啶酰菌胺對黃瓜灰霉病防治效果的綜合評價

唐 明晉知文謝學文柴阿麗石延霞李寶聚

（1沈陽農業(yè)大學植物保護學院，遼寧沈陽 110866；2中國農業(yè)科學院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

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啶酰菌胺對黃瓜灰霉病防治效果的綜合評價

唐 明1，2晉知文2謝學文2柴阿麗2石延霞2*李寶聚2*

（1沈陽農業(yè)大學植物保護學院，遼寧沈陽 110866；2中國農業(yè)科學院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

摘 要：利用菌絲生長速率法檢測了6株灰葡萄孢（Botrytis cinerea）對6種藥劑的抗性背景，發(fā)現(xiàn)它們對啶酰菌胺具有不同水平的抗性。同時結合盆栽試驗和田間試驗評價了50%啶酰菌胺水分散粒劑對黃瓜灰霉病的防治效果。盆栽試驗中，50%啶酰菌胺水分散粒劑對具有低等抗性的2株灰葡萄孢的防治效果分別為53.49%和53.04%，對3株高等抗性的灰葡萄孢的防治效果分別為50.16%、51.67%和32.24%。說明灰葡萄孢的抗性發(fā)展已經(jīng)嚴重影響了啶酰菌胺的殺菌活性。2013年和2014年的田間試驗中，50%啶酰菌胺水分散粒劑施藥量為375 g·（667 m2）-1時，防治效果分別為94.34%和90.39%。在施藥量為300 g·（667 m2）-1時，50%啶酰菌胺水分散粒劑與對照藥劑50%腐霉利可濕性粉劑的防治效果都很顯著。綜上所述，現(xiàn)階段啶酰菌胺對黃瓜灰霉病仍具有很好的防治效果。

關鍵詞：黃瓜；灰霉病菌；啶酰菌胺；防治效果

唐明，男，碩士研究生，專業(yè)方向：農藥學，E-mail：tami0125@ hotmail.com

灰霉病是一種世界性病害，主要由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起，且寄主十分廣泛，可對果樹、花卉、蔬菜等多種經(jīng)濟作物造成危害。

目前，灰霉病已經(jīng)成為保護地作物重要的病害之一。常規(guī)的防治策略中，化學手段是病害防治的核心環(huán)節(jié)，生產(chǎn)中常用的殺菌劑有多菌靈、腐霉利、乙霉威及嘧霉胺等。

由于灰葡萄孢的適應性強，抗藥性發(fā)展快速，很多傳統(tǒng)殺菌劑的防效已經(jīng)大幅下降。新型殺菌劑啶酰菌胺于21世紀初引入我國（顏范勇 等，2008），用于防治黃瓜灰霉病。但隨著近年來該藥劑的推廣與使用，部分地區(qū)的灰葡萄孢已經(jīng)對啶酰菌胺產(chǎn)生了抗藥性（余玲 等，2012）。為了評價現(xiàn)階段啶酰菌胺的抗藥性風險和防治效果，筆者通過盆栽試驗測試了啶酰菌胺對不同抗性背景的灰葡萄孢的防治效果，同時通過田間試驗評價了啶酰菌胺的抗性風險。

1　材料與方法

試驗于2013～2014年在中國農業(yè)科學院蔬菜花卉研究所進行。

1.1供試菌株

6株灰霉病菌（Botrytis cinerea），編號分別為HH-F、HG09021201、HG0611001、HG12031302、60523、HG08022703，由中國農業(yè)科學院蔬菜花卉研究所鑒定并保存。在4 ℃下保存于PDA斜面上。

1.2供試藥劑

菌絲生長速率法測定所用藥劑：98%多菌靈原藥（Carbendazim，TC），長春長雙農藥有限公司；96%乙霉威原藥（Diethofencarb，TC），山東濰坊雙星農藥有限公司；97%咯菌腈原藥（Fludioxonil，TC），杭州宇龍化工有限公司；87.4%啶酰菌胺原藥（Boscalid，TC），利爾化學股份有限公司；95%嘧霉胺原藥（Pyrimethanil，TC），河北三農農用化工有限公司；98.5%腐霉利原藥（Procymidone，TC），江西禾益化工有限公司。

