黃曲霉毒素檢測方法研究分析

摘 要：黃曲霉毒素是在濕熱環境中出現的一種曲霉次代謝產物，由于毒性較大，因此對于人體產生的危害也比其他毒素要顯著。隨著20世紀微生物學的發展，對于黃曲霉毒素的研究也日益加深。由于黃曲霉毒素極易產生在一些食品中，因此國際上對于食品中黃曲霉毒素的含量有一個嚴格的限制。而該文就著重對于黃曲霉毒素的檢測方法以及研究進行分析討論，分析高效液相色譜法以及快速檢測方法，并對競爭性酶聯免疫吸附法進行重點分析。

關鍵詞：黃曲霉毒素 檢測方法 研究

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2016）08（a）-0054-02

黃曲霉毒素是一類物質，這類物質有相似的化學結構，其主要是黃曲霉與寄生曲霉產生的次生代謝產物。由于其在土壤中以及植物中廣泛存在，因此很容易對人類所攝食的各種農作物進行感染，進而危害人們的身體健康。一旦溫度與濕度達到一定的范圍內，就會增加食物感染黃曲霉毒素的幾率，這種毒素可急可慢，急性毒素可使人猝死，而慢性毒素會導致人體患癌癥的幾率大大增加。正是這種巨大的危害性使得諸多國家對黃曲霉毒素的檢測方法進行深刻研究，該文就高效液相色譜法與快速檢測方法進行探討分析，并對競爭性酶聯免疫吸附法進行著重介紹。

1 高效液相色譜法

1.1 柱后溴衍生化熒光檢測

由鄧恩等人在食用調味品進行柱后溴衍操作，然后采用熒光檢測儀器對其進行檢測，可以有效地檢測出被檢測樣品中的黃曲霉毒素的量，這種定量的檢測分析操作即是柱后溴衍生化熒光檢測。在鄧恩團隊得出這一檢測方法之后，歐洲諸多國家的研究人員也針對這一檢測方法展開了研究工作。斯特卡與其他的實驗研究人員將一些農作物制備的醬類和其他的調味品作為實驗的研究原料，在這種具備流動性質的實驗原料添加檢測所需的溴化物，利用相應的熒光檢測儀器進行檢測，得出基本的數據量，然后，向原料中添加兩個水平的黃曲霉毒素，再用柱后溴衍生化熒光法進行檢測，最終檢測的實驗數據結果發現，黃曲霉毒素的檢測增加量為實際添加量的73%～91%，進一步證明了柱后溴衍生化熒光法檢測黃曲霉毒素的有效性。柱后溴衍生化熒光檢測由于其準確性較高，靈敏度較強，要求較低等優點曾在一段時間內成為黃曲霉毒素檢測的關鍵手段。

1.2 柱后碘衍生化熒光檢測

柱后碘衍生化熒光檢測與柱后溴衍生化熒光檢測相似，但在柱后碘衍生化熒光檢測當中由碘作為熒光追蹤標記。這種方法是由歐美以及南非等24個實驗室聯合實驗確認的。他們在進行實驗的過程中，依次采用了柱后碘衍生化熒光檢測以及柱后溴衍生化熒光檢測，其單獨檢測方式與上述的柱后溴衍生化熒光檢測方式相同，然后對檢測出的黃曲霉毒素進行數據統計。最終數據顯示兩者的檢測精確度相近，但柱后溴衍生化熒光檢測相比較于柱后碘衍生化熒光檢測要更加接近。且通過他們的實驗，最終這種黃曲霉毒素的檢測方法得到了確立以及廣泛的應用，被納入了諸多國家的國家標準檢測方法當中，同樣也列入了我國的國家標準當中。

1.3 柱前衍生化熒光檢測

柱前衍生化熒光檢測是由我國的李佐卿等人開發出來的方法，主要是運用親和柱以及三氟醋酸對待檢驗產品進行柱前衍生化，然后利用熒光檢測儀器對待檢測產品中的熒光部位進行追蹤與定量分析，進而完成對黃曲霉毒素的檢測。在我國，主要被用來對進出口茶葉中黃曲霉毒素的檢測以及蜂蜜和酒產品中的黃曲霉毒素定量。李佐卿等人的研究是對添加一定量黃曲霉毒素的產品進行回收率的檢測，通過10次的平行試驗得出各組的平均回收率。其回收率大多控制在70%～90%左右。實驗人員在進行柱前熒光檢測的同時，還進行了柱后生化熒光檢測，然后將兩者的實驗數據結果進行對比，最終發現，柱前衍生化熒光檢比柱后衍生化熒光檢測靈敏度提升了3個層次，因此，在進行高效液相色譜法檢測黃曲霉毒素時，若對準確度的要求極高，則需采用柱前衍生化熒光檢測。

