梨黑斑病菌對苯醚甲環唑的敏感性分析

摘要：采用菌絲生長速率法測定了苯醚甲環唑對分離自金水梨園的43個梨黑斑病菌[Alternaria alternata（Fries）Keissler]菌株的EC50。結果表明，苯醚甲環唑對梨黑斑病菌菌株的EC50分布在0.071 9～1.488 6 μg/mL范圍內，平均值為0.507 2±0.333 3 μg/mL。W檢驗梨黑斑病菌對苯醚甲環唑敏感性的頻次分布呈正偏態分布。菌株主體表現為敏感，但存在敏感性降低的菌株。

關鍵詞：梨黑斑病菌[Alternaria alternata（Fries）Keissler]；苯醚甲環唑；敏感性

中圖分類號：S432.4+4；TQ445.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）24-6448-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.24.031

梨黑斑病是砂梨生產中危害嚴重的病害之一。病原菌為鏈格孢真菌[Alternaria alternata（Fries）Keissler][1]。化學殺菌劑是防治梨黑斑病的主要手段。其中苯醚甲環唑是近年來常用的殺菌劑。目前尚無梨黑斑病菌對苯醚甲環唑存在抗藥性的報道，但由于苯醚甲環唑作用位點單一，長期連續使用易使病原菌產生抗性，存在潛在的抗藥風險。因而被殺菌劑抗性行動委員會劃為中等抗性風險的藥劑[2]。已有智利蘋果黑星病菌（Venturia inaequalis）、小麥赤霉病菌（Fusarium graminearm）對苯醚甲環唑出現了抗性[3，4]。本研究旨在檢測金水地區砂梨黑斑病菌對該殺菌劑的敏感性，為梨黑斑病菌的抗藥性檢測及制定合理的化學防控策略提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：編號JS-1～JS-43，為2016年從湖北省武漢市江夏區金水閘梨園采集，利用組織分離法分離得到，經柯赫氏法則及分子生物學技術鑒定，均為梨黑斑病菌。

供試藥劑：10%世高（苯醚甲環唑）水分散粒劑（先正達作物保護有限公司），市購。

含藥PDA培養基：將藥劑溶于無菌水中，配成10 mg/mL的母液。以無菌水稀釋成適當的濃度梯度，取10%體積的藥液量加入到50 ℃左右的PDA培養基中，混勻，配制成終濃度為12.5、10.0、5.0、1.0、0.1 μg/mL的含藥培養基，以無藥劑的PDA培養基作對照。

1.2 敏感性測定

參考Yin等[5]的方法進行，將黑斑病菌在PDA培養基上培養3 d，獲得菌落，用直徑為5 mm的打孔器從菌落邊緣生長旺盛處打孔，制備菌絲塊。將菌絲塊接種至含上述系列濃度藥劑的PDA平板中央。置于26 ℃培養箱培養，16 h/8 h的光照/黑暗交替培養。以菌絲塊接種至無藥劑PDA平板作對照。每個處理設3個重復。

1.3 數據統計與分析

采用十字交叉法垂直測量菌落直徑，減去菌絲塊直徑，即為菌落生長直徑，求出各處理的平均直徑，計算不同濃度梯度的菌絲生長抑制率。

抑制率=（1-）×100%

根據生物統計機率值換算表將菌絲生長抑制率換算成機率值。然后以殺菌劑濃度的對數值為橫軸，以抑制率機率值為縱軸，得出LP-D線性方程y=ax+b，根據線性公式計算苯醚甲環唑對梨黑斑病菌各菌株的EC50（抑制中濃度）及r值（相關系數）。以SPSS軟件對EC50進行正態分布檢驗，當P>0.05，則認為符合正態分布，反之，則為非正態分布。

2 結果與分析

2.1 苯醚甲環唑對不同梨黑斑病菌菌株的EC50測定結果

由表1可知，苯醚甲環唑對梨黑斑病菌的EC50分布在0.071 9～1.488 6 μg/mL范圍內，平均值為0.507 2 μg/mL。菌株JS-2和菌株JS-23的EC50較高，分別為1.488 6、1.451 4 μg/mL。菌株JS-40、JS-43的EC50比較低，分別為0.071 9、0.106 1 μg/mL。最高值為最低值的20.70倍。

2.2 梨黑斑病菌敏感性分析

以SPSS檢驗正態性，由表2可知，W=0.863，P=0.000﹤0.05，說明各菌株對苯醚甲環唑敏感性的頻次分布不符合正態分布。偏度系數SK=1.462>0，分布呈正偏態分布，峰度系數ku大于0（圖1），表明金水地區黑斑病菌對苯醚甲環唑主體表現為敏感，但也出現了敏感性下降的菌株。

由于目前尚未見該病菌對殺菌劑敏感基線的報道，所以本研究以最小EC50為標準，計算供試菌株的抗性系數。抗性系數=待測菌株EC50/相對敏感菌株EC50。抗性系數1～3為敏感菌株，3～7為低抗菌株，7～10為中抗菌株，大于10的為高抗菌株。

3 小結與討論

為明確金水地區梨黑斑病菌對苯醚甲環唑的敏感性，本研究采用菌絲生長速率法測定了苯醚甲環唑對金水梨園43個黑斑病菌菌株的EC50。W檢驗結果顯示，黑斑病菌對苯醚甲環唑敏感性的頻次分布呈正偏態分布。說明金水地區黑斑病菌株主體對苯醚甲環唑表現為敏感，但存在敏感性降低的菌株，可為梨黑斑病菌的抗藥性檢測及制定合理的化學防控策略提供理論依據。

但本研究僅測定了苯醚甲環唑對菌絲生長的EC50，還未開展對病原菌分生孢子的EC50的測定，而黑斑病菌的分生孢子在病害循環中是非常關鍵的一環[6，7]。黑斑病菌分生孢子對苯醚甲環唑的敏感性還需進一步的分析。此外，還應對該地區梨黑斑病菌的抗藥性進行跟蹤，以確定發展動態，從而判斷是否產生嚴重抗藥性，進而及早采取有效措施，防止抗藥性發展。

參考文獻：

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