AG490抑制DOCI-LY8和Raji細胞生長及與STAT3信號的關系*

李品浩，楊文秀，陳　琴，裴媛媛

(貴州醫科大學病理學教研室，貴州貴陽　550004)

?

AG490抑制DOCI-LY8和Raji細胞生長及與STAT3信號的關系*

李品浩，楊文秀＊＊，陳琴，裴媛媛

(貴州醫科大學病理學教研室，貴州貴陽550004)

［摘要］目的:研究AG490對伯基特淋巴瘤(BL) Raji細胞和彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL) OCI-LY8細胞生長的影響及分子機制。方法:用不含AG490(對照組)和不同濃度(25、50、75及100 mg/L) AG490(試驗組)分別培養Raji細胞和OCI-LY8細胞24、48及72 h，用MTT法檢查2株細胞的代謝生長情況，RT-qPCR檢測對照組和各試驗組培養48 h時2株細胞STAT3、TIMP-1的mRNA表達;用Western blot檢測AG490 50 mg/L培養48 h時Raji細胞的STAT3、p-STAT3及TIMP-1蛋白的表達，流式細胞術檢測2株細胞的細胞周期變化。結果:在2株細胞中加入AG490后，細胞生長較對照組明顯減弱(P＜0.05) ;與相應對照組比較，AG490試驗組的Raji細胞和OCI-LY8細胞的G1期細胞都明顯增多(P＜0.05)，處于S期的Raji細胞無明顯改變、而OCI-LY8細胞則明顯減少(P＜0.05)，G2-M期的Raji細胞明顯減少(P＜0.05)、G2-M期的OCI-LY8細胞亦有減少的趨勢; STAT3和TIMP-1的mRNA表達明顯降低，且呈現出藥物濃度依賴關系(P＜0.05) ; 2株細胞內TIMP-1與STAT3的mRNA表達呈正相關關系(Raji r = 0.744，P = 0.034; OCI-LY8 r = 0.984，P = 0.000) ; AG490組Raji細胞中p-STAT3、STAT3和TIMP-1蛋白表達較對照組明顯降低。結論: AG490對Raji細胞和OCI-ly8細胞生長有明顯抑制作用，TIMP-1的表達可能與SATA3的活化有關，STAT3活化及其下游靶基因TIMP-1的上調表達可能是AG490影響2株細胞生長的重要分子機制。

［關鍵詞］淋巴瘤，B細胞;伯基特淋巴瘤;信號轉導和轉錄激活因子;基質金屬蛋白酶組織抑制因子-1; AG490;生長抑制物

＊＊通信作者E-mail: ypq1964@163.com

網絡出版時間: 2016－02－23網絡出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2003.026.html

侵襲性的彌漫大B細胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)和高侵襲性的伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma，BL)的發生和演進過程是一個多分子事件，涉及到很多信號轉導通路的異常。信號轉導和轉錄激活因子(signal transducers and activators of transcriptions，STATs)是胞漿蛋白家族［1］，它可被不同的細胞因子受體激活，轉入細胞核內與相應DNA靶點結合，具有轉錄調控和信號轉導的雙重功能，STAT3則是該家族的重要成員。臨床研究發現STAT3活性的高頻率異常活化在多種惡性腫瘤中存在，且活化程度與腫瘤的不良預后有關［2－8］。STAT3持續性的激活可誘導與細胞增殖、分化、凋亡密切相關的一系列基因的異常高表達，是EGFR、IL-6/JAK、Src等多個致癌性酪氨酸激酶信號通道的匯聚焦點［9］，與抗凋亡基因Bcl-xl和Mcl-1、細胞周期調控基因CyclinD1和cmyc、血管內皮細胞生長因子編碼基因VEGF等都密切相關。阻斷STAT3轉導通路可以阻斷多種導致腫瘤發生的相關機制，這是腫瘤治療研究所關注的熱點［10］。有研究發現部分BL和DLBCL中均發現STAT3分子的異常高表達，但其活化對BL和DLBCL影響的分子機制尚未完全清楚［11－12］。本研究通過觀察STAT3特異性抑制劑AG490對BLRaji細胞和DLBCL-OCI-LY8細胞生長的影響，探討STAT3和基質金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1)的活化是否與AG490對兩種淋巴瘤細胞的生長抑制作用有關，為尋找臨床治療BL和DLBCL的基因靶點提供實驗依據。

