高遷移率族蛋白B1和增殖細胞核抗原在宮頸癌組織中的表達及其相關因素分析

丁文清

[摘要] 目的 探討高遷移率族蛋白B1（HMGB1）和增殖細胞核抗原（PCNA）在宮頸癌組織中的表達及其相關因素。 方法 選取2008年9月～2014年10月我院收治的60例宮頸癌患者作為研究對象，手術留取宮頸癌組織標本60份（宮頸癌組）、癌旁組織標本60份（癌旁組）、正常組織標本60份（正常組），采用免疫組織化學法檢測三組HMGB1和PCNA的表達，并分析兩指標與臨床病理特征的關系。 結果 宮頸癌組、癌旁組和正常組的HMGB1陽性表達率分別為96.7%、23.3%和6.7%，差異有統計學意義（P<0.05）；宮頸癌組、癌旁組和正常組的PCNA陽性表達率分別為91.7%、66.7%和43.3%，差異有統計學意義（P<0.05）。HMGB1的表達與TNM分期、淋巴結轉移及腫瘤分化程度相關，PCNA的表達與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度及腫瘤分化程度相關，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 宮頸癌患者的宮頸癌組織中，HMGB1及PCNA表達水平均顯著增高，兩項指標對宮頸癌的預后評估具有重要意義。

[關鍵詞] 宮頸癌；高遷移率族蛋白B1；增殖細胞核抗原

[中圖分類號] R711.74 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）02（b）-0050-03

Expression of high mobility group protein B1 and proliferating cell nuclear antigen in cervical cancer tissues and and the analysis of related factors

DING Wen-qing

Department of Gynaecology，Maternal and Child Health Hospital of Longgang District in Shenzhen City，Shenzhen 518172，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of high mobility group protein B1 （HMGB1） and proliferating cell nuclear antigen （PCNA） in cervical cancer tissues and its related factors. Methods 60 cases of cervical cancer treated in our hospital from September 2008 to October 2014 were selected as the research objects，and 60 cases of cervical cancer tissues（cervical cancer group），60 cases of adjacent tissue samples （adjacent group） and 60 cases of normal tissue samples （normal group） were collected by surgery.The expression of HMGB1and PCNA among three groups were detected by immunohistochemistry，and the relationship between the two indexes and clinical pathological features were analyzed. Results The positive expression rates of HMGB1 in cervical cancer group，adjacent group and normal group was respectively 96.7%，23.3% and 6.7%，the difference was statistically significant（P<0.05）.The positive expression rates of PCNA in cervical cancer group，adjacent group and normal group was respectively 91.7%， 66.7% and 43.3%，the difference was statistically significant（P<0.05）. The expression of HMGB1 was related to TNM stage，lymph node metastasis and degree of tumor differentiation.The expression of PCNA was related to TNM stage，lymph node metastasis，invasion depth and degree of tumor differentiation.The differences were significant（P<0.05）. Conclusion The expression level of HMGB1 and PCNA are significantly increased in cervical cancer tissues of patients with cervical cancer，and the two index have important significance to the prognosis of cervical cancer.

[Key words] Cervical cancer；High mobility group protein B1；Proliferating cell nuclear antigen

宮頸癌是一種女性生殖系統惡性腫瘤，占女性惡性腫瘤的第二位[1]，全球每年約有28萬死亡病例產生[2]，是女性常見的死因之一。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是一種低分子非組蛋白，其基因具有參與神經生長、細胞增殖、遷移、分化、炎癥反應等功能。在多種惡性腫瘤中，均存在HMGB1的過表達現象，影響腫瘤的惡性程度及預后[3]。增殖細胞核抗原（PCNA）是一種細胞核蛋白，在一定程度上可判斷細胞增殖活性，反映細胞的增殖狀態[4]。本研究探討HMGB1及PCNA在宮頸癌患者宮頸癌組織中的表達水平變化，并對其臨床意義進行研究，旨在為宮頸癌的治療及預后提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年9月～2014年10月我院收治的60例宮頸癌患者作為研究對象，手術留取宮頸癌組織標本60份（宮頸癌組）及癌旁組織標本60份（癌旁組），另取正常宮頸組織標本60份作為正常組。患者年齡21～75歲，平均（43.2±12.7）歲，術前均未接受放療、化療等針對腫瘤的治療；TNM分期Ⅰ期11例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期17例；浸潤型31例，局限型29例；浸潤深度T1 4例，T2 6例，T3 35例，T4 15例；淋巴結轉移39例，無淋巴結轉移21例；中高分化28例，低分化32例。

1.2 方法

采用免疫組化SP法對HMGB1和PCNA的表達進行檢測。試劑：鼠抗人HMGB1單克隆抗體，鼠抗人PCNA單克隆抗體，EnVision免疫組化二步法試劑盒及DAB顯色劑。所有試劑均購自北京中杉橋生物公司。方法：將選取的石蠟標本切成厚4 μm的連續切片，常規脫蠟、水化后采用高壓熱修復法修復抗原，滴加經1∶20濃度稀釋的一抗鼠抗人HMGB1單克隆抗體和鼠抗人PCNA單克隆抗體，4℃孵育過夜，滴加EnVision二抗反應，DAB控制顯色。沖洗、蘇木精復染、脫水、封片。陽性對照采用已知的陽性片，陰性對照采用磷酸鹽緩沖液代替一抗。

