朱志芳 　白建民 　鄧敏貞

【摘 要】 目的：研究二至丸對更年期模型大鼠的影響。方法：將SPF級雌性SD大鼠60只隨機分成假手術對照組、模型對照組、更年欣膠囊組（4mg/kg）、二至丸高（600mg/kg）、中（300mg/kg）、低（150mg/kg）劑量組，各組灌胃給予相應的藥物連續30d。除假手術對照組外，給藥30d后對其余5組大鼠通過手術將0.2ml無水乙醇注射到卵巢內1次，建立更年期綜合征模型大鼠。觀察大鼠給藥前后體質量的變化，測定血清中雌二醇（E2）、促卵泡成熟激素（FSH）、黃體生成素（LH）、催乳素（PRL）水平，計算子宮系數和陰道上皮細胞角化率，以及測定下丘腦5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）的含量。結果：與假手術對照組比較，模型對照組大鼠的體質量緩慢降低，肛溫升高（P<0.05），FSH、LH和PRL水平明顯升高（P<0.05） ，E2水平明顯減少（P<0.01）；陰道上皮細胞角化率和子宮系數明顯下降（P<0.01）；降低下丘腦5-HIAA/5-HT （P<0.05），增加NE/DA （P<0.05）；與模型對照組相比較，二至丸各劑量組大鼠體質量增長較模型組快，肛溫下降（P<0.05）；FSH、LH水平明顯降低（P<0.01）；PRL水平明顯降低（P<0.05） ，E2水平明顯升高（P<0.05）；陰道上皮細胞角化率明顯提高（P<0.01）；子宮系數增加（P<0.05）；增加下丘腦5-HIAA/5-HT （P<0.05），減少NE/DA （P<0.05）。結論：二至丸能既可以改善性激素，又可以增加更年期綜合征模型大鼠下丘腦單胺類神經遞質含量，從而達到緩解更年期癥狀的作用。

【關鍵詞】 二至丸；絕經綜合征；神經遞質；性激素；

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）06-0034-04

更年期綜合征多因婦女在圍絕經前后因卵巢功能逐漸衰退以致雌激素水平下降，引起以植物神經功能紊亂代謝障礙為主的一系列癥候群[1]。更年期綜合征見于中醫古籍的“臟躁”、“郁證”、“崩漏”、“月經不調”等病證中，現代中醫將其命名為“絕經前后諸癥”[2]。該病表現為五心煩熱、烘熱汗出、四肢麻木、時冷時熱等陰陽失調的癥狀[2]。西醫學一般認為卵巢功能的衰退是引起更年期各種癥狀的主要原因，應用雌激素替代療法治療婦女更年期綜合征，雖能緩解部分癥狀，但是毒副作用較大[2]。二至丸出自清代江昂《醫方集解》，具有補腰膝，壯筋骨，益腎陰的功效[4]，臨床常用于更年期相關疾病的治療[5]。本實驗采用手術方式制備更年期綜合征大鼠模型，觀察二至丸對模型大鼠生殖內分泌和神經遞質的調節，為臨床應用提供實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 材料 二至丸（批號：990910，蘇州雷允上制藥廠）；雌二醇（E2）、黃體生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、催乳素（PRL）放免試劑盒（批號：116408，美國Beckman公司）；5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）標準品（美國Sigma公司）；更年欣膠囊（批號：120702，通化方大藥業股份有限公司）。

1.2 實驗動物 SD雌性大鼠，SPF級，體質量220～250g，動物正常飼養5d后用于以下實驗，由鄭州大學實驗動物中心提供。動物合格證號：SCXK（豫）2010-0002。

1.3 儀器 ACCESS型全自動化學發光免疫分析儀（美國BECKMAN COULTER公司）；AE-200型電子分析天平（美國METTLER公司）；2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）。