1　材料和方法

1.1實驗材料

BL-Raji細胞株購自中國科學院上海細胞庫，DLBCL-OCI-LY8細胞株由復旦大學腫瘤醫院周曉燕教授惠贈。細胞培養基RPMI1640購自Hyclone公司，總RNA試劑盒購自上海碧云天公司，RTPCR試劑盒購自Invitrogen公司，抗STAT3(單克隆抗體)、抗TIMP-1和抗β-actin抗體購自Santa Cruz公司，抗p-STAT3抗體購自CST公司，，IL-6購自Pepro TECH公司，PCR引物由上海生工合成。

1.2方法

1.2.1細胞培養和分組分別將Raji細胞和OCI-LY8細胞置于RPMI1640培養液(10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素)及混合培養基(10%胎牛血清、90% IMDM和1%雙抗)中，在37℃、5% CO2飽和濕度的恒溫培養箱中培養，每2～3 d換液1次，待細胞計數＞1×106/mL時，按1∶2～1∶3傳代培養。收集細胞并調節濃度為2×105/mL，2株細胞分別加入不含AG490(對照組)和不同濃度的AG490(不同濃度AG490組，AG490分別為25、50、75及100 mg/L)中，繼續培養24、48及72 h。

1.2.2檢測細胞活力用MTT法檢測Raji和OCI-LY8細胞生長活力。分別于培養24、48及72 h時收集對照組和不同濃度AG490試驗組的Raji和OCI-ly8細胞于無血清培養基中培養24 h，同步化后于96孔板布板。每孔加入0.5% MTT 20 μL，繼續培養4 h，加入三聯溶劑(SDS 10 g、異

丁醇5 mL和10 mol/L HCl 0.1 mL，用雙蒸水溶解配成100 mL溶液) 150 μL，置搖床上低速振蕩10 min。鏡下觀察結晶物溶解后，用酶聯免疫檢測儀490 nm處檢測各孔的吸光值A，每組5個復孔，實驗重復3次。

1.2.3檢測STAT3和TIMP-1的mRNA提取細胞mRNA，測定RNA260/280光密度比值。逆轉錄為cDNA后進行PCR擴增。PCR循環參數:95℃10 min、90℃15 s、60℃1 min，40個循環。結果用2－ΔΔCT表示，用β-actin作為內參照。mRNA相對表達量2－ΔΔCt= 2－［實驗組(Ct目的基因－Ct管家基因)－對照(Ct目的基因－Ct管家基因)］。PCR引物序列和產物見表1。

表1　RT-qPCR引物序列及相應產物Tab.1 Primer sequence of RT-qPCR and corresponding products

1.2.4檢測STAT3，p-STAT3和TIMP-1蛋白檢測

收集加入AG490(最佳濃度取50 mg/L)培養48 h的Raji細胞，用預冷的PBS洗滌3次，加入一定量的細胞裂解液及蛋白酶抑制劑，冰上充分裂解30 min，12 000 r/m離心5 min后取上清液。蛋白樣品采用BCA法進行定量，加入Loading Buffer變性之后進行PAGE凝膠電泳。上樣量為每孔30 mg，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜上，p-STAT3用5% BSA封閉，其他目的蛋白用5%脫脂牛奶封閉后，分別加一抗孵育過夜(稀釋度: 抗STAT3、抗p-STAT3、抗TIMP-1均為1∶500，抗βactin 1∶1 000)，二抗稀釋比例為1∶5 000，洗膜，再加辣根過氧化酶偶聯的二抗孵育1.5 h，再洗膜。加ECL發光液顯色，暗室曝光，得到STAT3、p-STAT3及TIMP-1的條帶膠片，膠片掃描后用Gelpro32軟件分析。

1.2.5檢測細胞周期分別將Raji細胞和OCILY8細胞以70 000/mL接種于6孔板中，加入AG490(濃度為50 mg/L)培養細胞48 h后收集Raji細胞和OCI-LY8細胞，用流式細胞儀檢測細胞周期。

