老年非小細胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表達及其臨床意義

鐘　鳴　于杜娟　靳榮輝　譚　平

(吉林大學中日聯誼醫院，吉林　長春　130033)

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老年非小細胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表達及其臨床意義

鐘鳴于杜娟靳榮輝譚平

(吉林大學中日聯誼醫院，吉林長春130033)

〔摘要〕目的研究非小細胞肺癌(NSCLC)中細胞應激因子GRP94及GRP78蛋白表達及其與臨床分期及生存期的關系。方法選取該院接受外科手術切除治療的64例NSCLC患者，應用電話隨訪的方式了解患者的術后情況和生存期；使用免疫組化技術檢測研究對象的病理切片標本中GRP78和GRP94的表達水平。結果GRP94與GRP78蛋白在NSCLC腫瘤細胞中明顯高表達狀態；GRP94、GRP78蛋白的表達與NSCLC病理類型有關，與分化程度、腫瘤T分期、腫瘤N分期、WHO臨床分期具有不同程度的聯系，也與腫瘤的大小、浸潤、轉移有關；與性別和年齡無關。GRP94及GRP78蛋白的高表達與NSCLC患者生存期及生存率呈明顯負相關，其蛋白表達水平越高，患者的生存期越短，生存率越低。結論GRP78和GRP94是NSCLC發生、發展中的重要因子，可作為腫瘤分期和預測預后的一項指標。

〔關鍵詞〕非小細胞肺癌(NSCLC)；GRP94；GRP78；生存期

糖調節蛋白GRP94與GRP78是高度保守的內質網駐留糖蛋白。有研究報道，GRP94和GRP78在惡性腫瘤(淋巴瘤、食管癌、乳腺癌、肝癌、胃癌)中均呈高表達，提示GRP94和GRP78的高表達與腫瘤的發生、發展、轉移、浸潤、化療及預后密切相關〔1~4〕。本文擬探討GRP94與GRP78在非小細胞肺癌(NSCLC)中的臨床意義及對預后的影響。

1材料與方法

1.1研究對象收集2001~2010年在吉林大學中日聯誼醫院胸外科進行手術的部分NSCLC患者的腫瘤組織石蠟封存標本，患者術前均未進行放療或化療，共64例。年齡60~75歲，平均67歲，其中男53例、女11例，有吸煙史37例，無20例，不詳7例；病理類型：鱗癌43例，腺癌21例；病理分化程度：低分化16例，中分化43例，高分化5例；T分期：T1 23例，T2 35例，T3 6例；N分期：N0 37例，N1 15例，N2 11例，N3 1例;pTNM分期：Ⅰ期29例，Ⅱ期23例，Ⅲ期12例；局部浸潤：有16例，無48例；生存時間：5年以上0例，3~5年9例，1~3年46例，1年以內9例。

1.2試劑anti-GRP94購買于Santa Cruz公司；anti-GRP78購買于Cell Signaling公司；正常山羊血清工作液、生物素標記山羊抗兔IgG工作液(二抗)、濃縮型DAB試劑盒購買于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3免疫組化檢測GRP78、GRP94蛋白表達嚴格按試劑盒說明書操作。兩種蛋白主要在細胞質內表達，呈棕黃色或棕褐色顆粒。首先在100倍低倍鏡下選擇具有代表性區域，轉到400倍高倍鏡下選擇5個有陽性表達集中的視野，應用評分法對陽性細胞進行半定量評估，以陽性細胞所占視野百分比計分：無染色或單個表達的細胞計為-，陽性細胞數<10計為+，10%~50%計為，50%~80%計為，>80%計為。

1.4統計學方法使用SPSS19.0軟件，采用非參數檢驗和Spearman分析。應用電話隨訪，2011年8月隨訪停止。采用Kaplan-Meier分析和log-rank檢驗。

2結果

2.1NSCLC中GRP94與GRP78蛋白表達結果在NSCLC中，GRP94與GRP78蛋白表達明顯增高，見圖1、2，均差異顯著。二者表達多在腫瘤細胞胞質中，GRP94蛋白表達強度為~，GRP78蛋白表達強度為+~，癌旁組織可見少量表達。配對T檢驗提示GRP94與GRP78的蛋白表達具有相關性(r=0.053，P=0.000),GRP94:GRP78+7例，1例；GRP94：GRP78+15例，12例，3例；GRP94：GRP78+4例，11例，11例。

圖1　NSCLC中GRP94蛋白表達(×100)

圖2　GRP78在NSCLC中的表達(×100)

2.2NSCLC中GRP94與GRP78蛋白表達與臨床因素的相關性分析在NSCLC中，病理類型對GRP94蛋白表達有影響，而病理類型和病理分化程度對GRP78蛋白表達水平無影響，見表1。

2.3NSCLC中GRP94與GRP78蛋白表達與生存率的相關性分析在NSCLC中，GRP94強度為、、的患者5年生存率分別為25%、23%、3.8%。GRP94的蛋白表達水平與生存期具有顯著的統計學相關性，P=0.026，與病理類型有一定的相關性(P=0.001)，生存函數分析顯示GRP94蛋白表達水平越高，患者生存期越短。NSCLC中，GRP78強度為+、、的患者5年生存率分別為7.8%、23%、17%，GRP78蛋白的表達與生存期有顯著的統計學相關性，P=0.008，生存函數分析發現同GRP94蛋白表達水平一樣，GRP78蛋白表達水平越高，患者的生存期越短。

