大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇直接測定與計算結果的比較

李 紅， 施嘉琛， 高文暉（北京市疾病預防控制中心， 北京 100013）

大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇直接測定與計算結果的比較

李 紅， 施嘉琛， 高文暉
（北京市疾病預防控制中心， 北京 100013）

目的 比較直接測定與公式計算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）結果是否存在差異。 方法 用直接一步法檢測大鼠血清中LDL-C； 根據Friedewald公式，通過總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量計算LDL-C，并將兩組數據進行比較。 結果 直接測定大鼠血清和公式計算LDL-C結果差別無統計學意義（P＞0.05）， 兩種結果相關性良好（相關系數為0.976 0）。結論 在進行相關動物實驗時，因血樣采集或實驗室檢測條件有限時，可使用Friedewald公式計算LDL-C。

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）； Friedewald公式計算法； 大鼠血清； 血脂

血脂常規檢測包括血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的測定。血脂測定結果的異常與人類健康息息相關，其中高TC血癥就是冠心病的危險因素之一，TG的升高表明體內存在代謝異常，HDL-C水平與冠心病呈負相關，而LDL-C的異常更是造成體內動脈硬化發生發展的主要脂類危險因素。

動脈粥樣硬化（AS）是指動脈內膜的脂質、血液成分的沉積，平滑肌細胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進行性病理過程。AS是心腦血管系統中最常見的疾病，嚴重危害人類的健康。通過對實驗動物建立高血脂模型，進行各種降脂研究來改善脂代謝異常［1-9］。提供準確的血脂檢測數據是研究的基礎，在動物血樣采集、實驗室檢測條件以及項目經費發生問題時，LDL-C的直接測定是否可以改為使用公式計算，本文主要是比較直接測定與公式計算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇結果是否存在差異提供支持數據。

1 材料與方法

1.1 儀器設備

全自動生化分析儀日立- 7600P模塊（日立高新技術有限公司， 日本）。

1.2 試劑、血脂復合校準品和質控血清

TC， 膽固醇氧化酶法； TG， 去游離甘油法； HDL-C 和LDL-C使用一步法，均使用雙試劑。血脂試劑、四項復合校準品，以及質控血清是由和光（和光純藥工業株式會社，日本）提供。血脂復合校準品TC、TG、HDL-C和LDL-C使用計量單位mmol/L的濃度。

1.3 大鼠血樣

6～8 周齡清潔級Wistar大鼠70只（雌雄各半），由軍事醫學科學院實驗動物中心提供 ［SCXK-（軍）2012-0004］。戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈取血，室溫分離血清。

1.4 實驗方法

在日立7600生化分析儀P模塊上同時檢測70例大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C，樣品編號1、2放質控血清，3～72編號為大鼠血樣，73、74號為質控血清。打開通訊實時監測將數據傳入實驗室信息管理系統。按照法定計量單位mmol/L，Friedewald公式計算法，LDL-C=TC-（HDL-C）-TG/ 2.2。在實驗室信息管理系統LIMS（Laboratory Information Management System，LIMS）設置計算項目直接計算LDL-C輸出結果。

1.5 統計方法

實驗室信息管理系統輸出的所有實驗數據直接使用SPSS16.0軟件包進行t檢驗和相關回歸分析統計處理，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清血脂檢測結果

TC=1.91±0.32 mmol/L， TG=0.62±0.16 mmol/L，HDL-C = 0.87±0.14 mmol/L，LDL-C = 0.77± 0.36 mmol/L。

2.2 計算結果

根據公式計算，大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇為0.761±0.311 mmol/L，與實測結果（0.77± 0.36 mmol/L）差別無統計學意義（t=1.356， P=0.179）。

2.3 測定值與計算值的相關性

大鼠血清LDL-C直接測定與公式計算的結果線性回歸方程y=0.854 4X+0.099 2，r2為0.954 6，相關系數r為0.976 0。

3 討論

大鼠血清LDL-C直接測定與公式計算兩種結果差別無統計學意義， 根據美國臨床實驗室標準協會（CLSI）EP9-A2文件的要求r≥0.975（或r2≥0.95）［10］，兩種結果有良好的相關性。這與相關文獻報道的結果一致［11～14］。

血脂檢測中TC和TG有完整的參考系統、決定性方法和參考方法。TC和TG決定性方法都是用同位素稀釋-質譜法； TC參考方法為正己烷抽提L-B反應顯色法（ALBK法）； TG參考方法為二氯甲烷抽提，變色酸顯色法； TC常規方法為酶法（CODPAP法）； TG常規方法為酶法（GPO-PAP法）。HDL-C 和LDL-C沒有決定性方法，只有參考方法，參考方法是超速離心結合選擇性沉淀法［15］。LDL-C使用間接計算法，是Friedewald于1972年發明的一個經驗式。運用時有一定條件， 空腹血清不含乳糜微粒， TG濃度在4.60 mmol/L以下， Ⅲ型高脂血癥除外。血清TG 含量2.26 mmol/L以下， 計算的LDL-C與其實測值符合為90%， TG在2.26～4.50 mmol/L時，符合率是72%，TG在4.50～6.80 mmol/L，符合率只有39%±10%［16］。大鼠血清TG含量通常比人血清含量（TG=0.62±0.16 mmol/L）低，正好在實際測定值與計算值符合率90%的組內。大鼠血清LDL-C直接測定與公式計算兩種結果得到了相關性良好和差別無統計學意義結論。

對于檢測血脂標本采集和處理，測定人血樣血脂時，在清晨空腹采血。因此建議采集大鼠血液時禁食采血。同時建議使用血清標本進行分析，肝素抗凝的血漿不影響血脂分析，EDTA抗凝血漿TC和TG含量比血清大約低3%［15］。血清密封4 ℃冰箱中可穩定4 d，確保血脂分析前的質量控制。

動物血樣不易采集，一方面是采血部位問題，另一方面是采血量。各實驗室采集大鼠標本部位差異很大，采用斷頭、麻醉采集腹主動脈、眼內眥動脈等。大鼠血樣采集部位的不同也會導致某些項目檢測結果的差異［17，18］，另外分析試劑和儀器也是保證質量的關鍵［19，20］。日常工作中多使用常規方法檢測批量標本，實驗中樣品編號1、2放質控血清，3～72編號為大鼠血樣，73、74號為質控血清，這樣的編號順序目的是用質控血清監控大鼠血樣全部檢測過程。在衛生部臨床檢驗中心室間質量評價活動中獲得合格的成績［21］，與衛生部北京老年醫學研究所、美國疾病預防控制中心進行的常規方法分析和參考物質比對都獲得滿意結果［22］。某些動物實驗的實驗室不具有生化分析的檢測能力，可能使用手工或半自動分析設備。項目經費緊張是另一可能遇到的困難，當不能直接測定LDL-C時，在確保TC、TG、HDL-C檢測準確的前提下，可用Friedewald公式計算低密度脂蛋白膽固醇。

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B

1674-5817（2016）01-0054-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.011

2015-06-23

李 紅（1968-）， 女， 主管檢驗師， 主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com