SLC26A4基因突變所致遺傳性耳聾患者突變類型研究

張笑千，王 睿，劉 暢，周 健，李 麗，徐飛飛，曲學華，李勝波

150000黑龍江省哈爾濱市，哈爾濱醫科大學附屬第四醫院耳鼻喉科

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SLC26A4基因突變所致遺傳性耳聾患者突變類型研究

張笑千，王 睿，劉 暢，周 健，李 麗，徐飛飛，曲學華，李勝波

150000黑龍江省哈爾濱市，哈爾濱醫科大學附屬第四醫院耳鼻喉科

【摘要】目的通過檢測耳聾患者DNA，探討遺傳性耳聾患者SLC26A4基因常見突變類型。方法選取2012年1月—2014年5月于哈爾濱醫科大學附屬第四醫院進行檢查的遺傳性耳聾患者60例為研究對象。采集患者外周血3～5 ml，應用試劑盒提取DNA，使用E-Cycler TM96 PCR儀進行DNA擴增。行瓊脂糖凝膠電泳，回收PCR產物，進行序列分析和比對。結果研究共發現SLC26A4基因突變患者11例，檢出SLC26A4基因9個突變類型，涉及11～17號和19號外顯子的改變，IVS7-2A>G為最常見突變類型。純合突變1例，余10例為雜合突變。結論SLC26A4基因突變所致遺傳性耳聾患者突變類型主要為IVS7-2A>G，其次是2168A>G。

【關鍵詞】聽覺喪失；遺傳性疾病；基因突變；SLC26A4基因

張笑千，王睿，劉暢，等.SLC26A4基因突變所致遺傳性耳聾患者突變類型研究[J].中國全科醫學，2016，19(8)：979-981.[www.chinagp.net]

Zhang XQ，Wang R，Liu C，et al.SLC26A4 gene mutation types of patients with hereditary deafness[J].Chinese General Practice，2016，19(8)：979-981.

目前，我國聾啞患者有4 000萬人左右[1]，且呈遞增趨勢，其中3%為兒童[2]。遺傳因素導致的耳聾較為少見，在遺傳性耳聾中非綜合征性耳聾占絕大多數，其中又有80%的患者屬于常染色體隱性遺傳[3]，且SLC26A4基因突變是引起遺傳性耳聾的常見原因。本研究通過檢測耳聾患者DNA，探討遺傳性耳聾患者SLC26A4基因常見突變類型。

1對象與方法

1.1研究對象選取2012年1月—2014年5月于哈爾濱醫科大學附屬第四醫院進行檢查的遺傳性耳聾患者60例為研究對象，其中男42例，女18例；年齡3～15歲。患者入選標準：(1)患者自身患有耳聾，符合《耳鼻咽喉頭頸外科學》[4]中耳聾的診斷標準；(2)有耳聾疾病家族史；(3)父母非近親結婚；(4)患者同意參與本研究，并簽署知情同意書。本研究經本院醫學倫理委員會決議通過。

1.2方法采集患者外周血3～5 ml，應用試劑盒提取DNA，在-70 ℃下備用。使用E-Cycler TM96 PCR儀進行DNA擴增，針對變異點設計不同引物，PCR模板類型有DNA 1 μ1、ddH20 1 μl、10×Buffer 2 μl，上、下游引物各0.5 μl，TransStart Taq Polymerase 0.2 μl，DNTP 0.5 μl。PCR參數：95 ℃變性15 min，55 ℃復性30 s，70 ℃延伸45 s，共32次循環。行瓊脂糖凝膠電泳，回收PCR產物。回收的PCR產物用蝦堿性磷酸酶和核酸外切酶處理(冰上操作)，酶切后的PCR用測序儀及其配套試劑盒進行正反向測序，結果采用DNAstar軟件的SeqMan進行序列分析和比對。

2結果

本研究共發現SLC26A4基因突變患者11例，其中男7例，女4例；年齡3～15歲；輕度耳聾1例，中度耳聾2例，重度耳聾6例，極重度耳聾2例。共檢出SLC26A4基因9個突變類型，涉及11～17號和19號外顯子的改變，IVS7-2A>G為最常見突變類型。純合突變1例，余10例為雜合突變(見表1)。