2 方法

2.1 造模[6]雌性大鼠用10%水合氯醛（35mg/kg），腹腔麻醉，腹位固定然后取最末肋骨下、腋中線和距脊柱外側約2cm交叉處，剪除長毛，常規皮膚消毒，切開皮趺和背肌約1.5～2.0cm，在切口視野中白色發亮的脂肪團中找出卵巢，輕輕夾住脂肪團拉出切口外，模型組用0.5ml的注射器將0.2ml無水乙醇注射到卵巢內，假手術組僅作注射針刺動作而無任何液體，然后順勢將卵巢送回腹腔中，縫合創面，皮膚消毒，腹腔注射青霉素20萬單位，連續3d，以防手術感染。

2.2 分組與給藥 取雌性大鼠60只，隨機分成假手術組及造模組，假手術組10只，造模組50只。適應性飼養3d后，將造模組大鼠按體質量分5組，分別為模型對照組，更年欣膠囊組（4mg/kg），二至丸高（600mg/kg）、中（300mg/kg）、低（150mg/kg）劑量組。各組連續灌胃給予相應的藥物30d，每天一次。

2.3 觀察與檢測方法

2.3.1 一般觀察 觀察雌性大鼠給藥前后毛發、舌質的變化，分別于給藥前及給藥后第5、15、30天測雌性大鼠體質量及直腸溫度。

2.3.2 陰道上皮細胞角化的檢測 末次給藥2h后，用生理鹽水浸濕的棉簽輕擦雌性大鼠陰道，取出后作陰道涂片，瑞氏染色后光鏡下觀察，計算陰道上皮細胞角化率。

2.3.3 生殖內分泌激素的測定 末次給藥后1d，10%水合氯醛（35mg/kg）腹腔麻醉，腹主動脈采動脈血，3500r/min離心10min制備血清，采用放射免疫分析法測定血清中E2、LH、FSH、PRL的含量水平。

2.3.4 下丘腦神經遞質測定 將取血后的雌性大鼠迅速斷頭取腦，用化學熒光法測定下丘腦神經遞質5-HT、NE、DA、5-HIAA含量。色譜條件：色譜柱為依利特 C18（150mm×4mm，5μm），流動相： 50mmol/l檸檬酸-乙酸鈉緩沖液，流速1.0ml/min，波碳電極，檢測池電壓為0.75V，柱溫為（20±2）℃。3，4-二羥芐胺（DHBA）為內標物，樣品各主要組分用內標法進行定量。

2.3.5 臟器系數的檢測 雌性大鼠處死后解剖，稱取各只大鼠的子宮重量，計算各組雌性大鼠的臟器系數。

2.4 統計方法 數據采用SPSS 13.0進行統計處理，數據以平均值±標準差表示，P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 對更年期綜合征模型大鼠體質量的影響 由表1可知，與假手術對照組比較，模型大鼠在第15～30d毛色枯燥不光滑，舌尖色暗紅，體質量明顯減少（P<0.01）；與模型組對照比較，二至丸中高劑量組治療后大鼠體質量均有顯著增加（P<0.05）。

3.2 對更年期綜合征模型大鼠肛溫的影響 由表2可知，與假手術對照組比較，模型對照組大鼠肛溫明顯增高（P<0.05）；與模型對照組比較，給予二至丸和更年欣膠囊治療后，不同時間大鼠升高的肛溫均有所降低，給藥5d后，二至丸中劑量組大鼠肛溫顯著降低（P<0.01）；給藥15d后，二至丸高、中、低劑量組肛溫均明顯降低（P<0.05）；其中給藥30d后，二至丸中、高劑量組顯著降低大鼠肛溫（P<0.01）。

3.3 對更年期綜合征大鼠臟器系數及陰道上皮細胞角化程度的影響 由表3可知，與假手術對照組比較，模型對照大鼠子宮系數和陰道上皮細胞角化程度明顯降低（P<0.01）；與模型對照組比較，二至丸中、高劑量組能明顯增加模型大鼠子宮系數（P<0.05），陰道上皮細胞角化程度明顯增加（P<0.01）。

