電針對正常犬血漿三種相關(guān)神經(jīng)營養(yǎng)園子的影響

李偉　李拓　高蕊　程鵬　李佳　姜代勛　陳武

摘要：目的：初步觀察電針對正常比格犬血漿中神經(jīng)營養(yǎng)因子濃度的影響，為分析針灸對神經(jīng)機(jī)能障礙性疾病的治療、保健作用機(jī)制積累數(shù)據(jù)。方法：8只}匕格犬，選取足三里、趾問、百會(huì)和膀胱俞穴，于清醒狀態(tài)下隔日電針刺激，并在電針前和首次電針后第1天、4天、7天和14天采血，分離血漿，Elisa試劑盒檢測神經(jīng)生長因子（nervegrowthfactor，NGF）、腦源性神經(jīng)生長因子（brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF）和神經(jīng)營養(yǎng)素-3（neurotrophin-3，NT-3）的濃度。結(jié)果：電針后，血漿中三種神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度呈升高變化。與針前比較，NGF的濃度在電針后第4天極顯著升高（p<0.01）、第7天顯著升高（P<0.05）和第14天極顯著升高（P<0.01）；BDNF的濃度在電針后第4天、第7天和第14天均極顯著升高（P<0.01）；NT-3的濃度在電針后第4天（P<0.01）和第14天（P<0.01）差異極顯著，第1天和第7天差異不顯著。結(jié)論：電針可提高犬血漿NGF、BDNF、NT-3的濃度，提示電針對神經(jīng)系統(tǒng)的治療與保健作用可能與此有關(guān)。

關(guān)鍵詞：神經(jīng)生長因子；腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子；神經(jīng)營養(yǎng)素3；電針

中樞及末梢神經(jīng)機(jī)能障礙是臨床常見的動(dòng)物疾病。研究發(fā)現(xiàn)，一些神經(jīng)性疾病的發(fā)生與血漿中神經(jīng)營養(yǎng)因子的水平有關(guān)。針灸作為中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的代表之一，對神經(jīng)系統(tǒng)疾病療效切實(shí)。然而，針灸改善神經(jīng)機(jī)能的機(jī)理尚未不完全清楚。本研究通過觀察電針前和電針后不同時(shí)間段試驗(yàn)犬血漿中NGF、BDNF和NT-3濃度的變化，為揭示針灸對神經(jīng)性疾病的治療、保健作用機(jī)理積累數(shù)據(jù)。

1.材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8只性成熟比格犬（購自北京市海淀區(qū)興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖廠），雌雄各半。

1.2實(shí)驗(yàn)材料

KWD-808I脈沖電療儀（常州市武進(jìn)長城醫(yī)療器械有限公司）；針灸針（0.2×25mm，蘇州針灸用品有限公司）；一次性用真空靜脈采血管（瀏陽市三九醫(yī)用科技發(fā)展有限公司）；一次性用真空采血器配套用針（上?？狄泪t(yī)療器械有限公司）；NGF-Elisa試劑盒（E08N0014，BlueGene）；BDNF-Elisa試劑盒（E0880007，BlueGene）；NT-3-Elisa試劑盒（E08N0018，BlueGene）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

針前對照（空白組）：在電針開始前1周，進(jìn)行一次采血、收集血漿，-80℃凍存。

電針組：選取百會(huì)穴、足三里穴、膀胱俞穴和趾間穴。其中，百會(huì)穴進(jìn)行針刺，但不接電針儀，其余三組穴位相同穴位連接同一組導(dǎo)線，采用連續(xù)波（頻率2Hz），電針強(qiáng)度以后肢出現(xiàn)輕微抖動(dòng)為宜，25min/次，隔天1次。在第一次電針結(jié)束后24h采血，分離血漿，為第1天，依此類推，在電針后第4天、7天和14天分別采血，分離血漿，-80℃凍存。采用Elisa法檢測血漿樣品中NGF、BDNF和NT-3的濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用四參數(shù)法求得Elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血漿中NGF、BDNF、NT-3的濃度，濃度值用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：P0.05差異顯著，P0.01差異極顯著。

2.試驗(yàn)結(jié)果

由圖1可知，電針后，血漿中NGF濃度呈升高趨勢。與針前相比，電針后第1天差異不顯著（P>0.05）；第7天差異顯著（P<0.05）；第4天和14天差異極顯著（P<0.01）。

由圖2可知，電針后，血漿中BDNF的濃度開始升高。與針前相比，電針第1天差異不顯著（P>0.05）；電針第4天、第7天和第14天差異極顯著（P<0.01）。

由圖3可知，與針前相比，電針后，血漿中NT-3的濃度逐漸升高。電針第4天、第14天差異極顯著（P<0.01）；電針第1天、第7天血漿NT-3的濃度變化不顯著（P>0.05）。

