帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp.YMF1.03662的化學成分研究

劉　瑞,周　亮,李國紅

(云南大學 云南省生物資源保護與利用重點實驗室，云南 昆明 650091)

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帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662的化學成分研究

劉瑞,周亮,李國紅

(云南大學 云南省生物資源保護與利用重點實驗室，云南 昆明 650091)

摘要：通過對帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp. YMF1.03662發酵液的乙酸乙酯提取物及菌絲體的甲醇提取物進行化學成分研究，分離得到2個化合物，經波譜分析，鑒定為citrantifidiol和1-monoacylglycerol。

關鍵詞：帚梗柱孢霉屬；發酵液；菌絲體；化學成分

帚梗柱孢霉屬(Cyllndrocladium)是半知菌類、叢梗孢目、叢梗孢科、雙孢亞科真菌[1]。目前，該屬報道了22個種和1個變種。據報道[2-3]，帚梗柱孢霉屬真菌能侵染觀賞植物雞冠花，使其患上嚴重的褐腐?。粚Q望蘭的葉片也有侵染性，使其患上葉斑病。目前還未見關于其次生代謝產物的研究報道。為了對帚梗柱孢霉屬真菌的化學成分進行比較全面的了解，作者在此對該屬真菌Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662的化學成分進行了研究，分離得到2個化合物，并對其結構進行了鑒定。

1實驗

1.1菌株與培養基

菌株Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662，保存于西南野生種質資源庫微生物庫。

馬鈴薯葡萄糖培養基(PDA)：馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，瓊脂 15g，蒸餾水1 000mL，pH值自然。

馬鈴薯葡萄糖液體培養基(PDB)：PDA培養基中不添加瓊脂。

1.2材料、試劑與儀器

SephadexLH-20凝膠，Pharmacia公司；硅膠(200～300目)、薄層層析用硅膠G板，青島海洋化工廠。

所用有機溶劑均為重蒸工業純試劑。

DRX-500型核磁共振儀，Bruker公司；LCQ-Advantage型質譜儀，Finnigan公司。

1.3菌株的擴大發酵培養

挑取Cyllndrocladiumsp.YMF1.03662菌株的菌絲塊于PDA培養基上，于28 ℃恒溫培養10d；將培養在平板上的菌絲和培養基一起接種于裝有100mLPDB培養基的250mL三角瓶中，于28 ℃、180r·min-1恒溫培養10d；再按5%的接種量接種于PDB培養基上，共發酵20L，于28 ℃、180r·min-1搖床培養10d。

1.4菌株代謝產物的初步分離

將上述培養物用8層紗布過濾，分開菌絲體和發酵液。

發酵液濃縮至1L，用乙酸乙酯反復萃取，濃縮得乙酸乙酯提取物0.376g。經甲醇凝膠粗分，得到A1～A7共7個組分；組分A2(112mg)經拌樣，用正相硅膠柱純化，石油醚裝柱，石油醚-丙酮(20∶1～2∶1)梯度洗脫，得到5個組分(A2-1～A2-5)；組分A2-3(23mg)用丙酮凝膠純化，得到化合物Ⅰ(6mg)。

菌絲體用甲醇浸泡多次，得甲醇提取物8.891g。經甲醇凝膠粗分，得到B1～B6共6個組分；組分B2(214mg)用丙酮凝膠純化，得到3個組分(B2-1～B2-3)；B2-2(153mg)用丙酮凝膠純化，得到3個組分(B2-2-1～B2-2-3)；組分B2-2-2(67mg)用正相硅膠柱純化，石油醚-丙酮(20∶1)洗脫，得到3個組分(B2-2-2-1～B2-2-2-3)；組分B2-2-2-2(29mg)繼續用正相硅膠柱純化，石油醚-丙酮(40∶1)洗脫，得到化合物Ⅱ(4mg)。

2結果與討論

化合物Ⅰ為無色油狀。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ：5.16(1H,brs),2.10(2H,m),1.88(2H,m),1.71(3H,s),1.65(3H,s),1.28(3H,s),1.24(3H,s),1.07(3H,d,J=6.8 Hz)；13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ：132.2(s),124.9(d),81.7(s),75.3(s),54.7(d),44.6(t),40.8(t),26.5(q),26.1(q),25.5(q),24.7(t),23.1(t),18.1(q),15.9(q)；ESI-MS：481[2M+1]+。與文獻報道[4]相比較，確定化合物Ⅰ為citrantifidiol(圖1)。

圖1　從帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp.

化合物Ⅱ為無色固體。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ：5.36(2H,m),4.22(2H,m),3.94(1H,m),3.71(1H,m),3.62(1H,m),2.36(2H,m),2.03(2H,m),1.64(2H,m),1.27～1.31(22H,m),0.90(3H,d,J=6.8 Hz)；13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ：174.5(s),130.5(d),130.1(d),70.7(d),65.6(t),63.8(t),34.6(t),32.3(t),30.2～29.5(t),27.6(t),25.2(t),23.0(t),14.5(q)；ESI-MS：379[M+Na]+。與文獻報道[5]相比較，確定化合物Ⅱ為1-monoacylglycerol[5](圖2)。

圖2　從帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladium sp.

3結論

從菌株帚梗柱孢霉屬真菌Cyllndrocladiumsp. YMF1.03662中分離得到2個化合物，分別鑒定為citrantifidiol和1-monoacylglycerol。

參考文獻：

[1]魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海：上海科學技術出版社，1979：521.

[2]劉云龍，何永宏，魏正，等.雞冠花褐腐病病原鑒定[J].植物檢疫，2001，15(2):79-80.

[3]謝昌平，洪玉鳳.鶴望蘭葉斑病菌的鑒定及生物學特性[J].熱帶作物學報，2005，26(3):91-95.

[4]EVIDENTE A,RICCIARDIELLO G,ANDOLFI A,et al.Citrantifidiene and citrantifidiol:Bioactive metabolites produced byTrichodermacitrinoviridewith potential antifeedant activity toward aphids[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2008,56(10):3569-3573.

[5]COLEMAN B E,CWYNAR V,HART D J,et al.Modular approach to the synthesis of unstaurated 1-monoacyl glycerols[J].Synlett,2004,40(8):1339-1342.

Chemical Constituents ofCyllndrocladiumsp. YMF1.03662

LIU Rui,ZHOU Liang,LI Guo-hong

(KeyLaboratoryforConservationandUtilizationofBio-Resource,YunnanUniversity,Kunming650091,China)

Abstract：The chemical constituents of Cyllndrocladium sp. YMF1.03662 were studied.Two compounds were separated from ethyl acetate extract of fermentation broth and methanol extract of mycelia,which were identified as citrantifidiolere and 1-monoacylglycerol by spectral analysis.

Keywords：Cyllndrocladium sp.;fermentation broth;mycelia;chemical constituent

中圖分類號：O 621.2R 284.1

文獻標識碼：A

文章編號：1672-5425(2016)04-0026-02

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.04.007

作者簡介：劉瑞(1991-)，女，河南周口人，碩士研究生，研究方向：微生物次生代謝產物，E-mail:373664517@qq.com；通訊作者：李國紅，副研究員，E-mail:ligh@ynu.edu.cn。

收稿日期：2016-01-06

基金項目：國家973計劃資助項目(2013CB127505)，云南省應用基礎研究計劃項目(2013FB003)