瓜蔞桂枝湯對MCAO大鼠腦組織自由基代謝藥效學研究

龐文生　胡　娟

1. 福建中醫(yī)藥大學附屬第二人民醫(yī)院，福建　福州　350003；2. 福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建　福州　350122

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瓜蔞桂枝湯對MCAO大鼠腦組織自由基代謝藥效學研究

龐文生1,2胡娟2

1. 福建中醫(yī)藥大學附屬第二人民醫(yī)院，福建福州350003；2. 福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建福州350122

【摘要】目的：探討瓜蔞桂枝湯對MCAO大鼠腦組織自由基代謝影響。方法：采用線栓法制造大鼠局灶性腦缺血再灌注MCAO模型，給藥組給予瓜蔞桂枝湯原方和化裁方臨床折合劑量的水煎液，每日1次，連續(xù)灌胃14d；模型組與假手術組均給予同體積生理鹽水。生化法測定MCAO大鼠腦組織中SOD、GST和GSH-Px活力和MDA含量。結果：瓜蔞桂枝湯可以顯著提高MCAO大鼠SOD、GSH-Px、CAT的活力，對大鼠腦組織MDA升高具有明顯抑制作用。結論：瓜蔞桂枝湯可能通過減輕腦組織自由基損傷發(fā)揮其腦缺血保護作用。

【關鍵詞】瓜蔞桂枝湯；MCAO大鼠模型；SOD；MDA；GSH-PX；CAT

瓜蔞桂枝湯是《金匱要略》治療柔痙的中醫(yī)經(jīng)典方劑，以瓜蔞根加桂枝湯組成。柔痙之病是因外感風寒、過汗或誤下，耗損津液，致筋脈失養(yǎng)所造成的。桂枝湯解肌祛邪，瓜蔞根(即天花粉)能滋養(yǎng)津液而潤燥養(yǎng)筋、舒緩筋脈，以治柔痙。湯本求真氏說：“瓜蔞根治因虛熱，臟器組織燥枯，而于外表發(fā)輕微強直性痙攣，于里現(xiàn)口燥口渴及其他之癥狀”[1]。根據(jù)臨床實踐，瓜萎根確有治療因熱傷津而致強直痙攣的作用。

福建中醫(yī)藥大學校長陳立典教授創(chuàng)新性地臨床運用瓜蔞桂枝湯治療腦卒中后痙攣性偏癱，跟蹤多年臨床上使用本方的情況，患者服藥后癥減，取得較好療效[2]。將此方已研發(fā)為醫(yī)院制劑，具有自主知識產(chǎn)權。中藥復方多具有多靶點、多途徑的作用特點，因此從多方面多層次探討瓜蔞桂枝湯用于治療腦卒中后遺癥的作用機制，為其臨床應用提供理論依據(jù)。

本文研究瓜蔞桂枝湯(GLGZT)對MCAO大鼠腦組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-PX)及過氧化氫酶(CAT)等代謝的影響，探討其逆轉腦卒中神經(jīng)損傷的藥理作用靶點。

1材料與方法

1.1實驗動物SPF級雄性SD大鼠，體重(250±20)g，上海斯萊克實驗動物有限公司。

1.2實驗儀器VF3001全波長掃描多功能酶標儀(美國)。

1.3實驗藥物與試劑瓜蔞根(天花粉)、桂枝、白芍、甘草、干姜、大棗購于福建祥安藥業(yè)有限公司，經(jīng)檢測符合藥典標準；氯化鈉(國藥集團化學試劑有限公司)；SOD、GSH-Px和MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所)；CAT試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

1.4方法

1.4.1動物模型制備目前進行腦缺血再灌注損傷研究的常用動物模型為大鼠MCAO模型。采取線栓法制作大腦中動脈閉塞/再灌注模型[3]：動物術前禁食12h，自由飲水；用10%水合氯醛3ml/kg行腹腔注射麻醉；鈍性分離右側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、和頸內動脈(ICA)，并小心分離迷走神經(jīng)，分別電凝ECA分支枕動脈和甲狀腺上動脈；在距CCA分叉大約1cm處結扎ECA近心端，電凝遠心端；用無創(chuàng)小動脈夾夾閉CCA，在ECA殘端距CCA分叉3mm剪一小口，將制備好的線栓經(jīng)ECA插入ICA，線栓頭端距CCA分叉處約18mm，此時進線有輕微阻力，栓線正好插至顱內的大腦前動脈，堵住大腦中動脈(MCA)開口，制成MCAO模型；造模后2h，以半劑量10%水合氯醛再次麻醉動物，拔出線栓，結扎ECA殘端。術后20～25℃條件下飼養(yǎng)大鼠，自由進食水。假手術組除不在頸內動脈插入線栓外，其余步驟與上述相同。

