一種制備補骨脂酚的簡單、高效的方法*

張波泳，柴　欣，王躍飛，江振作

（1天津中醫藥大學中醫藥研究院天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津　300193；2天津國際生物醫藥聯合研究院中藥新藥研發中心，天津　300457）

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一種制備補骨脂酚的簡單、高效的方法*

張波泳1，2，柴欣1，2，王躍飛1，2，江振作1，2

（1天津中醫藥大學中醫藥研究院天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津300193；2天津國際生物醫藥聯合研究院中藥新藥研發中心，天津300457）

摘要：[目的]本研究旨在建立一種制備補骨脂酚的簡單、高效的方法。[方法]補骨脂藥材粉碎，經石油醚冷浸提取，得到補骨脂酚粗提物，再經硅膠柱色譜分離，石油醚洗脫，得到補骨脂酚粗品；再經硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脫得到補骨脂酚純品。[結果]通過核磁共振波譜儀鑒定為補骨脂酚；經UPLC檢測，在246 nm下補骨脂酚純度＞98%，補骨脂酚得率1.0%。[結論]該方法具有簡單、快速、高效的特點，能夠大量制備補骨脂酚。

關鍵詞：補骨脂；補骨脂酚；冷浸法

補骨脂為豆科植物補骨脂Psoraleacorylifolia L.的干燥成熟果實，具有治療腎陽不足、陽痿遺精、遺尿尿頻、腰膝冷痛、腎虛作喘、五更泄瀉，外用治白癜風、斑禿的功效[1]。補骨脂酚是補骨脂中主要的有效成分[2]，具有抗癌[3]、降糖降血脂[4-5]、抗炎[6-8]、抗衰老[9]、抗菌[10-15]、抗抑郁[16]、抗氧化和肝臟保護[17-18]等多種藥理活性。

如何快速制備大量的補骨脂酚是工業生產中密切關注的問題，本研究建立了一種補骨脂酚的制備方法：補骨脂藥材粉碎，經石油醚冷浸提取，回收溶劑，得到補骨脂酚粗提物；經硅膠柱色譜分離，石油醚洗脫得到補骨脂酚粗品；再進一步經石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脫得到補骨脂酚純品。該方法具有高效率、低成本、所用溶劑毒性低等優點。

1　材料與方法

1.1材料與儀器補骨脂藥材購自河南，經天津中醫藥大學李天祥副教授鑒定為豆科植物補骨脂（Psoralea corylifolia L.）的干燥成熟果實，樣品儲存于天津國際生物醫藥聯合研究院中藥新藥研發中心；薄層層析硅膠GF-254、柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；石油醚（沸程60～90℃）；乙酸乙酯（天津市風船化學試劑科技有限公司）；甲醇（美國Sigma-Aldrich公司）。

ACQUITY超高效液相色譜儀（美國Waters公司，包括WatersACQUITY二元泵、DAD檢測器、自動進樣器、在線脫氣機、柱溫箱、Empower色譜工作站）；MILLI-Q超純水儀（美國Millipore公司）；Bruker AV III 400 MHz核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式多用真空泵；DLSB-5/20型低溫冷卻液循環泵（天津科諾儀器設備有限公司）；RE-52A旋轉蒸發儀（鞏義市英峪予華儀器廠）；ZF-20D暗箱式紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；AL 204萬分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；ACS-30型電子計價秤（上?；ǔ彪娖饔邢薰荆?.2補骨脂酚的制備方法本研究中，為了提高補骨脂酚的得率，簡化制備工藝，提高制備效率，系統考察了不同體積石油醚、提取時間、提取次數等影響因素。提取補骨脂酚的影響因素考察見表1。

表1補骨脂酚提取的影響因素

Tab.1 Optimization of extraction conditions of Bakuchiol

組別　補骨脂藥材（kg）石油醚（L）提取時間（h）提取次數（次）1　1.003　5　36　3 2　1.002　10　24　2 3　1.004　15　12　1

經不同提取工藝制備的補骨脂酚粗提物，分別加石油醚溶解，硅膠（200～300目）拌樣，補骨脂酚粗提物、石油醚體積、硅膠質量比為100∶50∶120（g/mL/g）。

石油醚和硅膠（100～200目）按體積質量比5∶1（mL/g）裝柱，將補骨脂酚粗提物樣品進行硅膠柱層析分離，石油醚洗脫，每2.5 L為1個流份，共收集4個流份，經TLC跟蹤，合并流份1～3，減壓濃縮，得補骨脂酚粗品。

為進一步純化補骨脂酚粗品，加石油醚溶解，硅膠（200～300目）拌樣，其中，補骨脂酚粗品、石油醚體積、硅膠質量比為100∶50∶120（g/mL/g）；石油醚和硅膠（100～200目）按體積質量比5∶1（mL/g）裝柱，將補骨脂酚粗品進行硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯（12∶1）洗脫，1 L為1個流份，經TLC跟蹤，10%硫酸乙醇顯色，合并含有補骨脂酚的流份，減壓濃縮，得補骨脂酚純品。

