牡丹籽皮中總黃酮提取工藝探究

◎ 程雪芬，顧菲菲，吳媛霞，晉曉峰，方 晴

（國(guó)家銅鉛鋅及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，安徽 銅陵 244000）

黃酮類(lèi)物質(zhì)是自然界中一類(lèi)重要的抗氧化物質(zhì)，屬于天然次級(jí)代謝產(chǎn)物[1]。黃酮類(lèi)物質(zhì)的提取方法有水提法、有機(jī)溶劑萃取法、微波提取法、超聲波法、超臨界流體萃取法等[2-6]。純化方法主要有柱層析法（硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠）、紙層析法、薄層層析法、鉛鹽沉淀、大孔樹(shù)脂吸附分離法等[7-12]，其中大孔樹(shù)脂法在工業(yè)上應(yīng)用最為廣泛。

1 實(shí)驗(yàn)材料

牡丹仔皮，購(gòu)于安徽銅陵；大孔吸附樹(shù)脂（HZ835、AB-8、HZ-818、DA-201），分別購(gòu)于國(guó)內(nèi)不同化工廠；蕓香葉苷，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉，無(wú)錫市展望化工試劑有限公司；亞硝酸納，無(wú)錫市展望化工試劑有限公司；硝酸鋁，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙醇，煙臺(tái)市雙雙化工有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 大孔樹(shù)脂的預(yù)處理

用95%乙醇溶液浸泡4種不同類(lèi)型樹(shù)脂24 h，待充分溶脹，裝柱，再用乙醇洗至洗出液加入適量的蒸餾水（v/v，1∶5），至無(wú)白色渾濁現(xiàn)象，用蒸餾水洗至無(wú)乙醇味，濾取備用。

2.2 大孔樹(shù)脂中含水量的測(cè)定

分別稱(chēng)取一定質(zhì)量經(jīng)上述預(yù)處理的大孔樹(shù)脂，65 ℃烘干至恒重，計(jì)算含水量。經(jīng)測(cè)量，HZ835的含水量為72.35%，AB-8的含水量為69.89%，HZ818的含水量為75.24%，DA201的含水量為61.14%。

2.3 大孔樹(shù)脂對(duì)牡丹籽皮總黃酮吸附量的測(cè)定

分別稱(chēng)取一定質(zhì)量2.1中預(yù)處理的大孔樹(shù)脂（分別相當(dāng)于0.5 g干樹(shù)脂），加入60 mL黃酮濃度為0.184 mg/mL的牡丹籽皮提取液，置搖床上，室溫下連續(xù)震蕩24 h。充分吸附后，過(guò)濾，測(cè)定濾液中總黃酮的含量。計(jì)算得吸附量Q，HZ835為14.64 mg/g，AB-8為15.44 mg/g，HZ818為 14.39 mg/g；DA201為 14.86 mg/g， 故 選 用AB-8大孔樹(shù)脂來(lái)提取牡丹籽皮總黃酮。

2.4 牡丹籽皮總黃酮提取工藝參數(shù)的探究

2.4.1 吸附流速的影響

在室溫下，將初始濃度為1.13 mg/mL的提取液分別以0.01、0.04、0.08、0.10 mL/s的流速通過(guò)裝有10 mL AB-8大孔樹(shù)脂的層析柱（Φ1×50 cm），流速用秒表控制。之后濃度分別為0.8482、0.8963、0.9667、0.9772 μg/mL。得出大孔樹(shù)脂的吸附量隨著流速的增加而遞減，但減幅較小。流速過(guò)大，溶質(zhì)提早泄漏，耗能增多。流速過(guò)慢延長(zhǎng)生長(zhǎng)周期，生產(chǎn)成本增加。綜合考慮，確定最佳上樣流速為0.04 mL/s。

2.4.2 洗脫劑的影響

黃酮類(lèi)化合物分子中具有多個(gè)羥基，易溶于有機(jī)溶劑中，選擇乙醇作為洗脫劑。按上述所確定的吸附條件進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附后，裝有大孔樹(shù)脂的層析柱先用水洗脫至洗脫液近無(wú)色后，再分別用濃度為30%、50%、70%和95%的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，以乙醇濃度為橫坐標(biāo)，洗脫液中黃酮的含量占樹(shù)脂吸附的總黃酮含量的百分比為縱坐標(biāo)作圖，如圖1所示。

圖1 乙醇濃度對(duì)樹(shù)脂洗脫性能的影響圖

由圖1得出，在乙醇溶液濃度為50%時(shí)，27.69%以上的總黃酮被洗脫出，故認(rèn)為50%乙醇為最佳洗脫濃度。

3 結(jié)語(yǔ)

通過(guò)比較4種大孔樹(shù)脂對(duì)牡丹籽皮總黃酮的吸附與解吸特性，選擇出一種最適合提取牡丹仔皮總黃酮的樹(shù)脂，并對(duì)其提取工藝參數(shù)進(jìn)行探究。結(jié)果表明：從樹(shù)脂靜態(tài)平衡吸附量、靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)過(guò)程等方面探究4種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)牡丹籽皮總黃酮的吸附性能，選定AB-8大孔樹(shù)脂作為分離純化牡丹籽皮總黃酮的介質(zhì)；再通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)牡丹籽皮總黃酮的動(dòng)態(tài)吸附過(guò)程的探究表明，提取牡丹籽皮總黃酮的最佳工藝條件為：取一定量預(yù)處理好的AB-8大孔樹(shù)脂，使牡丹籽皮提取液緩慢通過(guò)樹(shù)脂床，用1 000 mL的水柱去柱中殘留的溶液，再用濃度為50%乙醇溶液以0.04 mL/s的流速流過(guò)樹(shù)脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即為牡丹籽皮總黃酮。

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