表1　11例SLC26A4基因突變患者突變類型

3討論

目前，我國耳聾患者達2 000萬人，并以每年3萬人的數量增長[5]。導致耳聾的原因很多，環境、遺傳因素均可導致耳聾的發生。隨著對耳聾分子病因學的研究，遺傳因素在耳聾的發病中得到越來越多的重視，共發現40多個與耳聾相關的基因，100多個基因位點[6]。GJB2、SLC26A4基因突變與致聾密切相關[7-8]。研究證實，GJB2基因突變引起的耳聾較為常見[9-10]。GJB2基因編碼縫隙連接蛋白Cx26，基因突變產生的無功能蛋白質影響了縫隙連接蛋白的結構，導致鉀離子通道關閉，使其流入血液循環受到影響，易引起神經性耳聾[11-12]。患者主要表現為先天性耳聾、非進行性耳聾，呈嚴格的雙側對稱性[13]。

本研究共發現11例SLC26A4基因突變引起的遺傳性耳聾患者。SLC26A4基因突變導致的耳聾可能會出現雙側不對稱，病癥出現波動或進行性改變[14]。本研究發現SLC26A4基因突變類型主要為IVS7-2A>G，其次是2168A>G。SLC26A4基因突變導致外顯子剪切位點異常或關鍵氨基酸發生置換等，影響pendrin蛋白的合成和功能[15]，從而影響蛋白質的轉運，使其不能達到細胞膜形成陰離子通道，從而使陰離子轉運受影響，細胞內外環境失衡而導致耳聾。

本研究結果顯示，以EXON15-17得到300 bp的目的片段，以EXON14-18得到660 bp的目的片段，行瓊脂糖凝膠電泳發現剪切點連接完好未出現片段缺失，說明本組患者未發現IVS16+10C>T基因突變。SLC26A4 IVS16+10C>T變異位于第16號內含子與外顯子交界處的第10個堿基[7]。人體細胞中存在大量不能被翻譯的非編碼DNA序列[16]，前體RNA必須經過剪切才能形成成熟的mRNA，在轉錄、翻譯過程中發揮作用。如果在剪切位的堿基發生變異就會導致內切酶剪切位置改變，使產生的mRNA不能被正確翻譯，也就不能合成相應的蛋白質，造成功能性蛋白質缺失，使患者出現耳聾癥狀[17]。高雪等[10]首次證實，SLC26A4 IVS16+10C>T變異是非致病的核苷酸多態，對剪切位點的識別未產生影響，反轉錄后mRNA長度無改變。

通過胎兒基因檢測，對具有耳聾家族史的胎兒產前診斷具有重要參考價值。由于本研究樣本量小，SLC26A4基因突變與遺傳性耳聾的關系尚需進一步探討。

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(本文編輯：吳立波)

SLC26A4 Gene Mutation Types of Patients With Hereditary Deafness

ZHANGXiao-qian，WANGRui，LIUChang，etal.

DepartmentofOtolaryngology，theFourthAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity，Harbin150000，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate common SLC26A4 gene mutation types of patients with hereditary deafness by DNA detection.Methods A total of 60 patients with hereditary deafness who visited the Fourth Affiliated Hospital of Harbin.MethodsUniversity from January 2012 to May 2014 were enrolled.A blood sample of 3-5 ml peripheral blood was taken from each patient.DNA was extracted from peripheral blood by kit and was amplified by E-Cycler TM96 PCR Amplifier，and PCR products were recycled by Agarose gel electrophoresis.Then DNA sequence analysis and alignment were conducted.ResultsAmong all the subjects，11 patients with SLC26A4 gene mutations were found and 9 mutation types involving the changes of exons 11-17 and 19 were detected.IVS7-2A>G was the most common type.There was one case of homozygous mutation，and the rest 10 cases were all heterozygous mutation.ConclusionThe most common SLC26A4 gene mutation type of patients with hereditary deafness is IVS7-2A>G，followed by 2168A>G.

【Key words】Hearing loss；Genetic diseases；Gene mutation；SLC26A4 gene

(收稿日期：2015-06-12；修回日期：2015-11-10)

【中圖分類號】R 764.431

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.08.025

通信作者：李勝波，150000黑龍江省哈爾濱市，哈爾濱醫科大學附屬第四醫院耳鼻喉科；E-mail：13903658854@139.com

基金項目：黑龍江省自然科學基金資助項目(D201068)

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