盆栽防效評價和田間防效評價所使用的藥劑：50%腐霉利可濕性粉劑（Procymidone），四川國光農化有限公司；50%啶酰菌胺水分散粒劑（Boscalid），德國巴斯夫公司。

1.3培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉18 g，去離子水定容至1 L，滅菌處理后備用。

FGA培養(yǎng)基：果糖 10 g，明膠 2 g，KH2PO41 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，NaNO32 g，瓊脂粉20 g，去離子水定容至1 L，滅菌處理后備用。

1.4灰葡萄孢（B.cinerea）對6種藥劑的抗藥性檢測

1.4.1供試藥劑母液制備 將多菌靈、乙霉威、啶酰菌胺、嘧霉胺、腐霉利原藥用適量丙酮（不超過母液總體積的3%）溶解，然后用0.1%吐溫80定容配制成200 μg·mL-1的母液備用，以相同方法將咯菌腈原藥制成1 000 μg·mL-1的母液備用。1.4.2 濃度設置及含藥培養(yǎng)基配制 多菌靈、腐霉利、乙霉威、嘧霉胺和啶酰菌胺含藥培養(yǎng)基的濃度均設定為0、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μg·mL-1。咯菌腈含藥培養(yǎng)基的濃度設定為0、0.1、1.0、10.0、20.0、100.0 μg·mL-1。將母液配制成10倍設定濃度的處理液，再將處理液與PDA培養(yǎng)基（嘧霉胺使用FGA培養(yǎng)基）按照1∶9的比例配制成目標濃度的含藥培養(yǎng)基。冷卻定型后，將培養(yǎng)擴繁好的病原菌打成直徑 5mm的菌餅，接種于含藥平板中央，置于26 ℃的恒溫培養(yǎng)室中培養(yǎng)。每處理3次重復。

1.4.3統(tǒng)計與分析 待空白對照長滿皿底或不再生長后，每個菌落用十字交叉法垂直測量直徑，取其平均值。由（1）式計算抑制率，通過濃度對數(shù)值（x）和抑制率機率值（y）之間的線性回歸關系求出毒力回歸方程和EC50值。

抑制率=（對照菌落的平均直徑-處理菌落的平均直徑）/對照菌落的平均直徑×100%（1）

抗藥性評價參考相關研究（Hilber & Schuepp，1996；丁中和慕立義，2001；紀明山 等，2003；張傳清 等，2006；趙琳 等，2008；Veloukas et al.，2011；賈利元 等，2012），根據(jù)不同藥劑的抗性分級標準進行抗性等級鑒定（表1）。

表1　黃瓜灰霉菌株對6種殺菌劑的抗性分級標準

1.5啶酰菌胺對黃瓜灰霉病的盆栽防效評價

將測試的6株灰葡萄孢（B.cinerea）在PD培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)4～5 d后，收集菌絲。將收集到的菌絲打碎后，用微量噴霧器對苗齡為1片真葉的黃瓜幼苗進行菌絲噴霧接種。接種后的黃瓜幼苗在26 ℃的條件下保濕培養(yǎng)。待幼苗發(fā)病后噴施啶酰菌胺和腐霉利進行防治，以噴施清水為對照。自施藥當天起，3 d后調查病害發(fā)展程度。按照葉片發(fā)病嚴重程度分級標準，調查每個植株的全部葉片。具體分級標準：0級，無病斑；1級，病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級，病斑面積占整個葉面積的5%～15%；5級，病斑面積占整個葉面積的16%～25%；7級，病斑面積占整個葉面積的26%～50%；9級，病斑面積占整個葉面積的51%以上。由（2）式計算病情指數(shù)，由（3）式計算藥劑的防治效果。

