蔬菜水果中腈菌唑農(nóng)藥殘留氣相色譜檢測(cè)法

韋莉莎

摘 要 腈菌唑作為一種麥角甾醇生物合成抑制劑，具有持效期長(zhǎng)、對(duì)農(nóng)作物安全、藥效好、強(qiáng)內(nèi)吸性等特點(diǎn)，可以有效預(yù)防和治療很多蔬菜水果生長(zhǎng)過程中的常見疾病，如梨、蘋果的黑星病、銹病和白粉病；煙草的白粉病；麥類的網(wǎng)斑病、大麥條紋病、小麥莖枯病、網(wǎng)腥黑穗病、堅(jiān)黑穗病和散黑穗病；葡萄的白粉病和黑腐病；核果的腐爛病、污點(diǎn)病、褐銹病和白粉病等。腈菌唑作為農(nóng)藥，在農(nóng)作物上使用之后，雖然多數(shù)會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化，但是農(nóng)作物中仍然會(huì)殘留一些農(nóng)藥，如果長(zhǎng)時(shí)間攝入食物中殘留的農(nóng)藥，會(huì)對(duì)人體的健康造成很大的威脅，所以必須重視農(nóng)藥的殘留量。在20世紀(jì)60年代，就已經(jīng)有人開始應(yīng)用薄層色譜酶抑制法檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥在食物中的殘留量，發(fā)展到20世紀(jì)80年代，開始使用酶抑制和免疫檢測(cè)技術(shù)來對(duì)農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)。近年來，我國(guó)也開始充分應(yīng)用氣相色譜法對(duì)食物中農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)，具有誤差小、操作簡(jiǎn)單、處理速度快等諸多優(yōu)勢(shì)。以砂糖橘為例，使用氣相色譜檢測(cè)法檢測(cè)蔬菜水果中腈菌唑的農(nóng)藥殘留。

關(guān)鍵詞 氣相色譜檢測(cè)法；腈菌唑；蔬菜水果；農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào)：TS255.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-890X（2016）15--03

近年來，我國(guó)蔬菜出口發(fā)展情況雖然比較平穩(wěn)，但是由于一些發(fā)達(dá)國(guó)家為了抵制外來產(chǎn)品，保護(hù)本國(guó)市場(chǎng)，越來越頻繁的應(yīng)用技術(shù)性貿(mào)易壁壘。尤其是在蔬菜水果中的腈菌唑殘留檢測(cè)，已經(jīng)成為北美、歐盟等發(fā)達(dá)國(guó)家進(jìn)出口蔬菜和水果的必須檢測(cè)項(xiàng)目。所以，使用氣相色譜檢測(cè)法檢測(cè)蔬菜水果中腈菌唑的農(nóng)藥殘留，一方面，有利于保護(hù)食用者的身體健康，另一方面，也有利于促進(jìn)產(chǎn)品的出口。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

研究所需試劑主要包括以下幾種。腈菌唑標(biāo)樣：純度超過96.0%。無水硫酸鈉：550 ℃灼燒4 h。氯化鈉：140 ℃烘烤4 h。農(nóng)殘級(jí)二氯甲烷、正乙烷、丙酮等。

研究所需儀器主要包括以下幾種。氣相色譜儀：帶氮磷檢測(cè)器。分液漏斗、電動(dòng)震蕩儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等[1]。

1.2 實(shí)驗(yàn)操作

1.2.1 提取腈菌唑

取10 g腈菌唑，和砂糖橘的全果、果肉、果皮攪勻，放入100 mL的具塞量筒中，加入20 mL的乙腈，勻漿2 min。然后加入3 g氯化鈉，勻漿1 min。以3 500轉(zhuǎn)/min的速度進(jìn)行5 min的離心，使水相和乙腈分層。

1.2.2 石墨化炭黑柱-氨基柱組合凈化

在具塞量筒中吸取10 mL的乙腈相溶液，置入150 mL的燒杯中，將燒杯放在65 ℃的水浴鍋上加熱，對(duì)乙腈進(jìn)行蒸發(fā)。用1 mL、體積比例為1∶3的乙腈-甲苯溶液，對(duì)燒杯中的試樣殘?jiān)M(jìn)行溶解，轉(zhuǎn)入石墨化炭黑柱-氨基柱。再使用1 mL、體積比例為3∶1的乙腈-甲苯溶液，對(duì)燒杯進(jìn)行清洗。使用10 mL、體積比例為3∶2的乙腈-甲苯溶液，對(duì)石墨化炭黑柱-氨基柱進(jìn)行清洗，取出洗脫液。在水浴鍋中蒸發(fā)，加入體積比例為2∶8的丙酮-正乙烷，定容至5 mL，進(jìn)行氣相色譜分析[2]。

1.2.3 氣象色譜分析

升溫程序：在100 ℃下保持1 min，然后以每分鐘20 ℃的速度，升溫至180 ℃。然后以每分鐘10 ℃的速度，升溫至300 ℃，保持6 min。

進(jìn)口溫度：260 ℃。進(jìn)樣量：1μL。載氣：氮?dú)猓ā?9.999），流速1 mL/min。氫氣： 1.5 mL/min。空氣：145 mL/min。NPD溫度：300 ℃。進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，0.75 min后，打開分流閥和隔墊吹掃閥。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法和凈化方法的選擇

