丙酮萃取分光光度法測(cè)定水中葉綠素a實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

李旭冉，梅鵬蔚，王琳，姜偉

(天津市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心，天津 300191)

丙酮萃取分光光度法測(cè)定水中葉綠素a實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

李旭冉，梅鵬蔚，王琳，姜偉

(天津市環(huán)境監(jiān)測(cè)中心，天津 300191)

基于丙酮萃取分光光度法，對(duì)葉綠素a測(cè)定方法進(jìn)行深入研究，并通過(guò)單因素重復(fù)試驗(yàn)對(duì)凍存時(shí)間、凍存溫度、萃取時(shí)間、萃取溫度、細(xì)胞破碎方式、萃取劑濃度及萃取混合液提取方式等7方面的測(cè)定條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)條件為：水樣經(jīng)過(guò)抽濾后，置于-25 ℃低溫冰箱中凍存12 h后取出，在常溫下加入分析純丙酮，用力振搖2 min至濾膜充分粉碎后定容到10 mL，靜置不超過(guò)0.5 h，在離心機(jī)內(nèi)以4 000 r/min的速度離心，取上清液進(jìn)行比色。

葉綠素a；丙酮萃取；分光光度法

在養(yǎng)料豐富、流動(dòng)緩慢的水中，浮游植物的大量繁殖及死亡是水體富營(yíng)養(yǎng)化、水生生態(tài)系統(tǒng)失衡的主要誘因[1-3]。葉綠素a含量是反應(yīng)浮游植物生物量和初級(jí)生產(chǎn)力水平最直接有效的指標(biāo)[1]。故葉綠素a含量可作為評(píng)價(jià)湖泊富營(yíng)養(yǎng)化的指標(biāo)之一。

葉綠素a的測(cè)定方法主要有高效液相色譜法、熒光光度法和分光光度法等。環(huán)境領(lǐng)域應(yīng)用最廣的是丙酮萃取分光光度法[4]。該法靈敏度高，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作也簡(jiǎn)便。但存在在反復(fù)研磨過(guò)程中葉綠素a易發(fā)生光解，丙酮極易揮發(fā)并污染環(huán)境，浸提保存的時(shí)間和溫度規(guī)定范圍過(guò)于寬泛，具體操作的約束條件不夠嚴(yán)格統(tǒng)一等問(wèn)題，從而易引入較大誤差，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性[5]。已有研究顯示，用丙酮萃取葉綠素a，不同的萃取時(shí)間、萃取劑配比、萃取溫度以及過(guò)濾方式均對(duì)葉綠素a的測(cè)定結(jié)果有影響[6-8]。……