1.3統計學方法

使用SPSS 20.0統計軟件包。STAT3，TIMP-1 的mRNA及蛋白表達水平采用兩獨立樣本t檢驗，藥物作用的多組間比較采用單因素方差分析，多組間均數的兩兩比較采較用SNK q檢驗，多組均數與一個對照樣本均數比較采用Dunnett t檢驗。各藥物濃度組間兩分子表達的關系及分子表達與藥物濃度的相關性關系采用Pearson相關性分析，以P ＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1細胞活力

與相應的對照組比較，Raji和OCI-ly8細胞490 nm處吸光度值在加入AG490后明顯降低(P ＜0.05)，Raji和OCI-ly8細胞吸光度值與AG490呈現出藥物濃度依賴關系，r和P依次為(－0.984，0.030)和(－0.978，0.004)。見圖1。

2.2 STAT3、TIMP-1的mRNA表達

mRNA的A260/A280光密度比值為1.8～2.0，符合后續試驗要求。RT-qPCR結果顯示，與相應的對照組比較，2株細胞的STAT3和TIMP-1在試驗組中表達明顯降低，不同AG490濃度試驗組Raji細胞和OCI-ly8細胞的之間STAT3和TIMP-1的mRNA表達有顯著差異(P＜0.05)，且2種基因mRNA表達都呈現出藥物濃度依賴關系(Raji細胞AG490與STAT3 r =－0.976，P = 0.024，AG490與TIMP-1 r =－0.990，P = 0.010; OCI-ly8細胞AG490與STAT3 r =－0.987，P = 0.013，AG490與TIMP-1 r =－0.994，P =0.006)。2株細胞TIMP-1與STAT3的mRNA表達呈正相關(r =0.744，P =0.034; r =0.984，P =0.000)。見表2。

2.3 Raji細胞p-STAT3、STAT3、TIMP-1蛋白表達

與對照組比較，Raji細胞的p-STAT3，STAT3 及TIMP-1蛋白在AG490組明顯降低(P分別為0.001，0.017，0.002)。見圖2。

2.4細胞周期

與相應對照組比較，AG490試驗組Raji細胞和OCI-LY8細胞的G1期細胞都明顯增多(P = 0.026、P =0.018)。S期Raji細胞細胞無明顯改變(P =0.967)，而S期OCI-LY8細胞明顯減少(P = 0.045)。G2-M期的Raji細胞明顯減少、G2-M期的OCI-LY8細胞亦有減少的趨勢(P = 0.02、P = 0.09)。見表3。

表2　AG490培養48 h時Raji和OCI-LY8細胞中STAT3 mRNA和TIMP-1mRNA表達(±s)Tab.2 mRNA expression of STAT3 and TIMP-1 in Raji and OCI-LY8 cells treated with AG490 for 48 h

表2　AG490培養48 h時Raji和OCI-LY8細胞中STAT3 mRNA和TIMP-1mRNA表達(±s)Tab.2 mRNA expression of STAT3 and TIMP-1 in Raji and OCI-LY8 cells treated with AG490 for 48 h

組別STAT3TIMP-1 Raji　OCI-LY8Raji　OCI-LY8對照組1111 AG490濃度(mg/L) 25　0.813±0.026　0.806±0.024　0.935±0.042　0.927±0.044 50　0.669±0.022　0.650±0.027　0.825±0.028　0.808±0.030 75　0.345±0.019　0.386±0.017　0.619±0.022　0.612±0.021 100　0.262±0.011　0.284±0.014　0.396±0.0170.420±0.019

表3　50 mg/L AG490培養Raji和OCI-LY8細胞48 h的細胞周期變化Tab.3 Cell cycle changes of Raji and OCI-LY8 cells treated with 50 mg/L AG490(±s)

表3　50 mg/L AG490培養Raji和OCI-LY8細胞48 h的細胞周期變化Tab.3 Cell cycle changes of Raji and OCI-LY8 cells treated with 50 mg/L AG490(±s)

(1)與對照組比較，P＜0.05

細胞　　分組　　細胞周期細胞(%) G1　S　G2/M Raji　 AG490 51.95±2.21(1)44.37±1.84　 3.68±0.33(1)Control 46.51±2.03　 44.31±1.01　 9.18±1.90 OCI-LY8　 AG490 63.31±2.21(1)26.68±1.31 10.01±0.73(1)Control 55.74±2.55　 30.42±2.27 13.88±0.40