1.4.2分組與給藥將40只大鼠隨機分成4組，每組10只，分別為模型組、假手術組、原方組和化裁方組。兩個給藥組分別給予瓜蔞桂枝湯原方(天花粉6g，桂枝9g，芍藥15g，甘草6g，生姜9g，大棗12枚和增大天花粉用量的化裁方(天花粉30g，其余藥味用量與原方相同)按臨床劑量折合大鼠劑量水煎劑，用水煎煮兩次合并混勻。模型組與假手術組均給予生理鹽水。每日1次，連續(xù)給藥14d。

1.4.3MDA、SOD、GSH-Px和CAT的測定大鼠于缺血再灌注24h后斷頭取腦，冰上分離缺血側大腦皮質適量，在冰浴中勻漿，用0.9%生理鹽水制成10%的組織勻漿液。4000r/min離心10 min，取上清分裝備用。具體檢測方法嚴格按各自試劑盒說明書操作，按說明書公式計算具體數(shù)值。

2結果

2.1GLGZT對MCAO大鼠腦組織SOD和MDA的影響腦組織缺血缺氧后，組織氧化和抗氧化平衡被打破，結果顯示模型組SOD、GXH-Px和CAT活力明顯降低，表明機體清除超氧陰離子自由基的能力降低；腦組織缺血缺氧后產(chǎn)生大量的自由基，攻擊生物膜中的多種不飽和脂肪酸，生成MDA等脂質過氧化物，顯示模型組腦組織MDA明顯升高。給予GLGZT后，原方和化裁方可明顯升高腦組織SOD活力；MDA均有不同程度的降低，表明GLGZT對腦組織缺血后自由基的生成有一定抑制作用；尤以化裁方效果更好；結果見表1。

表1GLGZT對MCAO大鼠腦組織

組別nSOD/U/mgMDA/nmol假手術組10145.22±8.760.93±0.26模型組10112.03±9.52▲▲1.50±0.48▲▲GLGZD原方10129.65±5.94*1.38±0.27*GLGZD化裁方10138.12±5.36**1.33±0.31*

注：與假手術組比較，▲▲P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

2.2GLGZT對MCAO大鼠腦組織GSH-Px和CAT的影響腦缺血缺氧后通過COQ途徑產(chǎn)生H2O2等過氧化物，造模后MCAO大鼠腦組織CAT、GSH-Px活性明顯降低。GLGZT原方和化裁方均可提高CAT、GSH-Px活力，同模型組相比差異有統(tǒng)計學意義。結果見表2。

表2GLGZT對MCAO大鼠腦組織

組別nGSH-Px/U/mgCAT/U/mg假手術組1016.11±2.164.39±0.62模型組108.78±1.53▲▲2.55±0.37▲▲GLGZT原方1011.34±2.44*2.83±0.37*GLGZT化裁方1013.12±3.28**3.16±0.24**

注：與假手術組比較，▲▲P<0.01，▲P<0.05；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

3討論

腦血管疾病以其高發(fā)病率、高致殘率、高復發(fā)率己成為嚴重威脅人類生命與健康的主要疾病之一，隨著我國老齡化社會的到來，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢。腦血管疾病主要包括缺血性和出血性腦卒中，其中以缺血性腦卒中最常見，而且大腦中動脈(MCA)是腦缺血的多發(fā)部位[4]。

腦組織缺血缺氧后，組織氧化和抗氧化平衡被打破，SOD、GXH-Px和CAT活力明顯降低，表明機體清除超氧陰離子自由基的能力降低；腦組織缺血缺氧后產(chǎn)生大量的自由基，攻擊生物膜中的多種不飽和脂肪酸，生成MDA等脂質過氧化物，腦組織MDA明顯升高；GXH-Px可催化過氧化物分解，保護細胞膜結構和功能的完整；CAT也可促使H2O2分解為分子氧和水，清除體內的過氧化氫，從而使細胞免于遭受H2O2的毒害[5]。瓜蔞桂枝湯能提高SOD、GXH-Px、CAT活性，減少MDA產(chǎn)生，對腦缺血后自由基的損傷有明顯的保護作用。

參考文獻

[1]田文熙. 《金匱要略》中桂枝湯類方調和陰陽的作用[J]. 中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2010，16 (8)：646-647.

[2]陳瑛玲，陳立典，陶靜.瓜簍桂枝湯治療中風后肢體痙孿的臨床研究[J]. 中醫(yī)臨床研究，2013，5 (4)：7-9.

[3]朱雪欽，韓靜，胡娟，等. 補陽還五湯對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護作用研究[J]. 中國民族民間醫(yī)藥雜志，2015，(1)：42-43.

[4]高峰. 急性缺血性腦卒中血管內治療中國專家共識[J]. 中國腦血管病雜志，2014，11(10)：556-560.

[5]邵福源，王宇卉. 分子神經(jīng)藥理學[M]. 上海：上?？茖W技術出版社，2005.

(收稿日期：2015.12.07)

【中圖分類號】R285.5

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)03-0019-01

作者簡介：龐文生，男，從事天然藥物化學研究。E-mail：pws@fjtcm.edu.cn

基金項目：福建省科技廳社會發(fā)展引導性(重點)項目(2013Y0047)資助。