3.4 對更年期綜合征大鼠陰道上皮細胞角化程度的影響 由圖1可知，與假手術組比較，模型對照組的角化細胞較少。與模型對照組比較，更年欣膠囊組合二至丸各劑量組的角化細胞都有一定程度增加。

3.5 對更年期綜合征模型大鼠血清生殖內分泌激素的影響 由表4可知，與假手術對照組比較，模型對照組的血清E2水平明顯降低，FSH、LH、PRL水平明顯升高；與模型對照組比較，二至丸高、中、低劑量組均能明顯增加模型大鼠E2水平（P<0.05或P<0.01），中高劑量組能明顯降低模型大鼠血清FSH、LH水平（P<0.01），二至丸各劑量組明顯降低大鼠血清中PRL水平（P<0.05或P<0.01）。

3.6 對更年期綜合征模型大鼠下丘腦神經遞質的影響 由表5可知，與假手術對照組比較，模型大鼠下丘腦5-HIAA/5-HT明顯升高（P<0.05），NE/DA含量明顯降低（P<0.01）；與模型對照組比較，二至丸中高劑量組能明顯降低模型大鼠下丘腦5-HIAA/5-HT含量（P<0.05），增加NE/DA含量（P<0.05）。

4 討論

更年期綜合征的表現多見于陰虛內熱，陰虛內熱癥狀是由于腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，氣血臟腑功能失調，陰陽失衡所致[7]。腎臟元氣為先天之本，五臟之根，生命之門，人的生、長、壯、老、已均由腎中精氣的盛衰來決定。婦女至絕經前后，精血衰少，沖任虛損，故易使體內陰陽失調、臟腑氣血功能紊亂而發病[8]。大多以肝腎陰虛和火旺為主，故應滋補其陰和清虛火、寧心安神。更年期婦女由于卵巢功能衰退和紊亂，雌激素分泌減少，反饋性引起垂體分泌功能亢進，促性腺激素分泌過多，使下丘腦-垂體-卵巢性腺軸調節功能紊亂，內分泌失調，進而出現植物神經、心血管系統功能紊亂、新陳代謝失常的一系列癥候群[9]。造模方法模擬更年期發生的過程，發現與文獻報道絕經期婦女LH、FSH升高相吻合[10-11]。

二至丸的女貞子甘苦涼，滋腎養肝，《神農本草經》記載：“女貞子主補中，安五臟，養精神，除百病”；旱蓮草甘酸寒，養陰益精，涼血止血，二藥合用補益肝腎，減少更年期婦女腎氣漸衰，腎陰虧虛引起的頭暈耳鳴、腰膝酸軟的癥狀。該方兩藥合用共奏養血清熱、滋補肝腎之功[12]。由于更年期綜合征患者常因平素性情抑郁，或因病而致心情更為緊張，導致肝郁氣滯，或因腎陰虛而不足以養肝而致肝郁不疏，或脾病及肝，肝病及脾，心脾兩虛而生諸癥，用二至丸對此癥也有治療作用。

研究表明，二至丸對更年期綜合征模型大鼠能降低肛溫（P<0.05或P<0.01），增加血清E2水平（P<0.05或

P<0.01），降低血清FSH、LH、PRL水平（P<0.05或P<0.01），降低下丘腦5-HIAA/5-HT （P<0.05），增加NE/DA （P<0.05），增加子宮系數（P<0.05），陰道上皮細胞角化程度明顯增加（P<0.01），為二至丸在臨床上治療絕經綜合征提供了實驗依據。且葉雪清研究[13]認為下丘腦神經遞質含量與比值的改變，可能是性腺軸系統老化的始動因素。因此，從治療更年期綜合征的效果而論，二至丸有一定的調整內分泌失調及植物神經功能紊亂的作用。

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（收稿日期：2016.01.04）