2 快速檢測方法

2.1 TLC法

在黃曲霉毒素的快速檢測當中，以3種方法為主，分別為競爭性酶聯免疫吸附法、薄層色譜法以及溴化熒光分光光度計法。TLC法便是薄層色譜法，其操作步驟是先將薄層鋪展，利用一定納米下的紫外燈光進行照射，憑借不同的顯色來進行黃曲霉毒素的檢測，這種方法操作簡單，價格低廉且對于干擾的抵抗能力較強。這種方法在對中草藥的污染殘留方面的檢測有較強的作用，我國的國家標準以及美國藥典都將這種方法納入藥物質量安全檢測的評價指南當中。

2.2 溴化熒光分光光度法

在溴化熒光分光光度法中，首先將需要檢測的樣品進行處理，經過有機溶液的提取后，對提取液進行分離，然后用溴試劑進行衍生化，利用專門的熒光檢測儀器進行熒光追蹤與檢測。通過實驗結果的數值顯示可以得出黃曲霉毒素在樣品中的含量。其快速、簡便的優點使得這種方法極其適用于大量樣品的黃曲霉毒素檢測。由于該方法所涉及的實驗用品及儀器相對較少，且價格較為低廉，使得許多公司企業與國家機關選用這種方法對產品進行檢測把關。

2.3 競爭性酶聯免疫吸附法

競爭性酶聯免疫吸附法是快速檢測法當中效果最明顯、靈敏度最高的檢測方法，同時也是我們探討分析的主要研究方法。競爭性酶聯免疫吸附法又稱ELISA法，這種方法在20世紀90年代就已經成為美國分析化學家協會的官方指定的黃曲霉毒素檢測方法。更是被我國列為國標的第二法。在李延生等研究人員的實驗工作中，利用競爭性酶聯免疫吸附法對中草藥中的黃曲霉毒素的含量進行分析，結果發現，在一些根類中草藥以及種子類中草藥當中含有黃曲霉毒素的概率相比較其他部位的中草藥概率要大。但是，由于這種方法所采用的檢測試劑盒中的黃曲霉毒素的抗體不能夠有效地將黃曲霉毒素的幾種不同類別的毒素有效地分開，因此，競爭性酶聯免疫吸附法所測定的黃曲霉毒素的量同樣是毒素總量，這是我國研究人員對于競爭性酶聯免疫吸附法在中草藥中的運用。在一些糧油食品中的黃曲霉毒素的檢測上，競爭性酶聯免疫吸附法同樣能夠發現重要的功效。由蔡正森團隊主持的糧油食品中的黃曲霉毒素的實驗當中，他們采用競爭性酶聯免疫吸附法進行檢測，同樣對糧油產品的黃曲霉毒素有了明確的了解與確定。競爭性酶聯免疫吸附法相比較薄層色譜法以及溴化熒光分光光度計法來說，具有更高的靈敏度、更強的選擇性、更快速的檢測速度以及更高效的檢測手段。但其對藥品與儀器的要求相比較另外兩種操作手段來說也相對較高，因此，其并未能夠在企業與檢測機關當中得到廣泛的應用。但是，它的諸多優點又使得其成為不可忽視的一種重要的黃曲霉毒素的檢測方式。

3 結語

隨著社會的不斷進步，人們生活水平的不斷提升，人們對于飲食的安全關注度也越來越高。黃曲霉毒素作為污染食品的毒素之一，對人體會產生極大的危害，若食品中的毒素含量較少隨著逐年的攝入會增加人體患癌的幾率，而食物中毒素含量較多在攝入后會引起人體的急劇中毒反應，嚴重會直接導致死亡。因此，對食物中的黃曲霉毒素進行檢測成為諸多國家的食品安全檢測的重點所在。該文通過對高效液相色譜法以及快速檢測法進行分析探討，并就競爭性酶聯免疫吸附法進行著重討論，以求提升我國各企業與部門對于食物中黃曲霉毒素含量的重視，保證我國的食品安全。

參考文獻

[1]GB18979-2003，食品中黃曲霉毒素的測定免疫親合層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法[S].

[2]林海丹，林峰.免疫親和柱測定果仁中黃曲霉毒素[J].檢驗檢疫科學，2002，12（1）：241.