病情指數(shù)=〔∑（各級葉片數(shù)×相對級數(shù)的代表值）/（總葉片數(shù)×最高級數(shù)的代表值）〕 ×100 （2）

防治效果=〔（清水對照平均病情指數(shù)-處理平均病情指數(shù)）/清水對照平均病情指數(shù)〕 ×100% （3）

1.6啶酰菌胺對黃瓜灰霉病的田間防效評價

田間試驗在北京市延慶區(qū)舊縣鎮(zhèn)東羊坊村進行。黃瓜植株在田間自然發(fā)病后，采用葉面噴霧法進行施藥防治，保證植株各個部位均接觸到藥劑。用水量為675 L·（667 m2）-1，50%啶酰菌胺水分散粒劑的用藥量分別為375、300、225 g·（667 m2）-1，50%腐霉利可濕性粉劑的用藥量為300 g·（667 m2）-1。共施藥2次，間隔期為7 d，第2次施藥7 d后調查植株發(fā)病情況。以噴施清水為對照。病害調查及數(shù)據(jù)計算均與1.5中盆栽防效測定的方法相同。

2　結果與分析

2.1灰葡萄孢對6種藥劑的抗藥性

檢測結果顯示（表2），6株灰葡萄孢（B.cinerea）對6種殺菌劑具有不同水平的抗性，HG09021201菌株對6種藥劑都具有抗性；60523菌株僅對啶酰菌胺敏感，對多菌靈和乙霉威具有低等抗性，對腐霉利、嘧霉胺和咯菌腈有高等抗性；HH-F菌株對腐霉利、乙霉威和啶酰菌胺具有低等抗性，對其他3種藥劑敏感；HG0611001菌株對乙霉威有低等抗性，對啶酰菌胺有高等抗性，對其他4種藥劑敏感；HG12031302菌株僅對咯菌腈敏感，對多菌靈、腐霉利和乙霉威有低等抗性，對嘧霉胺、啶酰菌胺有高等抗性；HG08022703菌株僅對咯菌腈敏感，對多菌靈和乙霉威有低等抗性，對其余3種藥劑有高等抗性。單獨分析6株灰葡萄孢對啶酰菌胺的敏感性，共發(fā)現(xiàn)了1株敏感菌株，2株低等抗性菌株，3株高等抗性菌株。

2.2啶酰菌胺對不同黃瓜灰霉菌株的盆栽防效評價

基于6株灰葡萄孢（B.cinerea）的抗性背景，利用盆栽試驗檢測了50%啶酰菌胺水分散粒劑對這6株灰葡萄孢的防治效果（表3）。在抗性背景中，60523菌株對啶酰菌胺敏感，盆栽結果顯示，啶酰菌胺對該菌株的防效最高，為55.65%。HG08022703菌株對啶酰菌胺抗性最強，防效僅為32.24%。可見啶酰菌胺對敏感的和具有低等抗性背景的灰葡萄孢（B.cinerea）仍保持著較好的防治效果。對照藥劑腐霉利的防治效果較差，最高防效是對60523菌株的防效，為41.31%，對其他菌株的防效都在40%以下。

表2　6株黃瓜灰霉菌株對6種藥劑的抗性水平

表3　2種藥劑對6株黃瓜灰霉菌株的盆栽防治效果

注：表中同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（α=0.05），下表同。

2.3啶酰菌胺對黃瓜灰霉病的田間防效評價

2013～2014年的田間藥效試驗表明（表4），50%啶酰菌胺水分散粒劑施用濃度為375 g·（667 m2）-1時，對黃瓜灰霉病的防治效果最好，兩年的防效分別為94.34%、90.39%；在用量為300 g·（667 m2）-1時，50%啶酰菌胺水分散粒劑與對照藥劑50%腐霉利可濕性粉劑的防效相當，防效分別為87.50%和84.15%；在用量為225 g·（667 m2）-1時，50%啶酰菌胺水分散粒劑的防效略低于對照藥劑，分別為84.86%、76.48%。當用藥量減少時，啶酰菌胺的防效會有所下降，但仍然保持在較高的水平。

