糖蛋白的提取及免疫調節功能研究

鄭昆

（吉林化工學院，吉林吉林132012）

糖蛋白的提取及免疫調節功能研究

鄭昆

（吉林化工學院，吉林吉林132012）

驗證糖蛋白生理活性及免疫調節功能以蛋清粉作為試驗原料，對其進行提取及提純處理，并通過對小鼠進行為期20d的喂養，然后分別取出脾臟及肝臟，進行胸腺指數及脾指數的SPASS分析，用來驗證可溶性糖蛋白是否對免疫器官有影響；通過在小鼠尾靜脈中注射中華墨汁，判斷糖蛋白對小鼠非特性免疫功能的影響；通過定量溶血試驗，驗證可溶性糖蛋白對小鼠體液免疫功能的影響。結果表明：高劑量的糖蛋白對小鼠免疫器官無顯著影響，而對機體的非特性免疫功能、機體的溶血值具有顯著影響。

糖蛋白；可溶性糖；生理活性；免疫

在動植物及微生物當中糖蛋白普遍存在，并且是生物體中重要的組成部分，在細胞膜、細胞間質甚至是細胞外液中都存在糖蛋白[1]。由于糖蛋白的生理功能較為強大[2]，所以一直以來都是學術界研究的重點。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

新鮮蛋清粉，由吉林大學實驗室提供；所需試劑有分析純氯化鈉、分析純鹽酸、分析純無水乙醇、分析純氫氧化鈉和去離子水。中華墨汁，糖蛋白，小鼠（實驗室喂養）

1.2 可溶性糖蛋白的提取優化方法

依據單因素試驗結果，針對sevage試劑（以下簡稱A試劑）添加比例、sevage試劑中正丁醇和氯仿的比例、脫蛋白時間等進行正交試驗見表1，然后利用多糖及蛋白質二者的含量指標對糖蛋白脫蛋白的工藝進行優化。

表1 正交試驗因素變動表

1.3 可溶性糖蛋白對免疫器官的影響試驗方法

對小鼠進行為期20d的喂養，然后分別取出脾臟及肝臟，進行胸腺指數及脾指數的SPASS分析，用此來驗證可溶性糖蛋白是否對免疫器官有所影響。

1.4 可溶性糖蛋白對非特異性免疫功能的影響試驗方法

將中華墨汁作為外來異物通過尾靜脈注射到小鼠體內，這些小鼠已經喂養20d的糖蛋白，在注射完中華墨汁后分別在2min和10min時從小鼠靜脈叢中進行取血，然后對血液的OD值進行測定，將小鼠處死，然后對其體重、脾臟及肝臟的重量進行測定，最后計算出吞噬指數，采用SPASS法進行結果分析。

1.5 可溶性糖蛋白對體液免疫功能的影響試驗方法

將喂養了20d的小鼠使用SRBC進行免疫，免疫5d后將小鼠的脾臟細胞取出，然后用SRBC進行補體孵育，測定上清液的OD值進行測定，同樣也采取SPASS法進行分析。

1.6 測定方法

可溶性糖蛋白使用考馬斯亮藍法進行含量的測定。

2 試驗結果及分析

2.1 提取優化試驗結果

以所測的蛋白質含量、多糖含量作為具體的衡量指標，在單因素試驗的基礎上，采用正交試驗方法對脫蛋白的工藝進行優化，最終得到以下結論：①當在2∶1的正丁醇與氯仿混合液中添加3∶1的sevage試劑，脫蛋白的時間為30min，該試驗條件下所得到的可溶性糖蛋白中蛋白質的含量是最低的，也就是說該試驗條件下脫蛋白脫的是最徹底的，其蛋白質的含量大約為8%；②當在2∶1的正丁醇與氯仿混合液當中添加3∶1的sevage試劑，脫蛋白的時間為40min，該試驗條件下所得到的可溶性糖蛋白中多糖的含量是最低的，也就是說該試驗條件下脫蛋白的效果是最好的，其多糖的含量大約為4.6%。

2.2 可溶性糖蛋白對免疫器官的影響結果與分析

試驗發現雖然喂養了糖蛋白的小鼠不管是胸腺指數還是脾指數都有了不同程度的提高，但是這種提高和對照組相比較并不是非常明顯，這從側面說明了糖蛋白對于免疫器官的影響并不是非常明顯的。

2.3 可溶性糖蛋白對非特異性免疫功能的影響

從表1可以看出，與空白對照組相比，不管是低劑量、中劑量還是高劑量的糖蛋白對小鼠的吞噬指數值都有明顯的影響，使其不同程度的有所提高，其中低劑量和中劑量的效果差不多，而高劑量的影響是最大的。我們知道吞噬細胞所具有的吞噬功能夠反映出小鼠非特異性免疫功能，所以根據試驗結果能夠得出糖蛋白能夠顯著提高機體吞噬細胞的功能，從而使其非特異性免疫功能得到顯著提高，其中高劑量的糖蛋白作用效果是最強的。

表1 糖蛋白對小鼠非特異性免疫功能的影響

2.4 可溶性糖蛋白對體液免疫功能的影響

從表2可以看出，和對照組相比，低劑量、中劑量和高劑量糖蛋白都能夠對機體的溶血值產生影響，并且是正相關。這說明了糖蛋白可以影響機體的體液免疫，并且高劑量的糖蛋白度小鼠的體液免疫是最為顯著的。

表2 糖蛋白對機體溶血值的影響結果

3 結論

首先對可溶性糖蛋白的提取進行了優化，然后為了對其所具有的免疫調節功能進行研究，分別用不同濃度的糖蛋白對小鼠進行為期20d的喂養，并采用不同的方法對其免疫功能進行定量測定，最后得出了高劑量的糖蛋白對小鼠免疫器官無顯著影響，而對機體的非特性免疫功能、機體的溶血值具有顯著影響。

[1]李琦,景浩.蛋清蛋白糖基化及其成膜性的研究[A]//中國食品科學技術學會第七屆年會論文摘要集,2010.

[2]張艷.裸燕麥糖蛋白的提取純化及抗氧化作用研究[D].保定:河北農業大學,2010.

Study on the Extraction of Glycoprotein and the Function of Immune Regulation

Zheng Kun
(Jilin Institute of Chemical Technology,Jilin Jilin 132012)

In order to verify the physiological activity and immune regulation function of glycoprotein.Test methods:the egg white powder as the test material,the extraction and purification process,and through a 20d feed on mice,and then remove the spleen and liver,thymus index and spleen index were analyzed by SPASS,to verify whether the soluble glycoprotein has effect on immune organs;the Chinese ink injection in mice in a vein,to evaluate the influence of P-glycoprotein on characteristics of immune function in mice;through quantitative hemolysis test,verify the effect of soluble glycoprotein on humoral immune function in mice.The results showed that high dose of glycoprotein had no significant effect on the immune organs of mice,but had significant effect on the immune function of the body and the hemolytic value of the body.

Glycoprotein;Soluble sugar;Physiological activity;Immunity

Q599

A

2096-0387（2016）06-0063-02

鄭昆（1970-），男，吉林省吉林市人，博士，副教授，研究方向：生物化工-酶制劑。