1.3 觀察指標

讀片方法采用雙盲法，HMGB1和PCNA蛋白陽性表達分別位于細胞質和細胞核，HMGB1染色成棕色細小顆粒，PCNA呈棕褐色或棕黃色顆粒。每個切片選10個400倍視野，統計陽性細胞數，陽性細胞數<10%為陰性標本，≥10%為陽性標本，并根據陽性細胞數百分比進行分級。-：無陽性細胞；±：陽性細胞數<10%；+：陽性細胞數為10%～30%；++：陽性細胞數30%～60%；+++：陽性細胞數>60%。陽性表達率（%）=陽性標本數/總數×100%。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計學處理，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組HMGB1和PCNA陽性表達率的比較

宮頸癌組的HMGB1陽性表達率為96.7%，癌旁組為23.3%，正常組為6.7%，三組差異有統計學意義（P<0.05）。宮頸癌組的PCNA陽性表達率為91.7%，癌旁組為66.7%，正常組為43.3%，三組差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

表1 三組HMGB1和PCNA陽性表達率的比較[n（%）]

與癌旁組和正常組比較，*P<0.05

2.2 HMGB1和PCNA陽性表達與病理特征的關系

HMGB1的表達與TNM分期、淋巴結轉移及腫瘤分化程度相關，PCNA的表達與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度及腫瘤分化程度相關，差異有統計學意義（P<0.05）（表2）。

表2 HMGB1和PCNA陽性表達與病理特征的關系[n（%）]

3 討論

宮頸癌在女性癌癥中僅次于乳腺癌，具有易復發、惡性程度高、預后不良及病死率高的特點，嚴重危害女性健康。宮頸癌原位癌高發年齡為30～35歲，浸潤癌為45～55歲，近年來宮頸癌的發病人群呈明顯年輕化趨勢[5]，<35歲的女性患病比例顯著上升，因此對宮頸癌患者的早期診斷及治療顯得尤為重要[6]。

HMGB1在各種細胞中廣泛存在，是一種高度保守的單鏈多肽核蛋白，含215個氨基酸殘基，能夠與DNA結合[7]。HMGB1在細胞內外具有不同的功能，在細胞內能夠與染色體結合，參與調控基因轉錄及DNA的復制、重組、修復[8]；在細胞外具有組織修復、免疫防御以及促炎癥作用[9]。研究發現，前列腺癌、直腸癌、乳腺癌、胃腸間質癌等多種惡性腫瘤中都存在HMGB1的過表達現象，HMGB1的過表達使轉移調控基因上調，從而參與多種癌癥的生長、轉移及擴散[10-11]，HMGB1的主要機制可能是通過抑制某種抑癌因子表達，使細胞對DNA的修復能力減弱甚至喪失，導致Ras/ERIC信號轉導通路活化過度，促進腫瘤血管的生成及惡性腫瘤的生長轉移浸潤[12]。研究表明，HMGB1可通過C-IAP2的表達及抑制Caspase-3、Caspase-9的活性，從而抑制癌細胞凋亡的發生，使腫瘤得以發生、發展[13]。本研究結果發現，宮頸癌組的HMGB1陽性表達率高于癌旁組和正常組（P<0.05），并與TNM分期、淋巴結轉移及腫瘤分化程度相關，這與既往研究結果一致，說明通過研究HMGB1的表達將有助于宮頸癌的早期檢測與治療。

PCNA是一種核內酸性蛋白質，含261個氨基酸，分子量為35 kD左右[14]。研究指出，PCNA與腫瘤的臨床分期、病理分級、淋巴結轉移及預后相關[15-17]。PCNA存在于增殖細胞中，大量表達于S期細胞核內，在DNA的合成調控中發揮著重要作用[18]。在整個細胞增殖過程中，PCNA的表達先上升后下降，G1后期開始增加，S期達到高峰，然后從G2到M期呈下降趨勢，其變化水平與細胞增殖及DNA合成過程一致[19]，可作為評估腫瘤細胞增殖能力及惡性程度的有效指標[20]。本研究中，宮頸癌組的PCNA陽性表達率高于癌旁組和正常組（P<0.05），并與TNM分期、淋巴結轉移、浸潤深度及腫瘤分化程度相關，說明PCNA的表達率隨腫瘤臨床分期和病理分級的增高而上升，因此檢測宮頸癌組織中的PCNA變化水平有利于癌癥的預后評估。

綜上所述，在宮頸癌患者宮頸癌組織中，HMGB1及PCNA的陽性表達均明顯升高，兩指標對宮頸癌的早期檢測及預后判斷具有重要意義，值得臨床推廣。

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（收稿日期：2015-10-13 本文編輯：李秋愿）