卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達變化及與患者預后的關系

任紅娟

(南陽市中心醫院，河南南陽473000)

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卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達變化及與患者預后的關系

任紅娟

(南陽市中心醫院，河南南陽473000)

摘要：目的觀察卵巢漿液性囊腺癌組織中微小RNA-20a(miR-20a)和Let-7a的表達變化，并探討二者與患者預后的關系。方法 卵巢漿液性囊腺癌患者93例，術中留取腫瘤組織。分別留取同期手術治療的卵巢交界性腫瘤患者(43例)及卵巢漿液性囊腺瘤患者(48例)的腫瘤組織，留取正常卵巢組織(40例份)。采用real-time PCR技術檢測不同組織中的miR-20a和Let-7a。采用Kaplan-Meier法分析卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達與患者預后的關系。結果各種卵巢腫瘤組織中miR-20a表達量高于正常卵巢組織、Let-7a表達量低于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a表達量高于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織、Let-7a表達量低于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織(P均<0.05)。miR-20a、Let-7a與卵巢漿液性囊腺癌的臨床分期、分化程度、淋巴結轉移和遠處轉移發生情況有關(P均<0.05)。卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達呈負相關關系(r=-0.489，P<0.05)。卵巢漿液性囊腺癌患者隨訪至2014年2月28日，miR-20a表達量>1.42者中位生存時間短于miR-20a表達量≤1.42者，Let-7a表達量<0.98者中位生存時間短于Let-7a表達量≥0.98者(P均<0.05)。結論 卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a呈高表達、Let-7a呈低表達，二者可能共同參與了卵巢漿液性囊腺癌的發生、發展，并與患者預后有關。

關鍵詞：卵巢腫瘤；卵巢漿液性囊腺癌；微小RNA；微小RNA-20a；Let-7a基因

卵巢癌是常見的女性生殖系統惡性腫瘤。由于卵巢位置較深，卵巢癌發現時多處于晚期，晚期病例尚無有效治療手段，患者病死率高[1]。卵巢漿液性囊腺癌是最常見的卵巢原發性腫瘤，具有較強的轉移、侵襲能力[2,3]。微小RNA-20a(miR-20a)由miR-17-92簇基因編碼[4]，其在上皮來源的惡性腫瘤組織中高表達，與腫瘤發生、進展關系密切[5,6]。Let-7家族是miRNA成員之一，其中Let-7a是Let-7家族重要成員，具有抑癌基因作用[7,8]。本研究觀察了卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a和Let-7a的表達變化，并探討其意義，現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2010年2月~2013年2月在我院擇期行手術治療的卵巢漿液性囊腺癌患者93例，年齡38~73(53.6±8.7)歲；國際婦產科聯盟(FIGO)臨床分期Ⅰ期26例、Ⅱ期17例、Ⅲ期39例、Ⅳ期11例；中低分化74例、高分化19例；發生淋巴結轉移16例、出現遠處轉移63例。術中留取腫瘤組織。分別留取同期手術治療的卵巢交界性腫瘤患者(43例)及卵巢漿液性囊腺瘤患者(48例)的腫瘤組織，并留取正常卵巢組織(40例份)。各組標本迅速保存于-70 ℃液氮中備檢。

1.2miR-20a、Let-7a檢測采用real-time PCR技術檢測各組織中的miR-20a、Let-7a。組織研磨后，用TRIzol總RNA提取試劑盒提取總RNA，并用紫外分光光度計進行檢測，取A260/A280≥1.8樣品完成后續實驗。用逆轉錄試劑盒將RNA逆轉錄為cDNA。以cDNA為模板，進行PCR反應。miR-20a上游引物序列為5′-GCGGCGGTAAAGTGCTTATAGTG-3′，下游引物序列為5′-TGCAGGGTCCGAGGTAT-3′；Let-7a上游引物序列為5′-GCGCCTGAGGTAGTAGGTTG-3′，下游引物序列為5′-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3′。PCR反應條件：94 ℃預變性60 s，90 ℃變性45 s，74 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，連續進行36個循環。每個樣品均設3個平行復孔，以U6為內參，以2-ΔΔCt代表miR-20a、Let-7a相對表達量。

2結果

2.1不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中miR-20a、Let-7a相對表達量比較各種卵巢腫瘤組織中miR-20a表達量高于正常卵巢組織、Let-7a表達量低于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a表達量高于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織、Let-7a表達量低于卵巢交界性腫瘤組織及卵巢漿液性囊腺瘤組織(P均<0.05)。詳見表1。