表1　NSCLC中GRP94/GRP78蛋白表達與臨床因素的

3討論

GRP94和GRP78是葡萄糖調節蛋白家族中目前研究最多的蛋白，和熱休克蛋白具有高度的同源性，作為一種應激蛋白分布于內質網腔中。最初在葡萄糖饑餓的雞胚細胞發現，為細胞應激因子。它們參與蛋白質合成時新生肽鏈的折疊，行使分子伴侶功能。然在腫瘤細胞中糖蛋白的誘導表達出來低糖、酸性環境、缺氧等，也可能是腫瘤細胞對宿主主動免疫的一種防御機制。GRP94和GRP78在腫瘤的發生、發展、增殖等過程中起作用外，還參與了腫瘤耐藥機制的形成〔5〕。

本研究結果與近年來國內研究一致〔6，7〕。GRP94和GRP78兩種蛋白的升高可能是由于在腫瘤細胞生長、增殖過程中，細胞常處于葡萄糖葡饑餓、酸中毒、缺氧的微環境中，這種微環境能夠促使糖基化和錯誤折疊蛋白的積累，導致折疊蛋白反應，促進內質網分子伴侶糖調節蛋白表達。GRP94和GRP78表達水平升高，對腫瘤細胞的的生存有重要作用，其可介導腫瘤細胞的免疫逃避機制，使腫瘤對不良環境的耐受力增加，對凋亡的抵抗性增強，使得腫瘤細胞能夠更好地生存、生長、增殖和轉移。GRP94和GRP78在腫瘤細胞中高表達與腫瘤的發生、發展、轉移有關，被認為是評估惡性腫瘤生物學行為和預后的重要標志物。近期研究發現，部分惡性腫瘤細胞中，二者呈高表達狀態，其中包括NSCLC，并且在NSCLC中其基因和蛋白的表達程度與WHO分期和病理分化程度相關〔8〕。

GRP94的蛋白表達水平越高，患者的生存期越短，與病理類型有一定的相關性。因為GRP94具有刺激細胞生長、存進血管生成的功能，這種功能能夠使腫瘤細胞在不利其生存的環境中繼續存活。本研究提示GRP94可能與腫瘤的轉移、進展有一定的聯系；腫瘤細胞的分化過程可能有GRP94的參與；其表達對腫瘤患者的預后有一定影響。GRP78蛋白表達水平越高，患者的生存期越短。

總之GRP94和GRP78的在肺癌組織中高表達，與性別、腫瘤T分期、病理分化程度及病理類型有一定關系，且與生存期呈負相關，在預測肺癌發生、發展、預后有重要意義。

4參考文獻

1Langer R，Feith M，Siewert JR，etal.Expression and clinical significance of glucose regulated proteins GRP78 (BiP) and GRP94(GP96)in human adenocarcinomas of the esophagus〔J〕.BMC Cancer，2008;8：70-2.

2Hodorova I，Rybarova S，Solar P，etal.GP96 and its different expression in breast carcinomas〔J〕.Neoplasma，2008;55(1)：31-5.

3Nomura H，Uzuwa K，Yamano Y，etal.Network-based analysis of alcium binding protein genes identifies Grp94 as atarget in human oral carcinogenesis〔J〕.Br J Cancer，2007;97(6)：792-801.

4Zheng HC，Takahashi H，Li XH，etal.Overexpression of GRP78 and GRP94 are markers for aggressiver behavior and poor prognosis in gastric carcinoma〔J〕.Ham Pathol，2008;39(7)：1042-9.

5Fu Y，Lee AS.Glucose regulated proteins in cancer progression，drug resistance and immunotherapy〔J〕.Cancer Biol Ther，2006;5(7)：741-4.

6Wang Q，He Z，Zhang J，etal.Overexpression of endoplasmic reticulum molecular chaperone GRP94 and GRP78 in human lung cancer tissues and its significance〔J〕.Cancer Detect Prev,2005；29(6)：544-51.

7Koomagi R，Mattem J，Volm M.Glucose-related protein(GRP78) and its relationship to drug resistance proteins P170，GST-π，LRP56 and angiogenesis in non-small cell lung carcinoma〔J〕.Anticancer Res，1999；(5B)：4333-6.

8Uramoto H，Sugio K，Oyama T，etal.Expression of endoplasmic reticulum molecular chaperone Grp78 in human lung cancer and its clinical significance〔J〕.Lung Cancer,2005；49(1)：55-62.

〔2015-03-10修回〕

(編輯李相軍)

〔中圖分類號〕R730.4

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)07-1632-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.07.043

通訊作者：譚平(1963-)，男，教授，主任醫師，主要從事肺癌及COPD方面的研究。

第一作者：鐘鳴(1977-)，女，主治醫師，主要從事腫癌相關因子的研究。