生精功能障礙患者Y染色體AZF基因微缺失觀察

孫思，李艷，吳薇

(武漢大學人民醫院，武漢430060)

?

生精功能障礙患者Y染色體AZF基因微缺失觀察

孫思，李艷，吳薇

(武漢大學人民醫院，武漢430060)

摘要：目的觀察生精功能障礙患者Y染色體無精子因子(AZF)基因微缺失發生情況。方法 選擇380例生精功能障礙患者為病例組，選擇50例健康男性志愿者為對照組。采用多重PCR技術檢測兩組Y染色體AZF基因6個序列標簽位點，包括AZFa區的SY84、SY86，AZFb區的SY127、SY134，AZFc區的SY254、SY255。結果病例組Y染色體AZF基因微缺失23例(6%)，對照組無微缺失，兩組相比，P<0.05。檢出AZF基因微缺失的患者中，無精子癥17例、嚴重少精子癥5例、少弱精子癥1例；20例為單位點微缺失，3例(均為無精子癥患者)為多位點聯合缺失；SY127缺失2例，SY134缺失1例，SY254缺失7例，SY255缺失16例。結論 部分生精功能障礙患者存在Y染色體AZF基因微缺失，以AZFb區及AZFc區位點缺失為主，其中SY255缺失較為多見。

關鍵詞：Y染色體；無精子因子基因；生精功能障礙；無精子癥；少精子癥；弱精子癥

研究[1]表明，精子的發生調控與Y染色體無精子因子(AZF)密切相關。AZF基因缺失引起的生精障礙是導致男性不育的重要原因，表現為原發性無精子癥和少精癥。其中AZFa區(SY84、SY86)缺失導致青春期前精子發生阻滯[2,3]；AZFb區(SY127、SY134)缺失導致減數分裂前期或減數分裂中精子發生阻滯；AZFc區(SY254、SY255)缺失可導致精液檢查表現為無精、少精或弱精。本研究觀察了生精功能障礙患者Y染色體AZF基因微缺失發生情況，現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2011年7月~2015年7月就診的生精功能障礙患者380例(病例組)，年齡24~51歲，無精子癥122例、嚴重少精子癥53例、少弱精子癥205例。選擇健康男性志愿者50例為對照組，年齡22~50歲。兩組年齡資料具有可比性。

1.2Y染色體AZF基因檢測以ZFY、SRY作為內參照；所測Y染色體基因位點包括SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255。用Primer Premier5軟件設計引物，引物序列見表1。采用QIAGEN QIAcube全自動核酸純化系統從全血中提取DNA。取 PCR反應管4支，在管壁上分別做好Ⅰ(ZFY)、Ⅱ(SRY)、Ⅲ(SY254、SY86、SY127)、Ⅳ(SY84、SY134、SY255)標記，各加入PCR反應液(2×premix)10 μL、DNA模板4 μL，加入相對應的PCR引物2 μL，最后加入無菌水4 μL至20 μL。PCR反應程序：50 ℃ 10 min；95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 90 s，72 ℃ 1 min，共35個循環；72 ℃ 10 min；4 ℃ 10 min。將PCR產物各上樣10 μL，配制4%瓊脂糖凝膠進行電泳，應用全自動凝膠成像系統分析結果。

1.3統計學方法率的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

病例組Y染色體AZF基因微缺失23例(6%)，對照組無微缺失，兩組相比，P<0.05。檢出AZF基因微缺失的患者中，無精子癥17例(17/122)、嚴重少精子癥5例(5/53)、少弱精子癥1例(1/205)；20例為單位點微缺失，3例(均為無精子癥患者)為多位點聯合缺失；SY127缺失2例，SY134缺失1例，SY254缺失7例，SY255缺失16例。

3討論

目前認為Y染色體包含一些精子生成相關基因，Yq11同源染色體間大的重復序列發生重組會導致AZFa、AZFb、AZFc微缺失，進而引起無精子癥或嚴重少精子癥，導致原發性不育[4]。AZF基因區域6個序列標簽位點SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255缺失導致的男性不育占95%[5~7]。

本研究選擇了AZF基因區域6個特異位點，采用多重PCR檢測，發現380例生精障礙患者中AZF基因微缺失率為6%，近年來國內外學者對Y染色體AZF基因微缺失檢出率為2%~10%[7~9]，結果差異可能與研究對象選擇標準及遺傳背景不同、檢測所用序列標簽標記位點密度和位置不同、檢測方法不同有關。病例組無精子癥患者中，AZF基因缺失率為14%，高于相關報道；而少精子癥患者缺失率為9%；少弱精子癥缺失率為0.5%，與國內外報道結果相近[10]。無精子癥患者中，AZFc區單位點缺失14例，AZFb區、AZFc區聯合缺失3例，提示AZF基因區域大范圍缺失(聯合缺失)時可表現為無精子癥，而AZFc區缺失表現為生精能力缺陷[11]。值得注意的是，本研究中AZFc區位點微缺失率高(87%)，AZFb區、AZFc區位點聯合缺失率為13.0%，絕大多數AZFc區單位點微缺失患者生精過程受阻，因此有生育要求的患者需行卵泡胞質內單精子注射術輔助生育。