表4　50%啶酰菌胺水分散粒劑對黃瓜灰霉病的田間防治效果

3　結論與討論

傳統(tǒng)的殺菌劑已經(jīng)有很長的使用歷史，抗性也發(fā)展到了較高水平（Rosslenbroich & Stuebler，2000）。已有的報道顯示（LaMondia & Douglas，1997；Myresiotis et al.，2007），多菌靈、乙霉威、腐霉利等殺菌劑都已發(fā)現(xiàn)抗性樣本，且藥劑在農業(yè)生產(chǎn)中的防治效果也在降低，這些化學藥劑已經(jīng)無法滿足病害防治的需求。新型殺菌劑啶酰菌胺在防治灰霉病方面效果顯著，成功地替代了傳統(tǒng)殺菌劑，成為了防治灰霉病的特效藥劑。但是近年來的大量使用，導致部分地區(qū)的部分病原菌對其產(chǎn)生了抗性，這已經(jīng)威脅到了啶酰菌胺的使用效果（Veloukas et al.，2011）。

本試驗通過菌絲生長速率法確定了6株灰葡萄孢（B.cinerea）的抗性背景，發(fā)現(xiàn)其中2株灰葡萄孢對啶酰菌胺有低等抗性，3株灰葡萄孢有高等抗性。可見，抗性的發(fā)展已經(jīng)到達了一定的程度。在先前的研究中，關于啶酰菌胺的抗性報道多數(shù)是以離體測試的結果進行分析（Veloukas et al.，2011；余玲 等，2012），將菌株回接到活體上進行測試的報道較少（Miyamoto et al.，2010）。

通過2種藥劑對6株灰葡萄孢（B.cinerea）的盆栽防效試驗，發(fā)現(xiàn)50%啶酰菌胺水分散粒劑的防效明顯高于對照藥劑50%腐霉利可濕性粉劑。啶酰菌胺對敏感的60523菌株的防治效果達到了55.65%。對2個具有低等抗性的灰葡萄孢HH-F和HG09021201菌株的防效分別為53.49% 和53.04%，對其他3個高等抗性的HG0611001、 HG12031302和HG08022703菌株的防效分別為50.16%、51.67%和32.24%，可見盆栽試驗的結果與離體測試的結果基本一致。啶酰菌胺現(xiàn)階段仍然能表現(xiàn)出一定的殺菌活性，但是該藥劑的防治效果已經(jīng)受到了抗性發(fā)展的影響。

抗性背景顯示，60523菌株對啶酰菌胺最為敏感，雖然盆栽結果顯示其防效最高，但是僅有55.65%。該灰葡萄孢的原寄主是番茄，但是在之前的試驗中發(fā)現(xiàn)它可以侵染黃瓜，且生命力與適應力強。加之試驗在早春時節(jié)，氣候條件適合灰葡萄孢的生長，盆栽試驗中，該菌株并未對啶酰菌胺表現(xiàn)出極強的敏感性。很多殺菌劑在離體測試和活體測試時會表現(xiàn)出不同的效果（何允波 等，2005）。啶酰菌胺可以對病原菌生長的多個生長階段造成影響（仇是勝和柏亞羅，2014），菌絲生長只是其中的一個重要的部分，很難全面地說明問題。結合盆栽試驗法對敏感性進行評估，可以更加全面地評價藥劑的表現(xiàn)。

田間藥效試驗發(fā)現(xiàn)，50%啶酰菌胺水分散粒劑對黃瓜灰霉病的防效較好，在用量為375 g·（667 m2）-1時，兩年的防效在90%以上。用藥量225 g·（667 m2）-1時，防治效果也在75%以上。在300 g·（667 m2）-1的用量時，啶酰菌胺和對照藥劑腐霉利的防效十分相近，且都大于80%。由于灰葡萄孢在田間條件下的抗性水平是未知的，但是自然條件下的種群分布更具代表性和復雜性。說明現(xiàn)階段啶酰菌胺仍然是防治黃瓜灰霉病的理想藥劑。