圖1　AG490對Raji、OCI-LY8細胞生長的影響Fig.1 The effects of AG490 at different concentrations on the growth of Raji and OCI-LY8 cells

圖2　Raji細胞中STAT3，p-STAT3，TIMP-1蛋白表達Fig.2 The protein expression of STAT3，p-STAT3 and TIMP-1 of Raji cells

3　討論

由于DLBCL的高度異質性，聯合化療只能使約40%左右的患者達到持續緩解。高侵襲的BL臨床過程和預后很差，而且成人患者治療效果更不好。這些情況都說明淋巴瘤的發生和發展是多種病因和分子遺傳學改變的結果。針對不同的病因和遺傳學異常采用不同的治療方法是腫瘤治療的發展趨勢。有研究發現，JAK/STAT3信號轉導通路在多種淋巴瘤的侵襲及轉移過程中發揮重要作用，該通路持續激活可導致細胞異常增殖或惡性轉化，但具體機制并不明確［13－15］。TIMPs是基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)的內源性特異性抑制因子。現已發現脊椎動物TIMPs家族由四個結構相關的成員組成，即TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4。其中TIMP-1是一個由184個氨基酸和6個分子間二硫鍵組成的糖蛋白，其分子質量為28 kDa。TIMP-1分兩個功能區，其N端功能區的半胱氨酸殘基與MMPs的鋅離子活性中心結合，C端功能區與MMPs的其他部位結合，以1∶1的比例形成MMP-TIMP復合體，從而阻斷MMPs與底物結合，抑制MMPs的活化及其對細胞外基質(extracellular matrix，ECM)的降解，抑制ECM中相關凋亡蛋白的釋放，從而調節細胞凋亡及促進腫瘤細胞生長［16］。TIMP-1也被看作是一種MMPs基因轉錄的抑制劑。關于TIMP-1研究還有不同的報道［17－19］: TIMP-1基因位于JAK/STAT信號通路的下游，其蛋白表達水平受JAK/STAT信號通路調控; JAK/STAT信號通路可通過上調TIMP-1的表達而抑制大鼠腎小球系膜細胞的調亡; TIMP-1和JAK/STAT的表達在人紅白血病細胞存在雙向調控作用;敲除STAT3基因之后，CCl4引起的肝纖維化模型中TIMP-1的高表達消失。同時有研究發現TIMP-1可以由淋巴瘤細胞自分泌或旁分泌產生，通過B細胞生長分化因子IL-10以及原癌基因bclxL來抑制細胞程序性死亡，從而延長正常扁桃體B細胞、Burkitt淋巴瘤細胞的壽命［20］。另外還有研究發現TIMP-1與非霍奇金淋巴瘤的臨床分級相關［21］。

AG490是一種苯亞甲基丙二腈的脂類衍生物，是JAK/STAT通路的特異性抑制劑［22］。通過和受體酪氨酸激酶競爭結合位置，作用于多種腫瘤細胞而發揮抗瘤作用的研究陸續見諸報道。本研究在培養的Raji和OCI-LY8細胞中加入不同濃度AG490后，發現2株細胞生長活力均降低，呈現出藥物濃度依賴關系。細胞周期檢測發現AG490處理后G1期Raji細胞和OCI-LY8細胞都明顯增多，在S期Raji細胞細胞無明顯改變但OCI-LY8細胞明顯減少，G2-M期的Raji細胞明顯減少，G2-M期的OCI-LY8細胞亦有減少的趨勢。結果表明，AG490對Raji和OCI-LY8細胞的生長活力和細胞周期產生都產生明顯的影響。由于有部分DLBCL 和BL中存在STAT3的異常活化，推測在DLBCL發生過程中TIMP-1可能是STAT3作用的下游靶基因之一。檢測發現，用AG490處理的兩細胞株中STAT3和TIMP-1基因的mRNA表達水平均顯著降低，且STAT3和TIMP-1的mRNA表達都呈現出藥物濃度的依賴關系。與對照組相比，Raji細胞內p-STAT3，STAT3和TIMP-1蛋白表達在AG490組顯著降低，且STAT3，p-STAT3與TIMP-1蛋白變化趨勢表現出一致性，提示TIMP-1的蛋白表達可能與STAT3的活化有關。研究結果表明，用JAK/ STAT的特異性抑制劑AG490處理細胞后能明顯抑制Raji及OCI-LY8細胞的生長代謝和阻斷細胞周期的運行，其機制可能與AG490抑制STAT3的活化有關。AG490抑制了細胞內STAT3活化后，其下游靶基因TIMP-1分子表達受到影響，從而抑制了淋巴瘤細胞的生長。因此，TIMP-1的表達下調可能是腫瘤細胞內STAT3信號轉導途徑活化的結果。STAT3的活化抑制及其下游靶基因TIMP-1表達降低可能是AG490抑制DOCI-LY8和Raji細胞生長的重要分子機制。

