寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀相關(guān)氟烷基因Hal多態(tài)性研究

摘 要：為探討寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)相關(guān)氟烷基因（Halothane gene，Hal）遺傳多態(tài)性，利用PCR-RFLP檢測該基因Hha I位點的多態(tài)性；結(jié)果表明，在寧鄉(xiāng)豬中均只檢測到了顯性純合子HalNHalN。與之比較，在781個大白豬的樣本中檢測到雜合子HalNHaln，基因型頻率是0.003 8，但未發(fā)現(xiàn)隱性純合子HalnHaln。本研究為寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀深入的研究打下基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：豬；Hal基因；肉質(zhì)性狀

寧鄉(xiāng)豬原產(chǎn)于湖南省寧鄉(xiāng)縣的流沙河及草沖一帶，原名為流沙河豬或草沖豬。寧鄉(xiāng)豬形成歷史悠久，寧鄉(xiāng)豬的特征是“絲頸葫蘆肚，耳薄嘴筒齊，稀毛現(xiàn)薄皮，魚尾后腳直，奶子一斬齊，四腳要撒蹄”，“烏云蓋雪銀頸圈”。寧鄉(xiāng)豬體型中等，體質(zhì)疏松細致，體軀呈圓筒狀，毛色為黑白花，基本色調(diào)是四肢、肋腹及頸下部為白色，頭和臀部呈黑色。

氟烷基因（Halothane gene，Hal）是肉質(zhì)性狀的主效基因[1]。該基因被定位于豬的6號染色體上。氟烷基因有顯性純合子（HalNHalN）、（雜合子HalNHal n）和隱性純合子（HalnHaln）。顯性純合子和雜合子表現(xiàn)為氟烷陰性，隱性純合子表現(xiàn)為氟烷陽性，易產(chǎn)生應(yīng)激綜合征。本研究采用PCR-RFLP檢測了寧鄉(xiāng)豬Hal基因的基因頻率和基因型頻率，旨在篩選可應(yīng)用于寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀遺傳標(biāo)記，為其保種和開發(fā)利用打下良好的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

68頭寧鄉(xiāng)豬耳樣采自寧鄉(xiāng)大龍畜牧科技有限公司，781頭大白豬耳樣采自正虹科技股份有限公司原種豬場。耳組織-20 ℃保存。

1.2 豬的基因組DNA提取

按常規(guī)酚-氯仿法提取基因組DNA [2]。

1.3 引物合成與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）擴增

Hal基因引物Hha I位點PCR-RFLP的左引物為5'-TCC AGT TTG CCA CAG GTC CTA CCA-3'，右引物為5'-ATT CAC CGG AGT GGA GTC TCT GAG-3'。擴增片段大小為659 bp，由上海生工生物工程公司合成。PCR擴增的Hal基因片段長度為659 bp。PCR擴增反應(yīng)體系為25 μL，包括模板Premix Taq 12.5 μL，上下游引物各5 pmol，DNA 1 μL，ddH2O補至25 μL。PCR擴增程序：94 ℃預(yù)變性 5 min；94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35個循環(huán)；72 ℃后延伸10 min，最后4 ℃保存。

1.4 PCR-RFLP檢測

利用Hha I酶切Hal基因659 bp。酶切反應(yīng)體系為20 μL，其中PCR擴增產(chǎn)物10 μL，限制性內(nèi)切酶4 U，10×Buffer 2 μL，37 ℃（Hha I酶）酶切8 h，酶切產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測并確定基因型。

2 結(jié)果與分析

2.1 Hal基因PCR擴增產(chǎn)物的酶切

Hal基因659 bp的擴增產(chǎn)物被Hha I酶切為493 bp和166 bp 2條帶，基因型為HalNHalN，若不被內(nèi)切酶識別，擴增產(chǎn)物不能被酶切，只有一條659 bp的帶，即HalnHaln基因型，雜合子HalNHaln被內(nèi)切酶不完全酶切，顯示659 bp、493 bp和166 bp 3條帶。擴增產(chǎn)物經(jīng)Hha I酶切的部分電泳結(jié)果見圖1。

2.2 基因和基因型頻率

在寧鄉(xiāng)豬中只檢測到了氟烷基因的顯性純合子HalNHalN。Hal基因的Hha I的酶切位點上。與之比較，在781個大白豬的樣本中檢測到了氟烷基因的雜合子HalNHaln，基因型頻率是0.003 8，并未檢測到隱性純合子HalnHaln，經(jīng)Hardy-Weinberg平衡適合性檢測表明，均處于不平衡狀態(tài)。

3 討論

豬對氟烷敏感是由基因HalN和Haln控制，氟烷隱性純合子豬雖然容易發(fā)生應(yīng)激綜合癥，但氟烷基因雜合子豬的瘦肉率和飼料轉(zhuǎn)化率較高，生長速度較快[3，4]。我國地方豬種不含隱性氟烷基因或頻率極低[5]，寧鄉(xiāng)豬只檢測到了氟烷基因的顯性純合子HalNHalN，與此相符。在大白豬中并未發(fā)現(xiàn)隱性純合子HalnHaln基因型，出現(xiàn)了極少量的雜合子HalNHaln。只含有少量雜合子，通過結(jié)合分子生物學(xué)的方法，能夠剔除掉易發(fā)生應(yīng)激綜合癥的HalnHaln基因個體，合理利用氟烷基因可提高豬種瘦肉率、飼料轉(zhuǎn)化率，提高養(yǎng)豬業(yè)的效益。

參考文獻：（5篇，略）