在提取方法上，乙腈是農(nóng)藥殘留分析中最常用的提取溶劑，可以和水互溶。加入氯化鈉之后，可以和水分層，并且不會(huì)受到蛋白質(zhì)、脂肪和糖類等雜質(zhì)的干擾，提取腈菌唑的效果較好。本次研究對(duì)乙腈和甲醇的提取腈菌唑效果進(jìn)行了比較，用甲醇萃取樣品加入氯化鈉水溶液。然后使用二氯甲烷萃取，凈化之后，用丙酮定容上機(jī)。通過對(duì)不同提取方法的比較，結(jié)果表明，使用乙腈提取的回收率更高，雜質(zhì)干擾更小。所以本次研究采用乙腈提取法。

在凈化方法上，體積比例為3∶1的乙腈-甲苯直接洗脫的效果不理想，體積比例為3∶2的乙腈-甲苯直接洗脫也會(huì)受到干擾。所以本次研究確定使用體積比例為3∶1的乙腈-甲苯上洋，淋洗，放棄淋洗液。然后使用體積比例為3∶2的乙腈-甲苯洗脫溶液，回收效果更好。

2.2 色譜分析條件的選擇

使用Ttx-1毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行分離，效果較好。使用這種方法可以完全分離樣品和腈菌唑中的雜質(zhì)。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)，腈菌唑保留時(shí)間為12.4 min，定量指標(biāo)為峰面積，標(biāo)準(zhǔn)色譜見圖1，砂糖橘全果的空白及添加0.1 mg標(biāo)樣色譜見圖2。

2.3 線性范圍

一般情況下，腈菌唑在蔬菜水果中的限量標(biāo)準(zhǔn)是0.2～1.0 mg/kg，所以本次研究以0.1～1.0 mg/kg作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，配制每升0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 mg的標(biāo)準(zhǔn)工作液，取1 μL進(jìn)行測(cè)量，外標(biāo)法定量。繪制工作曲線，橫坐標(biāo)是腈菌唑的質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)是相應(yīng)的峰面積，見圖3。

2.4 回收率及方法的精密度

在不同量的標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入10 g砂糖橘果皮、果肉、全果，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加濃度重復(fù)5次，結(jié)果見表1。

從表1中可以看出，在全果、果肉、果皮中添加0.10、0.50、1.00 mg/kg時(shí)，回收率分別為89.5%～98.1%、90.0%～108.3%、94.1%～101.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為9.66%～14.97%、1.11%～13.79%、6.28%～16.16%。

2.5 方法檢出限和樣品測(cè)定

當(dāng)稱樣量是10 g，定容體積為5 mL，進(jìn)樣量為1 μL時(shí)，以3倍信噪比計(jì)算檢出限，為0.008 mg/kg。對(duì)砂糖橘試驗(yàn)樣品的全果使用氣象色譜檢測(cè)法，進(jìn)行腈菌唑殘留檢測(cè)，典型色譜見圖4。

使用外標(biāo)法檢測(cè)目標(biāo)化合物的含量，結(jié)果見表2。

3 結(jié)論

使用氣相色譜法檢測(cè)蔬菜水果中腈菌唑殘留量的目的在于保證食品安全，所以針對(duì)腈菌唑殘留量過高可能造成的危害，我國(guó)政府也要有明確的規(guī)定，相關(guān)部門應(yīng)該加強(qiáng)宣傳，讓所有人都能清醒地認(rèn)識(shí)到腈菌唑殘留量過高對(duì)人體、地下水造成的危害，在使用時(shí)也要遵照科學(xué)的方法，不能濫用。一般情況下，一茬植物從苗期、花期，最后到果實(shí)膨大期，只能使用3～4次。對(duì)于連續(xù)結(jié)果的農(nóng)作物，如黃瓜等，第三次用藥和第四次用藥之間應(yīng)該間隔1個(gè)月。并且番茄類作物盡量在上午用藥，確保葉片當(dāng)天就可以吸收藥物，以免藥劑集中在葉邊緣，發(fā)生不良反應(yīng)。腈菌唑的用藥時(shí)間應(yīng)該是在當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)科技人員建議時(shí)間、病害發(fā)生之前、農(nóng)作物生長(zhǎng)旺盛時(shí)期給藥，為了避免病菌產(chǎn)生抗藥性，一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)使用腈菌唑的次數(shù)不能超過4次。為了得到最佳抗菌效果，建議在病害發(fā)生之前或者發(fā)生初期進(jìn)行施藥，可以有效抑制菌絲和病菌孢子的生成和萌發(fā)。但是在施藥腈菌唑的同時(shí)，盡量避免和乳油類農(nóng)藥混合使用。本次研究使用的氣相色譜檢測(cè)法，以砂糖橘為例，檢測(cè)蔬菜水果中腈菌唑的農(nóng)藥殘留，實(shí)驗(yàn)不需要對(duì)樣品進(jìn)行凈化，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性、精密度和靈敏度都比較好，結(jié)果可靠，符合農(nóng)藥殘留分析實(shí)驗(yàn)的要求，成本也比較低，檢測(cè)限低于國(guó)外殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，所以適用于蔬菜水果中腈菌唑農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]謝建軍，陳捷，李菊，等.改良QuEChERS法結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定果蔬中20種殺菌劑[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2013（1）：82-88.

[2]黃金萍，郭順云，魏萍芳，等.氣相色譜法在疏菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的研究應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)信息，2013（9）：130-133.

（責(zé)任編輯：劉昀）