苯并咪唑類殺菌劑對水稻紋枯病菌的室內毒力測定

袁夢思　李建文　孫文秀

摘要：采用菌絲生長速率法測定了多菌靈、苯甲多菌靈和甲基硫菌靈3種苯并咪唑類殺菌劑對不同抗性水稻紋枯病菌室內毒力。結果表明，多菌靈的抑菌效果最好，其對敏感菌株的EC在0.293 1～0.403 5 μg/mL之間，對抗性菌株的EC在0.414 7～0.645 7 μg/mL之間：甲基硫菌靈的毒力最低，其對敏感和抗性菌株的EC分別在12.039 7～26.597 1μg/mL和20.770 1～36.953 3 μg/mL之間。

關鍵詞：殺菌劑；水稻紋枯病菌：毒力測定

水稻紋枯病又稱云紋病，俗名花足稈、爛腳瘟、眉目斑，是當前水稻生產上的主要病害之一。該病由立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）引起，在高溫高濕條件下發生嚴重，導致水稻的產量和質量大幅下降，給中國及世界各國的糧食生產造成巨大經濟損失。對于水稻紋枯病的防控，化學藥劑防治是控制該病害發生的最有效途徑之一。但由于常規化學藥劑如井岡霉素的長期單一使用，使得水稻紋枯病菌表現出不同程度的抗藥性，導致防治效果明顯降低。苯并咪唑類殺菌劑是一類內吸性殺菌劑，常見的有多菌靈、甲基硫菌靈等，其能夠與病原真菌的微管蛋白相結合，抑制細胞的有絲分裂，可用于水稻紋枯病的防治。本研究通過菌絲生長速率法，測定多菌靈、苯甲多菌靈和甲基硫菌靈3種苯并咪唑類殺菌劑對水稻紋枯病菌的室內毒力，為進一步科學合理用藥、有效降低抗藥性、減少環境污染及高效防治水稻紋枯病提供理論依據。

1.材料與方法

1.1供試菌株和培養基

供試水稻紋枯病菌由長江大學微生物學實驗室分離鑒定。供試培養基為PDA培養基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20g、瓊脂15 g、去離子水1 000mL。

1.2供試藥劑

25%多菌靈可濕性粉劑（山東禾益生物科技有限公司）、25%苯甲多菌靈可濕性粉劑（開封市浪潮化工有限公司）、70%甲基硫菌靈懸浮劑（徐州潤澤化工有限公司）。

1.3水稻紋枯病菌的篩選

在湖北省荊州、武漢、宜昌等地的水稻田中采集水稻紋枯病病株，采用常規組織分離法分離其病原菌并進行鑒定。將所有菌株在含1.0μg/mL多菌靈的PDA平板上培養2 d，能在此培養基上生長的為抗性菌株，不能生長的為敏感菌株。

1.4室內毒力測定

隨機選取各3個敏感和抗性菌株，采用菌絲生長速率法測定3種殺菌劑對水稻紋枯病菌的室內毒力。將多菌靈、苯甲多菌靈和甲基硫菌靈按濃度進行稀釋后，配制成質量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8μg/mL系列含藥PDA平板，將水稻紋枯病菌菌塊接種于平板中央。培養2 d后，十字交叉法測量各菌落的直徑，分別測定敏感性和抗性水稻紋枯病菌的毒力，以不加藥劑的空白平板作為對照，每一濃度設3次重復。

1.5數據處理

通過菌絲生長抑制率和各藥劑的有效濃度對數值之間的線性進行回歸分析，求出各藥劑的EC、ECgo及相關系數。抑制率的計算公式如下。

菌絲生長抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%

2.結果與分析

2.1水稻紋枯病菌的篩選

從湖北省3個地區的稻田中共分離到134個水稻紋枯病菌菌株，對多菌靈的抗藥性結果表明，其中103個菌株在1.0μg/mL多菌靈的PDA平板上不能生長，占76.87%，有31個菌株能較好地生長，說明有一部分菌株對多菌靈產生了抗藥性。隨機選取3個敏感菌株wka5、wkb3、wkc1和3個抗性菌株A111、wka3、wkb2進行殺菌劑的室內毒力測定。

2.2水稻紋枯病菌的室內毒力測定

由表1可以看出，3種苯并咪唑類殺菌劑對敏感水稻紋枯病菌都有一定的抑菌活性，其中多菌靈的毒力最高，其EC在0.293 1-0.403 5μg/mL之間，EC在0.525 3～0.735 6μg/mL之間：毒力最低的是甲基硫菌靈，其ECso在12.039 7-26.597 1μg/mL之間，EC在24.229 5～58.735 8 μg/mL之間。同樣，3種殺菌劑對抗性水稻紋枯病菌的毒力大小也是多菌靈>苯甲多菌靈>甲基硫菌靈，其中多菌靈的EC在0.414 7-0.645 7μg/mL之間，ECgo在0.928 5～1.191 7μg/mL之間。結果表明，無論敏感菌株還是抗性菌株，3種苯并咪唑類殺菌劑中多菌靈對水稻紋枯病菌的毒力最強，甲基硫菌靈的毒力最弱。

3.小結與討論

目前，水稻紋枯病的主要防治措施仍然是化學防治，最常用的藥劑是井岡霉素，但由于其連續單一使用已產生明顯的抗藥性。苯并咪唑類殺菌劑是內吸性殺菌劑，能夠與病原真菌的微管蛋白相結合，具有抑制微管的功能，阻止細胞的有絲分裂，從而控制病原菌的生長。本試驗結果表明，苯并咪唑類殺菌劑中的多菌靈毒力較高，而甲基硫菌靈的抑菌效果則較差，這與前人的研究結果基本一致。室內毒力測定結果表明，多菌靈可以作為控制水稻紋枯病的備選藥劑，但由于室內外作用方式及環境條件的差別，能否達到室內的抑菌效果還有待于進一步驗證。

由于苯并咪唑類殺菌劑的作用位點單一，容易產生抗藥性，使用過程中也存在一定的抗藥性風險。因此，可將其與作用機理不同的殺菌劑混配、混用或交替使用，比如多菌靈與井岡霉素混配使用可以提高對水稻紋枯病菌的抑制作用，從而延緩此類藥劑抗藥性的產生。同時，進一步明確水稻紋枯病菌對多菌靈等藥劑抗藥性產生的分子機理，及時監測不同抗性菌株群體的發展動態，對于更好地防治水稻紋枯病具有重要的指導意義。