4　參考文獻

［1］Fu XY，Schindler C，Improta T，et al.The proteins of ISGF-3，the interferon alpha-induced transcriptional activator，define a gene family involved in signal transduction ［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1992(16) : 7840－7843.

［2］Zhong Z，Wen Z，Darnell JE Jr.Stat3 and Stat4: members of the family of signal transducers and activators of transcription［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1994(11) : 4806－4810.

［3］Morikawa T，Baba Y，Yamauchi M，et al.STAT3 expression，molecular features，inflammation patterns，and prognosis in a database of 724 colorectal cancers［J］.Clin Cancer Res，2011(6) : 1452－1462.

［4］Becker C，Fantini M C，Schramm C，et al.TGF-beta suppresses tumor progression in colon cancer by inhibition of IL-6 trans-signaling［J］.Immunity，2004(4) :491－501.

［5］Grivennikov S，Karin E，Terzic J，et al.IL-6 and Stat3 are required for survival of intestinal epithelial cells and development of colitis-associated cancer［J］.Cancer Cell，2009(2) : 103－113.

［6］Lou W，Ni Z，Dyer K，et al.Interleukin-6 induces prostate cancer cell growth accompanied by activation of Stat3 signaling pathway［J］.Prostate，2000(3) : 239－242.

［7］Berishaj M，Gao S P，Ahmed S，et al.Stat3 is tyrosinephosphorylated through the interleukin-6/glycoprotein 130/Janus kinase pathway in breast cancer［J］.Breast Cancer Res，2007(3) : R32.

［8］Kim D Y，Cha S T，Ahn D H，et al.STAT3 expression in gastric cancer indicates a poor prognosis［J］.J Gastroenterol Hepatol，2009(4) : 646－651.

［9］侯嘉杰，孫倍成.STAT3:慢性炎癥介導腫瘤發生和進展的關鍵節點［J］.生物化學與生物物理進展，2014 (1) : 69－78.

［10］Jing N，Tweardy DJ.Targeting STAT3 in cancer therapy ［J］.Anticancer Drugs，2005(6) : 601－607.

［11］Soldini D，Montagna C，Schüffler P，et al.A new diagnostic algorithm for Burkitt and diffuse large B-cell lymphomas based on the expression of CSE1L and STAT3 and on MYC rearrangement predicts outcome［J］.Ann Oncol，2013(1) : 193－201.

［12］Mizowaki T，Sasayama T，Tanaka K，et al.STAT3 activation is associated with cerebrospinal fluid interleukin-10 (IL-10) in primary central nervous system diffuse large B cell lymphoma［J］.Journal of neuro-oncology，2015(2) : 165－174.

［13］Al Zaid Siddiquee K，Turkson J.STAT3 as a target for inducing apoptosis in solid and hematological tumors［J］.Cell Res，2008(2) : 254－267.

［14］Siveen KS，Sikka S，Surana R，et al.Targeting the STAT3 signaling pathway in cancer: role of synthetic and natural inhibitors［J］.Biochim Biophys Acta，2014(2) : 136－154.

［15］Lam LT，Wright G，Davis RE，et al.Cooperative signaling through the signal transducer and activator of transcription 3 and nuclear factor-κB pathways in subtypes of diffuse large B-cell lymphoma［J］.Blood，2008 (7) : 3701－3713.

［16］Udayakumar TS，Stratton MS，Nagle RB，et al.Fibroblast growth factor-1 induced promatrilysin expression through the activation of extracellular-regulate kinases and STAT3［J］.Neoplasia，2002(4) : 60－67.