50%啶酰菌胺水分散粒劑的田間防效顯著。根據(jù)清水對照的發(fā)病情況看，灰霉病田間發(fā)病嚴重，但啶酰菌胺仍然保持了很好的防治效果。在病情基數(shù)相對較低時使用藥劑進行防治的效果（94.34%）要高于病情基數(shù)較大時的防效（90.39%），說明啶酰菌胺具有治療效果的同時具有保護作用，在發(fā)病情況嚴重前，控制致病菌的種群數(shù)量是非常重要的。

本試驗以具有不同抗性背景的灰葡萄孢（B.cinerea）作為研究對象評價啶酰菌胺的盆栽防效，更加全面地明確了啶酰菌胺的作用特點。現(xiàn)階段啶酰菌胺用于防治灰霉病的效果仍然可觀，但是已經(jīng)有部分地區(qū)的灰葡萄孢對啶酰菌胺產(chǎn)生了抗性（余玲 等，2012）。農藥抗性的發(fā)展是人們無法回避的問題，對于啶酰菌胺這樣的新型藥劑而言，更是非常重要的課題。合理地使用藥劑，進行復配和及時輪換都是很好地控制抗性發(fā)展的手段。

參考文獻

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Veloukas T，Leroch M，Hahn M，George S.2011.Detection and molecular characterization of boscalid-resistant Botrytis cinerea isolates from strawberry.Plant Disease，95（10）：1302-1307.

Comprehensive Evaluation on Control Efficiency of Boscalid to Botrytis cinerea on Cucumber

TANG Ming1，2，JIN Zhi-wen2，XIE Xue-wen2，CHAI A-li2，SHI Yan-xia2*，LI Bao-ju2*
（1Plant Protection College，Shenyang Agricultural University，Shenyang 110866，Liaoning，China；2Institute of Vegetables and Flowers，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081，China）

Abstract：The resistance background of 6 strains of Botrytis cinerea isolated from cucumber to 6 different kinds of fungicides were examined by mycelium growth rate method，suggesting that their resistant levels to Boscalid were different.The control efficiency of 50% Boscalid WDG on cucumber gray mould was evaluated through potted experiments combined with field trials.In the potted experiments，the control efficiency of 50% Boscalid WDG on 2 strains of Botrytis cinerea with low resistant level were 53.49% and 53.04%，respectively.And the control efficiency of 50% Boscalid WDG on 3 strains of Botrytis cinerea with high resistant level were 50.16%，51.67%，32.24%，respectively.The results showed that Boscalid activity was heavily influenced by the continuously rising of Botrytis cinerea resistance.In the field trials of 2013 and 2014，the control efficiency of 50% Boscalid WDG，at the dosage of 5 625 g·hm-2，were 94.34%，90.39% respectively.Both 50% Boscalid WDG and 50% Procymidone WP could inhibit Botrytis cinerea effectively at the dosage of 4 500 g·hm-2.In summary，Boscalid could control the gray mould on cucumber effectively.

Key words：Cucumber；Botrytis cinerea；Boscalid；Control efficiency

基金項目：公益性行業(yè)（農業(yè)）科研專項（201303025），中國農業(yè)科學院科學創(chuàng)新工程項目，農業(yè)部園藝作物生物學與種質創(chuàng)制綜合性重點實驗室項目

收稿日期：2015-04-17；接受日期：2015-05-21

*通訊作者（

Corresponding authors）：石延霞，女，副研究員，碩士生導師，專業(yè)方向：蔬菜病害綜合防治，E-mail：shiyanxia@caas.cn ；李寶聚，男，研究員，博士生導師，專業(yè)方向：蔬菜病害綜合防治，E-mail：libaoju@caas.cn