黃絲菌多糖的單糖成分及抗氧化活性探析

趙大群 丁祥 劉露 錢葉 侯怡鈴

摘 要 實驗采用黃絲菌（Canthar-ellus cibarius Fr）子實體，經熱水提取、乙醇沉淀、柱層析以及透析處理，得到黃絲菌多糖（CC-1），采用三氟乙酸水解黃絲菌多糖樣品形成單糖，結合高效液相色譜分析法（HPLC法）分析了其單糖成分；同時，研究了低濃度黃絲菌多糖的抗氧化活性。結果表明，黃絲菌多糖由甘露糖與木糖組成，比例為7∶1?？寡趸瘜嶒灡砻?，黃絲菌多糖對ABTS+自由基的清除能力在0.5～5.0 mg/mL質量濃度范圍內呈正相關，對DPPH-自由基也有一定清除作用。

關鍵詞 黃絲菌多糖；高效液相色譜法；單糖成分；抗氧化活性

中圖分類號：TS201.4 文獻標志碼：B 文章編號：1673-890X（2016）12--02

黃絲菌（Canthar-elluscibarius Fr.）又稱雞油菌、杏菌，是四川、云南地區一種常見野生食用菌。其子實體肉質，全菌杏黃色、蛋黃色或枇杷黃色，有濃郁的杏仁果香味[1，2]。本研究主要以黃絲菌菌體為原料純化得到黃絲菌多糖（CC-1），通過高效液相色譜分析法（HPLC法）對黃絲菌多糖（CC-1）的單糖結構進行了分析，同時對低濃度黃絲菌多糖的抗氧化活性進行了初探，為黃絲菌多糖（CC-1）的開發利用提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

1.1.1 實驗材料

黃絲菌采自四川省小金縣海拔3 500 m的高原地帶，由西華師范大學丁祥教授鑒定。

1.1.2 藥品試劑

DPPH試劑，Sephadex G-100 column，濃硫酸、苯酚、無水乙醇、氫氧化鈉、三氟乙酸；維生素C；ABTS試劑；其他化學試劑均為國產分析純。

1.1.3 主要儀器

1260高效液相色譜分析儀，酶標儀（配有Gen5儀器控制及數據分析軟件），離心機Centrifuge5418R；電熱恒溫水浴鍋（W-1300083）。

1.2 實驗方法

1.2.1 高效液相色譜法（HPLC）分析單糖成分

取多糖樣品5 mg，用5 mL濃度為2 mol/mL的三氟乙酸溶解，在100 ℃水解6 h，除去三氟乙酸。將水解后的單糖產物以75%的乙腈作為流動相利用高效液相色譜分析法進行檢測。

1.2.2 ABTS和DPPH自由基清除實驗

參照相關文獻ABTS和DPPH自由基清除實驗[3]，實驗組吸光度為A1；空白對照組吸光度值為A0；陽性對照組吸光度值為A2。

清除率=[1-（A1-A2）/A0]×100%

2 結果與分析

2.1 黃絲菌多糖的單糖組分鑒定

黃絲菌樣品多糖經過高效液相色譜法處理后出現兩個明顯峰，時間分別是在6.923 min以及8.086 min，其峰值時間與木糖6.833 min和甘露糖7.975min對應單糖峰時間吻合，可知黃絲菌多糖的為木糖和甘露糖構成。兩單糖對應的峰面積分別3.5831%和25.7403%，可知其兩種單糖比例約為1∶7。

2.2 黃絲菌多糖清除ABTS自由基活性

在一定質量濃度范圍內（0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mg/mL），ABTS的清除能力隨著黃絲菌多糖濃度的增加而增強。黃絲菌多糖濃度為5.0 mg/mL時，清除率達至52.37%。當VC質量濃度為6 mg/mL時，對ABTS的清除率可達98.02%。

2.3 黃絲菌多糖清除DPPH自由基活性

在一定的濃度范圍內（0.1、0.3、0.6、0.9、1.5、2.1、2.4 mg/mL），對DPPH自由基的清除能力不隨著黃絲菌多糖濃度的增加而改變，清除率穩定在23.81%～32.91%。當黃絲菌多糖濃度為2.3 mg/mL時，DPPH自由基的清除率達32.91%，繼續增加樣品多糖濃度時，對DPPH自由基的清除能力沒有提升。與VC相比，其DPPH自由基清除能力較弱。

3 討論與結論

本實驗采用黃絲菌子實體，經柱層析以及透析，得到黃絲菌多糖（CC-1），采用三氟乙酸全水解，結合高效液相色譜分析法（HPLC法）分析了其單糖成分[4，5]。結果表明，黃絲菌多糖由甘露糖與木糖組成，比例為7∶1。這是首次確定黃絲菌多糖（CC-1）的單糖類型和含量，為進一步確定其精細結構提供了很好的基礎。

在細胞或組織的正常生理代謝過程中可誘導活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）的產生，活性氧可以導致細胞內脂、蛋白和DNA等的氧化損傷，誘發氧化應激，從而導致各種腫瘤、風濕性關節炎、糖尿病以及中樞神經系統疾病等。本研究采用的ABTS+和DPPH- 檢測黃絲菌多糖（CC-1）的總抗氧化能力。實驗結果顯示，黃絲菌多糖對ABTS+自由基的清除能力與濃度呈正相關，對DPPH-自由基也有一定清除作用。黃絲菌多糖（CC-1）作為一種高分子化合物，在水溶液中呈現一定的膠體性質，且多糖的羥基基團被水分子包裹，難于接近位于DPPH中3個苯環氮中心的自由基，這可能是導致黃絲菌多糖（CC-1）DPPH自由基的清除率低于對ABTS+自由基清除率。

綜上，黃絲菌多糖（CC-1）可以作為一種天然來源的抗氧化劑資源。但是關于黃絲菌多糖（CC-1）的精細結構及抗氧化相關分子機制還有待于進一步研究。

參考文獻

[1]劉培貴，壬向華，于富強，等.中國大型高等真菌生物多樣性的關鍵類群[J].云南植物研究，2003，25（3）：285-296.

[2]張傳利，楊發軍，桂雪梅，等.雞油菌研究概況與展望[J].熱帶農業科技，2010，33（3）：35-39

[3]李世峰，陳桂琛，畢玉蓉，等.兩種野生食用菌抗氧化及抗腫瘤活性研究[J].中國食用菌，2005，24（3）：58-63.

[4]張匯，鄢嫣，聶少平，等.黑靈芝不同部位多糖成分分析及抗氧化活性[J].食品科學，2011，32（1）：56-61.

[5]李華，竇曉蘭，陸啟玉，等.葡萄狀枝瑚菌粗多糖的提取及其清除DPPH自由基活性[J].食用菌學報，2012，19（3）：69-72.

（責任編輯：趙中正）