3.討論

神經(jīng)機(jī)能障礙性疾病是犬的多發(fā)病。外周或中樞神經(jīng)損傷引發(fā)的癱瘓，不僅給患動(dòng)自身帶來痛苦和活動(dòng)不便，還給其主人和醫(yī)療活動(dòng)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。針灸作為一種治病、防病的手段，在面神經(jīng)麻痹、坐骨神經(jīng)麻痹、膀胱麻痹、直腸麻痹、椎間盤脫出等疾病治療的過程中，顯示出了神奇的治療效果。

神經(jīng)機(jī)能的恢復(fù)離不開相關(guān)神經(jīng)營養(yǎng)因子的參與。NGF、BDNF、NT-3是神經(jīng)營養(yǎng)素家族中三大主要成員，對神經(jīng)元的生長、分化、發(fā)育，維持神經(jīng)系統(tǒng)生存和功能，以及防止神經(jīng)元死亡，促進(jìn)受損神經(jīng)纖維和軸突的再生等方面發(fā)揮著十分重要的作用。文獻(xiàn)表明，NGF、BDNF和NT-3在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過程中，起著至關(guān)重要的作用。有研究證明，用硅膠管連接坐骨神經(jīng)橫斷模型大鼠兩神經(jīng)斷端，管中充有BDNF組對斷端神經(jīng)元的再生促進(jìn)作用顯著高于充有磷酸鹽緩沖液的對照組。李漾超等對BDNF與癲癇研究進(jìn)行總結(jié)發(fā)現(xiàn)，BDNF具有抗癲癇作用的同時(shí)，也參與了癲癇發(fā)生的機(jī)制。

趾間、足三里、百會(huì)和膀胱俞穴是寵物臨床治療神經(jīng)性疾病常用穴。鄒偉等用“百會(huì)”透“曲鬢”頭針療法干預(yù)急性腦出血模型大鼠，設(shè)定造模后6h、1d、2d、3d、7d五個(gè)時(shí)間窗，觀察血腫周圍腦組織BDNFmRNA和NGFmRNA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)各時(shí)間窗電針組大鼠BDNFmRNA和NGFmRNA表達(dá)均顯著高于模型組，且高峰期分別在腦出血后的第2天和第7天。研究還發(fā)現(xiàn)，電針足三里和百會(huì)穴能提高大鼠海馬回BDNF的水平。也有研究證明，電針曲池和足三里穴能提高腦缺血再灌注模型大鼠大腦皮質(zhì)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)。王燕等對電針促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)研究進(jìn)行總結(jié)發(fā)現(xiàn)，電針能夠提高NGF、BDNF、NT-3等神經(jīng)營養(yǎng)因子在損傷脊髓組織中的陽性表達(dá)。然而電針對犬血漿中NGF、BDNF和NT-3濃度影響的研究未見報(bào)道。因此，本研究對犬電針前、后血漿三種神經(jīng)營養(yǎng)因子濃度變化進(jìn)行了觀察研究。

結(jié)果表明，電針后，血漿中NGF、BDNF、NT-3濃度開始升高。在電針第4天、第7天和第14天，與針前空白組比較，存在顯著性差異，而電針第一天，三種神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度雖有所升高，但與針前空白組比較差異不顯著；在上述電針的四個(gè)時(shí)間段，血漿中三種神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度呈現(xiàn)出了“低-高-低-高”的波動(dòng)現(xiàn)象，而這種波動(dòng)與空白組相比，均處在一個(gè)較高的水平。說明，電針刺激足三里、膀胱俞、百會(huì)和趾間穴能夠在較短的時(shí)間內(nèi)（2次針灸后）提高正常比格犬循環(huán)血血漿中NGF、BD-NF、NT-3的濃度。

血漿神經(jīng)營養(yǎng)因子濃度的提高，利于神經(jīng)組織營養(yǎng)和損傷后的修復(fù)，提示電針對神經(jīng)系統(tǒng)的治療、保健作用可能與提高血漿中神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度有關(guān)。

本次研究雖然發(fā)現(xiàn)電針能夠提高正常比格犬血漿中NGF、BDNF和NT-3的濃度，并提示針灸尤其是電針治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的機(jī)制可能與此有關(guān)，但對于疾病狀態(tài)下神經(jīng)營養(yǎng)因子的變化及電針對其的影響還需要進(jìn)一步研究。

4.結(jié)論

電針能在短時(shí)間內(nèi)提高正常犬血漿NGF、BD-NF、NT-3的濃度，且其對神經(jīng)系統(tǒng)的治療、保健作用可能與此有關(guān)。

（編輯：狄慧）