應(yīng)用藥敏紙片法指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥體會

徐強

摘 要：藥敏試驗是指對敏感性不能預(yù)測的分離菌株進行試驗，在體外測試病原微生物對抗菌藥物的敏感程度，以指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理選擇治療藥物的微生物學(xué)試驗。藥敏試驗是獸醫(yī)臨床工作中的一項基本技能，而藥敏紙片法是藥敏試驗中最普遍的方法。該文主要通過實例介紹了藥敏紙片法在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用及其指導(dǎo)意義，供同行參考。

關(guān)鍵詞：藥敏試驗；藥敏紙片法；耐藥性；接種培養(yǎng)

中圖分類號 S854.52 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）08-111-02

近年來，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，畜禽養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，動物疾病也隨之增加，呈現(xiàn)出更加復(fù)雜化的特點。細菌性疾病作為危害畜牧業(yè)發(fā)展的一類重要疾病，目前呈現(xiàn)出了多種發(fā)病狀態(tài)。大多養(yǎng)殖戶由于飼養(yǎng)管理技術(shù)不高、動物疫病的預(yù)防意識不強，再加上缺乏動物臨床診療知識，對臨床發(fā)生的動物疾病很難進行準(zhǔn)確診斷和針對性的治療，一旦發(fā)病，不能對其發(fā)病原因進行有效分析，導(dǎo)致盲目濫用抗生素，不但沒有控制病情，還造成了病情的延誤，而且產(chǎn)生了大量的耐藥菌株，不少耐藥菌株對多種抗生素產(chǎn)生耐藥性。筆者在臨床診療中遇到過很多次應(yīng)用抗生素治療細菌性疾病無效的情況。為了提高抗生素對細菌性疾病的治療效果，合理使用抗生素，獸醫(yī)工作者常用到藥敏試驗來指導(dǎo)我們臨床用藥，而藥敏紙片法是藥敏試驗中最普遍的方法，筆者常在臨床中應(yīng)用該方法收到了較為滿意的效果。

1 實驗方法

1.1 藥敏紙片的制備 藥敏紙片法中使用的藥敏紙片市場上很容易購買到，但也可自制，具體方法如下：取定性濾紙，用打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片，根據(jù)實際需要制成相應(yīng)數(shù)量。以制成100片為例，將100片圓片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，包扎，經(jīng)15磅高壓滅菌15～20min后，置37℃溫箱中使其完全干燥。將供試驗的抗菌藥物按其有效濃度稀釋成1mL，加入上述含有100片紙片的小瓶內(nèi)，不時翻動，使濾紙片與藥液充分混合，浸泡30min即可，置于37℃溫箱過夜或陰涼處干燥備用。在溫箱中的時間不宜過長，以免藥物失效。干燥完成后密封，放置冰箱中保存，切勿受潮，一般能保存4～6個月。

1.2 接種培養(yǎng) 取發(fā)病動物的病料或組織（如心、血、脾、肝臟、淋巴結(jié)等）無菌接種到培養(yǎng)基中，在37℃溫箱中培養(yǎng)24h，挑選典型菌落備用。在超凈工作臺中或酒精燈旁，用接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物，以劃線方式接種到固體培養(yǎng)基表面，或用無菌生理鹽水稀釋菌落，用蘸有菌懸液的無菌棉簽均勻涂布到固體培養(yǎng)基表面，蓋上平板，室溫放置數(shù)分鐘。然后用無菌鑷子將紙片粘貼于固體培養(yǎng)基表面，一定要注意紙片與培養(yǎng)基表面要完全接觸，各紙片中心間距應(yīng)大于24mm，并記錄每種藥敏紙片的位置。貼完后放置15min，再置于37℃溫箱中培養(yǎng)12～18h后觀察結(jié)果。必要時，可做2組平行試驗，以致實驗結(jié)果更準(zhǔn)確。

1.3 結(jié)果判定 用抑菌圈的直徑（φ）表示，抑菌圈的直徑越大，抑菌效果越好。即抑菌圈直徑（φ）≥20mm者為高度敏感；抑菌圈直徑16≤（φ）<20mm者為中度敏感；抑菌圈直徑10≤（φ）<16mm者為低度敏感；抑菌圈直徑（φ）<10mm者為耐藥。

2 臨床實例

貴池區(qū)梅龍街道某一養(yǎng)雞場飼養(yǎng)肉雞1 100余只，2013年4月12日開始發(fā)病，發(fā)病當(dāng)日為36日齡，4月13日上午10：00許，筆者到現(xiàn)場時，約有15%發(fā)病，已經(jīng)死亡8只，病雞表現(xiàn)為采食量下降，體溫升高，精神沉郁，羽毛松亂，離群呆立，縮頸閉眼，頭常縮于翅下，不愿走動，排淡黃色或黃白色稀便，泄殖腔下方羽毛潮濕，污穢粘連，有的呼吸困難，張口伸頸，咳嗽、打嗆。解剖癥狀明顯的兩只雞，發(fā)現(xiàn)實質(zhì)器官充血、淤血；氣囊發(fā)炎，氣囊壁渾濁，有黃白色纖維素性滲出物；肝腫脹，有灰白色壞死灶；肺充血淤血；脾、腎臟腫大；心包積液，心外膜有散在出血點；腸炎腹水等癥狀，筆者根據(jù)臨床癥狀和病理變化懷疑是大腸桿菌感染（后經(jīng)實驗室培養(yǎng)和生化實驗證實）。隨后將解剖的兩只雞取其心肝組織，于當(dāng)日上午11：00在貴池區(qū)動物疫病預(yù)防與控制中心實驗室做了藥敏試驗（藥敏紙片法），4月15日上午08：00，藥敏試驗結(jié)果顯示該菌株對氟苯尼考和硫酸新霉素敏感，筆者隨即告知養(yǎng)殖戶把治療藥物更換為氟苯尼考和硫酸新霉素。治療效果明顯，4月13日10：00到15日08：00共死亡23只雞，15日當(dāng)天死亡9只雞，15日之后共死亡7只雞。

3 總結(jié)與體會

隨著新型致病菌的不斷出現(xiàn)，每種致病菌對不同的抗菌藥物的敏感性不同，同種細菌的不同菌株對同一抗菌藥物的敏感性也有差異，也就是說再好的抗菌藥物和再好的獸醫(yī)人員，都不能保證所用的抗菌藥物是特效藥物，因此藥敏試驗在獸醫(yī)工作中有著日益重要的實際意義。藥敏試驗中的藥敏紙片法因其操作簡單、成本較低的特點，被大多數(shù)獸醫(yī)工作者所青睞。該方法優(yōu)點如下：一是能夠經(jīng)濟、有效地測定細菌對抗菌藥物的敏感程度，指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理用藥，使獸醫(yī)工作者能夠及時準(zhǔn)確的用藥，避免了抗生素的濫用，既節(jié)約了藥物的使用，又縮短了動物病程，給養(yǎng)殖戶挽回了許多不必要的損失；二是可以及時選擇敏感藥物治療動物疾病，規(guī)范了抗菌藥物的使用，延長了新藥的使用壽命，還可以為新研制藥物性能評估提供有價值的信息；三是可以及時掌握各種菌種和菌株的耐藥性，對流行病學(xué)調(diào)查建立監(jiān)控，同時采取相應(yīng)的措施預(yù)防和控制細菌性疾病的流行，為動物疫病預(yù)防與控制機構(gòu)提供防治依據(jù)，有效控制區(qū)域性的細菌性疫病的發(fā)生。因此，獸醫(yī)工作人員要重視藥敏紙片法在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用。 （責(zé)編：張宏民）