表1　待測基因位點引物序列

本研究未測得AZFa區位點微缺失，與先前報道有所差異[12]，可能是研究群體和遺傳背景不同所致。病例組中大部分無精子癥患者和少、弱精子癥患者均未檢測到AZF基因微缺失，AZF基因微缺失是否為這部分患者的直接病因尚不明了，可能還存在其他幾類Y染色體缺失機制[13~15]，一些其他未知因素(如肥胖、精索靜脈曲張等)也會影響精子生成從而導致不明原因的生精功能障礙[16]。

總之，部分生精功能障礙患者存在Y染色體AZF基因微缺失情況，Y染色體AZF基因相關位點檢測對生精功能障礙的診斷有重要參考價值。

參考文獻：

[1] Suganthi R, Vijesh VV, Jayachandran S, et al. Multiplex PCR based screening for microdeletions in azoospermia factor region of Y chromosome in azoospermic and severe oligozoospermic south Indian men[J]. Iran J Reprod Med, 2013,11(3): 219-226.

[2] Wu Q, Chen GW, Yan TF, et al. Prevalent false positives of azoospermia factor a (AZFa) microdeletions caused by single-nucleotide polymorphism rs72609647 in the sY84 screening of male infertility[J]. Asian J Androl, 2011,13(6):877-880.

[3] Rodovalho RG, Arruda JT, Moura KK. Tracking microdeletions of the AZF region in a patrilineal line of infertile men[J]. Genet Mol Res, 2008,7(3):614-622.

[4] Zhu XB, Liu YL, Zhang W, et al. Vertical transmission of the Yq AZFc microdeletion from father to son over two or three generations in infertile Han Chinese families[J]. Asian J Androl, 2010,12(2):240-246.

[5] Krausz C,Hoefsloot L, Simoni M, et al. EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y-chromosomal microdeletions: state-of-the-art 2013[J]. Andrology, 2014,2(1): 5-19.

[6] Zheng HY, Li Y, Shen FJ, et al. A novel universal multiplex PCR improves detection of AZFc Y-chromosome microdeletions[J]. J Assist Reprod Genet, 2014,31(5):613-620.

[7] Quintana-Murci L, Krausz C, Zerjal T, et al. Y-chromosome lineages trace diffusion of people and languages in southwestern asia[J]. Am J Hum Genet, 2001,68(2): 537-542.

[8] Lo Giacco D, Chianese C, Sánchez-Curbelo J, et al. Clinical relevance of Y-linked CNV screening in male infertility: new insights based on the 8-year experience of a diagnostic genetic laboratory[J]. Eur J Hum Genet, 2014,22(6):754-761.

[9] 史桂芝，徐小虎.Y染色體基因微缺失與男性不育的關系[J].生殖與避孕,2003,23(3):5-9.

[10] Tabassum Siddiqui R, Mujitaba N, Naz M, et al. The prevalence of Y chromosome microdeletions in Pakistani infertile men[J]. Iran J Reprod Med, 2013,11(8): 619-624.

[11] Suat N, Terrion P, Navarro A, et al. The human Y chromosome genes BPY2,CDY1 and DAZ are not essential for sustained fertility[J]. Mol Hum Report, 2000,6(9):789-793.

[12] 滕賢麟,施金俏,郭輝,等.無精癥及嚴重少精癥患者染色體核型和Y染色體微缺失分析[J].檢驗醫學，2014,29(12):18-24.

[13] Rives N. Y chromosome microdeletions and alterations of spermatogenesis, patient approach and genetic counseling[J]. Ann Endocrinol, 2014,75(2):112-114.

[14] Stouffs K, Seneca S, Lissens W. Genetic causes of male infertility[J]. Ann Endocrinol, 2014,75(2):109-111.

[15] Hotaling J, Carrell DT. Clinical genetic testing for male factor infertility: current applications and future directions[J]. Andrology, 2014,2(3):339-350.

[16] Su MT, Lee IW, Kuo PL, et al. Presence of TSPY transcript and absence of transcripts of other Y chromosomal genes in a case of microscopic gonadoblastoma[J]. Gynecol Oncol, 2006,103(1):357-360.

(收稿日期：2015-10-08)

中圖分類號：R715.5

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)07-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.027

通信作者：李艷(E-mail: Yanlitf1120@163.com)