1.3供試品溶液制備及UPLC分析

1.3.1液相色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 Rapid Resolution HT（4.6×100 mm，1.8 μm）；甲醇-水（85∶15）等度洗脫；柱溫：30℃；流速：0.3 mL/min；進樣量：2 μL；檢測波長：246 nm。

1.3.2供試品溶液的制備取補骨脂酚3.60 mg，精密稱定，置2 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，取適量配成濃度為0.09 mg/mL的供試品溶液，14 000 r/min離心10 min，取上清液，即得。

2　結果與討論

系統研究了不同體積石油醚、提取時間、提取次數對補骨脂酚得率的影響，結果表明：補骨脂經5倍量石油醚、提取36 h、提取3次得補骨脂提取物140 g，經硅膠柱純化得到補骨脂酚粗品78 g（經UPLC分析其純度約30%），得率為7.8%；經10倍量石油醚、提取24h、提取2次得補骨脂提取物134g，經硅膠柱純化得到補骨脂酚粗品77 g（經UPLC分析其純度約30%），得率為7.7%；經15倍量石油醚、提取12 h、提取1次得補骨脂提取物118 g，經硅膠柱純化得到補骨脂酚粗品60 g（經UPLC分析其純度約30%），得率為6.0%。因此，選擇5倍量石油醚、提取36 h、提取3次作為補骨脂酚的最佳提取工藝。

合并上述補骨脂酚粗品215 g，進行硅膠柱層析分離，得補骨脂酚純品30 g，得率為1.0%。通過核磁（1H NMR和13C NMR）數據與文獻資料進行比較[19]，化合物被確證為補骨脂酚，化學結構見圖1，經UPLC檢測，純度＞98%，見圖2，數據如下。

補骨脂酚：淡黃色油狀物。

圖1　補骨脂酚的化學結構Fig.1 The chemical structure of Bakuchiol

圖2　補骨脂酚的UPLC色譜圖Fig.2 UPLC chromatograms of Bakuchiol

1H NMR（400 MHz，CDCl3）：7.24（2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6），6.76（2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5），6.25（1H，d，J= 16.4 Hz，H-7），6.05（1H，d，J=16.4 Hz，H-8），5.89（1H， dd，J=17.2，10.8 Hz，H-17），5.12（1H，bt，J=6.8 Hz，H-12），5.04（1H，dd，J=6.0，1.2 Hz，H-18a），5.00（1H，dd，J=12.8，1.2 Hz，H-18b），1.95（2H，dd，J= 17.2，7.6 Hz，H-10），1.67（3H，s，H-14），1.58（3H，s，H-15），1.49 （2H，m，H-11），1.19（3H，s，H-16）。

13C NMR（100 MHz，CDCl3）：154.7（C-4），146.1 （C-17），136.0（C-7），131.4（C-1），131.1（C-13），127.5 （C-2，6），126.6（C-8），124.9（C-12），115.5（C-3，5），112.0（C-18），42.7（C-9），41.4（C-10），25.8（C-15），23.5（C-16），23.4（C-11），17.8（C-14）。

3　結論

本研究建立了一種制備補骨脂酚的方法，該方法具有操作簡便，成本低廉，收率穩定等優點，能夠大量制備補骨脂酚，適合規?；a的需要，為補骨脂資源的綜合開發利用和產業化奠定了基礎。

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（本文編輯：高杉，馬英）

·留學生園地·

A simple and efficient method for preparation of bakuchiol

ZHANG Bo-yong1，2，CHAI Xin1，2，WANG Yue-fei1，2，JIANG Zhen-zuo1，2
（1. Institute of Traditional Chinese Medicine, Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine, Province and Minstry Co-established State Key Laboratory, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193, China; 2. Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine, Tianjin International Joint Academy of Biotechnology and Medicine, Tianjin 300457, China）

Abstract:[Objective] To establish a simple and efficient method for the preparation of bakuchiol. [Methods] The powder of Fructus Psoraleae was extracted with petroleum ether by maceration to get the crude extract of bakuchiol. The crude extract was subjected to silica gel column chromatography and eluted with petroleum ether to achieve the crude product of bakuchiol，then further treated with petroleum ether and ethyl acetate（12∶1）to achieve bakuchiol. [Results] Bakuchiol，characteristed by1H NMR，(13)C NMR was obtained with the purity above 98%，which was determined by UPLC-DAD at 246 nm. The yield of bakuchiol was 1.0%. [Conclusion] The method is simple，rapid and efficient，can prepare a large number of bakuchiol.

Key words:Fructus Psoraleae；Bakuchiol；cold-maceration

收稿日期：（2016-03-26）

通訊作者：王躍飛，E-mail：wangyuefei_2006@hotmail.com。

作者簡介：張波泳（1990-），男，碩士，研究方向為中藥質量控制研究。

*基金項目：十二五重大新藥創制科技重大專項（2014ZX09304307-001-005、2012ZX09103201-046）。

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2016.04.15

中圖分類號：R223.11

文獻標志碼：A

文章編號：1672-1519（2016）04-0245-03