［17］溫文斌，林洪麗，吳泰華，等.JAK/STAT通路在金屬蛋白酶1組織抑制劑抑制腎小球系膜細胞凋亡中的作用［J］.中華腎臟病雜志，2008(1) : 24－29.

［18］Lambert E，Boudot C，Kadri Z，et al.Tissue inhibitor of metalloproteinases-1 signalling pathway leading to erythroid cell survival［J］.Biochem J，2003(3) : 767－74.

［19］Wang H，Lafdil F，Wang L，et al.Tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) deficiency exacerbates carbon tetrachloride-induced liver injury and fibrosis in mice: involvement of hepatocyte STAT3 in TIMP-1 production［J］.Cell＆bioscience，2011(1) : 14.

［20］樊嶸，金冶寧.TIMP-1在乳腺癌中的作用機制和臨床意義［J］.現代腫瘤學，2009(1) : 154－158.

［21］Oelmann E，Herbst H，Zühlsdorf M，et al.Tissue inhibitor of metalloproteinases 1 is an autocrine and paracrine survival factor，with additional immune-regulatory functions，expressed by Hodgkin/Reed-Sternberg cells［J］.Blood，2002(1) : 258－67.

［22］何平，李丹，李德天，等.乙肝病毒X蛋白通過激活JAK2/STAT3信號通路調節腎小管上皮細胞凋亡［J］.中國病理生理雜志，2014(8) : 1451－1460.

(2015－12－13收稿，2015－12－31修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:趙毅

·專題研究(二)·

AG490 Inhibition Effect on Growth of DABCL and Burkitt Lymphoma Cells and the Correlation with Activation of STAT3

LI Pinhao，YANG Wenxiu，CHEN Qin，PEI Yuanyuan
(Department of Pathology，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)

［Abstract］Objective: To investigate the effect and molecular mechanism of AG490 on the growth of Burkitt lymphoma (BL) cell line Raji and Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) cell line OCILY8.Methods: Raji and OCI-LY8 cells were cultured by non AG490 (control group) and varied concentration AG490 experiment group(25，50，75 and 100 mg/L) for 24，48 and 72 h.Cell viability was assayed by MTT.The expressions of STAT3 and TIMP-1 at mRNA level were detected by real time RT-PCR.STAT3，pSTAT3 and TIMP-1 protein expression of Raji cell cultivated by AG490 50 mg/L for 48 h were detected by Western blotting.2 strains of cell cycle was examined by flow cytometry.

［Key words］lymphoma，B cell; Burkitt lymphoma; single transducer and transcription activator-3; tissue inhibitors of metalloproteinase-1; AG490; growth inhibitor

*［基金項目］國家自然科學基金(No.81160299) ;貴州省優秀人才省長基金(No.2011.125)

［中圖分類號］R559; R34

［文獻標識碼］A

［文章編號］1000-2707(2016) 02-0130-05

Results: Comparing with corresponding control group，cell viability was decreased in the two cell strains treated with AG490(P＜0.05).The opposite change was found in AG490 experiment group，Raji cells and OCI-LY8 cells of phase G1 had a trend to significantly increase(P＜0.05) ; the OCILY8 cells of phase S decreased significantly(P＜0.01)，while Raji cells had no obvious change (P＜0.01) ; Raji cells of phase G2-M decreased significantly(P＜0.01)，OCI-LY8 cells showed tendency of reducing; mRNA expression of STAT3 and TIMP-1 reduced significantly and indicated concentration-dependence relationship(P＜0.05) ; mRNA expressions of STAT3 and TIMP-1 in 2 strains of cell presented positive correlation (Raji r = 0.744，P = 0.034; OCI-LY8 r = 0.984，P = 0.000) ; p-STAT3，STAT3 and TIMP-1 protein expression of AG490 group were obviously reduced compared with those of control group.Conclusions: AG490 obviously inhibits the growth of Raji and OCI-LY8 cells.The expression of TIMP-1 may be associated with STAT3 activation.The activation of STAT3 and upregulated expression of TIMP-1 might be the essential molecular mechanism of AG490 influence over the growth of 2 strains of cells.