表1　不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中

注：與正常卵巢組織相比，*P<0.05；與卵巢漿液性囊腺瘤組織相比，#P<0.05；與卵巢交界性腫瘤組織相比，△P<0.05。

2.2miR-20a、Let-7a表達與卵巢漿液性囊腺癌臨床病理參數的關系不同臨床分期、不同分化程度、不同淋巴結轉移和遠處轉移發生情況的卵巢漿液性囊腺癌患者腫瘤組織中miR-20a、Let-7a相對表達量相比，P均<0.05。詳見表2。

表2　miR-20a、Let-7a表達與卵巢漿液性

注：與Ⅰ、Ⅱ期者相比，*P<0.05；與中低分化者相比，#P<0.05；與有淋巴結轉移者相比，△P<0.05；與有遠處轉移者相比，☆P<0.05。

2.3卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達的相關性卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達呈負相關關系(r=-0.489，P<0.05)。

2.4卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a、Let-7a表達與患者預后的關系卵巢漿液性囊腺癌患者隨訪至2014年2月28日。根據本研究結果，miR-20a相對表達量>1.42者(高表達組，71例)中位生存時間15.9個月，miR-20a相對表達量≤1.42者(低表達組，22例)中位生存時間19.2個月，兩組中位生存時間相比，P<0.05。Let-7a相對表達量<0.98者(低表達組，59例)中位生存時間14.5個月，Let-7a相對表達量≥0.98者(高表達組，34例)中位生存時間為19.5個月，兩組中位生存時間相比，P<0.05。詳見圖1、2。

圖1　卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a表達

圖2　卵巢漿液性囊腺癌組織中Let-7a表達

3討論

卵巢漿液性囊腺癌作為卵巢癌最常見的病理類型，具有惡性程度高、侵襲性強、易轉移等特點，缺乏有效的早期診斷手段，約70%的患者確診時已處于晚期[9]。因此，相關腫瘤標志物的發現對早期防治有重要意義。研究[10~12]表明，miR-20a在腫瘤發生、進展及轉移過程中發揮重要作用，其在多數腫瘤組織中高表達，作為癌基因而發揮作用。本研究結果顯示，miR-20a在卵巢漿液性囊腺癌、卵巢交界性腫瘤和卵巢漿液性囊腺瘤組織中相對表達量均高于正常卵巢組織，以卵巢漿液性囊腺癌組織中相對表達量最高；腫瘤臨床分期高、分化程度低、發生淋巴結轉移或遠處轉移者腫瘤組織中miR-20a相對表達量更高，提示卵巢病變過程中伴隨著miR-20a的異常表達，且miR-20a在卵巢漿液性囊腺癌細胞增殖、侵襲、轉移中發揮重要作用。

Let-7a是Let-7家族成員之一，可通過負向調控HMGA2表達從而抑制早期腫瘤進展，可能發揮抑癌基因作用[13]。本研究結果顯示，Let-7a在卵巢漿液性囊腺癌、卵巢交界性腫瘤和卵巢漿液性囊腺瘤組織中相對表達量均低于正常卵巢組織，且卵巢漿液性囊腺癌組織中表達最低；臨床分期高、分化程度低、出現淋巴結轉移或遠處轉移者腫瘤組織中Let-7a相對表達量更低。上述結果提示Let-7a低表達參與了卵巢病變進程[14]，且Let-7a低表達可促進卵巢漿液性囊腺癌細胞增殖、侵襲及轉移。Pearson相關分析結果顯示，卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a與Let-7a表達呈負相關關系，提示miR-20a高表達與Let-7a低表達可能在卵巢漿液性囊腺癌發病、侵襲過程中發揮協同作用[15,16]。

為進一步探討miR-20a、Let-7a表達與卵巢漿液性囊腺癌患者預后的關系，我們根據以上研究結果分別界定miR-20a、Let-7a高表達組及低表達組，進行生存分析后發現，miR-20a高表達組中位生存時間短于miR-20a低表達組，Let-7a低表達組中位生存時間短于Let-7a高表達組，提示miR-20a、Let-7a表達均與卵巢漿液性囊腺癌患者預后有關，miR-20a、Let-7a有望成為卵巢漿液性囊腺癌基因治療的新靶點。

綜上所述，卵巢漿液性囊腺癌組織中miR-20a呈高表達、Let-7a呈低表達，二者可能共同參與了卵巢漿液性囊腺癌的發生與進展過程，且與患者預后有關，具體作用機制尚待進一步明確。

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(收稿日期：2015-09-09)

中圖分類號：R737.31

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)07-0047-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.017