ELISA自動化檢驗影響因素探討

李瑞麗 張穎 吳瑞霞

進入21世紀以后, 我國血液ELISA檢驗逐步由手工操作過渡為更方便、準確的自動化儀器檢測。但在血液ELISA自動化檢測過程中, 如果一些細微之處注意不到就可能造成假陽性、假陰性的產生, 影響實驗結果的準確性。作者根據實際工作經驗就ELISA試驗檢測結果出現偏差的常見原因進行總結分析, 以確保結果的準確, 提高血液檢測質量。

1 人員與環境

1.1 操作人員素質 自動化儀器檢測操作人員應具備扎實、過硬的血液ELISA檢驗基礎知識和操作技能, 對計算機、機械、電子與光電技術和儀器的工作原理、程序有一定的了解,以便出現問題時及時應對。

1.2 熟讀全自動儀器的說明書 徹底了解儀器的工作原理和使用注意事項, 儀器和用戶軟件的使用方法、儀器的維護程序與方法、使用中可能出現的故障及可能的原因等。

1.3 室溫保證 實驗室需配備空調、暖氣、加濕器等設備,保證室溫在規定的范圍內, 每天測量并記錄室內溫濕度, 以防過冷或過熱造成儀器報警不運行。

2 血液標本的處理

2.1 ELISA檢驗多用血清(血漿)標本, 標本的處理直接影響儀器的運行和檢測結果, 應控制離心轉速和離心時間, 使血清(血漿)標本離心分離徹底。

2.2 血液標本離心后, 應檢查標本的離心情況, 防止血凝塊、血細胞、纖維蛋白懸浮在血清(血漿)中, 避免全自動加樣器向酶標板微孔中加入上述物質, 造成洗板頭的吸液針堵塞而出現假陽性結果。

2.3 不能立即檢測的血液標本放在2～8℃冰箱儲存, 最好使用可監控報警的專用冰箱, 以防溫度過高或過低對血液標本造成影響。

3 檢驗試劑的準備

3.1 查看試劑 應檢查試劑的包裝是否破損, 污染、潮濕；試劑是否渾濁、變色；試劑是否在有效期。遇到這些情況均應重新更換新的試劑。

3.2 試劑平衡 取出試劑盒中的酶標板和各組分, 在室溫平衡30 min后, 再開啟酶標板和各組分的包裝, 開始使用。試劑是否平衡、平衡時間是否足夠將直接影響試劑對弱陽性標本的檢出。

3.3 酶標板檢查 如果酶標板框架不規整、微孔條不平整,微孔內有塑料屑、泡沫屑等異物, 將影響洗板, 導致出現假陽性結果。

3.4 試劑盒清洗 全自動儀器使用的試劑盒應每周用刷子刷洗干凈, 蒸餾水沖洗后晾干備用。陰陽對照及質控品也要及時更換, 以防時間過久影響實驗結果。

4 標本加樣

4.1 自動化儀器使用的一次性加樣針要把針盒和一次性針放置到位, 要注意檢查一次性針是否變形或不通。

4.2 注意觀察加樣針進入酶標板微孔的深度和分配速度,保證加樣時液體不濺出、不掛珠, 確保加樣準確。

4.3 加樣后, 及時檢查酶標板的加樣情況, 查看微孔中有無血細胞、血凝塊、纖維蛋白；標本量是否足夠；應變色的微孔是否都已變色。如有異常, 應手工處理。

5 酶標板洗板

5.1 各廠家的洗液是根據各自試劑的條件配制的, 因此采用不配套的洗液常會得到不正常的反應結果, 包括本底升高,所以不同廠家的洗液不能混用。

5.2 洗液應按規定的倍數稀釋使用。試劑盒提供的洗液是濃縮的, 過多稀釋洗液, 會影響洗液的效果, 而使反應的本底升高。反之造成假陰性。

5.3 稀釋洗液的水應該是新鮮的蒸餾水, 如果存放時間過長或受到灰塵等污染, 水中含鈣鎂離子增多使實驗本底增高,灰塵等異物容易堵塞洗板針孔造成花板。

5.4 洗板時, 洗液應注滿每孔, 如果加入的洗液液量不夠,極易產生高值陰性和假陽性。不同試劑廠家的酶標板孔規格不一樣, 洗板時一定要選擇配套的板模式進行洗板, 以保證洗板效果。

5.5 嚴格按照說明書規定的次數, 浸泡時間進行洗板。如果次數少于規定要求, 沒有按設洗板浸泡時間, 會使孔內多余的抗原(抗體)或酶結合物不能徹底去除, 引起本底升高和假陽性。

優質的試劑, 良好的儀器和正確的操作是保證ELISA試驗檢測結果準確可靠的必要條件。實際操作中, 除了選擇的優良試劑、保證儀器設備的正常運轉外, 必須嚴格執行試劑操作說明, 認真做好ELISA實驗的每一步, 掌握影響實驗檢測結果的各類因素以及解決辦法, 做好儀器設備的日常維護保養工作。必須以嚴謹的工作作風對待每一份檢測標本, 才能保證檢測質量和血液產品的安全。