陽性對(duì)照。除第9管外在每個(gè)試管中加入0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?0 μL,第9管作為MIC測(cè)定的陰性對(duì)照。從第1管至第8管的生藥濃度依次為500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91 mg/mL，將各管充分混勻后放置于37 ℃孵箱中培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)菌生長情況。在陰性對(duì)照管無細(xì)菌生長，陽性對(duì)照管中的細(xì)菌生長正常的條件下,出現(xiàn)無渾濁試管的最小濃度即為MIC。以上的所有無菌操作均需在生物安全柜中進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS17.0，4種中藥對(duì)菌株的MIC的比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

黃芩、連翹、黃連、金銀花對(duì)30株XDRAB有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黃連的抑菌作用最強(qiáng)。兩個(gè)醫(yī)院的MIC相比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　　　4種中藥對(duì)兩個(gè)醫(yī)院分離的XDRAB的

3討論

抗菌藥物的廣泛和不合理應(yīng)用，使細(xì)菌的耐藥性日趨嚴(yán)重，醫(yī)院由XDRAB引起的感染呈逐年升高的趨勢(shì)，特別是重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)尤為嚴(yán)重。抗菌藥物中可供選擇的藥物很少，而且療效差、不良反應(yīng)大，給臨床治療帶來了困難，而中藥對(duì)XDRAB有一定的體外抑菌作用。

黃芩、連翹、黃連、金銀花對(duì)30株XDRAB有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黃連的抑菌作用最強(qiáng)。黃連、金銀花和連翹的抑菌濃度比冷會(huì)勇等[13]報(bào)道的對(duì)XDRAB的抑菌濃度低，而黃芩抑菌濃度與之接近。4種中藥對(duì)XDRAB的抑菌濃度比龐載元等[14]報(bào)道的對(duì)廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌濃度低，4種中藥對(duì)本地與外地收集的菌株抑菌作用無明顯差異。

中藥中有抗菌作用的有近百種，但是這些中藥的最小抑菌濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于按常規(guī)劑量口服所得的血藥濃度[15]。本研究中，黃連的MIC平均為27.61 mg/mL，若按5 000 mL的成年人體液量計(jì)算，需要一次性地口服多達(dá)138 g的生藥才可能在體內(nèi)達(dá)到所需要的抑菌濃度，而2～10 g是黃連的常規(guī)劑量[16]。因此口服黃連藥液遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到治療所需的血藥濃度。本研究中，黃芩的平均MIC為30.99 mg/mL，若按成年人的體液量為5 000 mL計(jì)算，一次性地口服155 g生藥才可能在體內(nèi)達(dá)到抑菌濃度，而5～15 g為黃芩的常規(guī)劑量[16]，也不可能達(dá)到治療所需的血藥濃度。彭乙華等[17]報(bào)道，中藥單體注射制劑棓丙酯對(duì)XDRAB的體外MIC為64～128 μg/mL，有較高的抑菌活性。但按成年人5 000 mL的體液量計(jì)算，仍需要藥物320～640 mg，而棓丙酯靜脈滴注一次的允許用量不超過180 mg。所以其采用靜脈滴注在人體內(nèi)也不可能達(dá)到有效抑菌濃度。從上述中藥的抑菌試驗(yàn)可以看出，傳統(tǒng)給藥模式難以發(fā)揮中藥的抗菌作用。

呼吸道毛細(xì)血管致密、豐富，吸收面積大，藥物吸收快，速率僅次于靜脈給藥[16]。通過霧化吸入，藥物可直達(dá)病灶，因此這種途徑給藥的藥物用量少，可以避免口服給藥中血藥濃度過低的瓶頸，吸入給藥是中藥治療呼吸道感染不錯(cuò)的選擇。肺炎[18-20]和上呼吸道感染[21-23]采用中藥霧化吸入治療的報(bào)道較多，療效受到肯定。本研究顯示，雖然4種中藥對(duì)XDRAB有不同程度的體外抗菌活性，但按常規(guī)劑量口服在體內(nèi)均不能達(dá)到應(yīng)有的抑菌濃度。中藥霧化吸入治療XDRAB引起的肺炎是值得進(jìn)一步研究的方法。

在中藥抗菌治療的研究中，已經(jīng)有很多證據(jù)表明中藥在抗菌治療方面蘊(yùn)藏著巨大潛力。在臨床應(yīng)用中，還需要對(duì)其給藥途徑進(jìn)行進(jìn)一步的研究，不斷創(chuàng)新與開拓，才能使其更好地發(fā)揮作用。

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The bacteriostatic effect of four kinds of traditional Chinese herbal medicines on strains of extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii*

WuXianli,PangZaiyuan△，AoMaocheng，HuaYi

(DepartmentofLaboratory,PanzhihuaCentralHospital,Panzhihua，Sichuan617067，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the bacteriostatic effect of 4 kinds of traditional Chinese herbal medicine on extensively drug-resistant A.baumannii(XDRAB) bacteriostatic effect,find a new way for the clinical treatment of the XDRAB infection.MethodsThe minimal inhibitory concentrations(MICs) of scutellaria,forsythia,rhizoma coptidis,honeysuckle were determined by using broth two-fold dilution method.ResultsThe mean values of MICs of scutellaria,forsythia,rhizoma coptidis,honeysuckle were 30.99,187.50,27.61 and 75.00 mg/mL,respectively.Among the 4 kinds of traditional Chinese herbal medicines,rhizoma coptidis got the strongest antimicrobial effect strongest inhibitory effect.There was no significant difference in the inhibitory effect of the strains collected from local or nonlocal(P>0.05).ConclusionThe 4 kinds of Chinese herbal medicine had in vitro antibacterial activity to XDRAB in different degree

Key words:traditional Chinese medicine；extensively drug resistant Acinetobacter baumannii；in vitro antibacterial test

(收稿日期：2015-12-19)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.006

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)08-1030-03

基金項(xiàng)目：四川省攀枝花市2015年度市級(jí)財(cái)政科技專項(xiàng)資金項(xiàng)目(2015cy-s-25)。

作者簡介：吳賢麗，女，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)的相關(guān)研究。△通訊作者，E-mail：yangfan621225@qq.com。