移植導(dǎo)管對(duì)小鼠非手術(shù)胚胎移植影響因素分析

移植導(dǎo)管對(duì)小鼠非手術(shù)胚胎移植影響因素分析

隨著科技的進(jìn)步，非手術(shù)法胚胎移植逐漸進(jìn)入人們的世界，而小鼠作為最常見(jiàn)的模式動(dòng)物[1]，已成為研究非手術(shù)法最受歡迎的小動(dòng)物，小鼠非手術(shù)胚胎移植技術(shù)無(wú)需特別專(zhuān)業(yè)的手術(shù)設(shè)備，操作簡(jiǎn)單，對(duì)操作者的要求較低，無(wú)需擔(dān)心術(shù)后感染問(wèn)題，之前美國(guó)人員進(jìn)行了研究，但是移植成功率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于手術(shù)法，所以很少有人采用這種技術(shù)[2]。為了改變這一現(xiàn)狀且更穩(wěn)定的提高小鼠非手術(shù)胚胎移植的成功率，我們?cè)囼?yàn)并開(kāi)發(fā)一種非手術(shù)移植器械，利用這種移植器械將CD-1小鼠的囊胚經(jīng)子宮頸移植到假孕2.5天的CD-1小鼠的子宮內(nèi)，并從移植導(dǎo)管的材質(zhì)和長(zhǎng)度兩方面進(jìn)行討論。

1 移植導(dǎo)管的材質(zhì)

移植器械的發(fā)明與使用是小鼠非手術(shù)胚胎移植技術(shù)上的一項(xiàng)重大突破，它的出現(xiàn)大大簡(jiǎn)化了非手術(shù)胚胎移植的操作過(guò)程，從整個(gè)器械來(lái)看，移植導(dǎo)管是小鼠非手術(shù)胚胎移植成功的關(guān)鍵，之前一直使用玻璃導(dǎo)管，且移植效率一直都不高，為了解決這一問(wèn)題我們進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，并總結(jié)了在相同實(shí)驗(yàn)條件下用傳統(tǒng)的玻璃針以及用材質(zhì)較軟的聚四氟乙烯(PTFE)管進(jìn)行小鼠非手術(shù)胚胎移植的結(jié)果，如表1所示。

表1 不同移植器械的比較

由表1可以看出，采用不同材質(zhì)的移植器械，移植成功率不同，其中采用聚四氟乙烯(PTFE)管進(jìn)行小鼠非手術(shù)胚胎移植的成功率可以達(dá)到78.6%，而用玻璃針進(jìn)行移植的成功僅有56.4%，也就是說(shuō)采用質(zhì)地較軟且有一定弧度的聚四氟乙烯(PTFE)管可以有效地提高移植效率，我們分析原因可能是玻璃材質(zhì)的導(dǎo)管會(huì)對(duì)小鼠的子宮角造成傷害，而塑料導(dǎo)管在一定程度上減少了對(duì)小鼠子宮的傷害，所以用聚四氟乙烯(PTFE)管進(jìn)行移植的效率比較高，但相對(duì)手術(shù)法還有很大的差距，我們還需不斷地改進(jìn)。

2 移植導(dǎo)管的長(zhǎng)度

移植導(dǎo)管材質(zhì)的改進(jìn)大大提高了小鼠非手術(shù)胚胎移植的效率，我們還從移植導(dǎo)管的長(zhǎng)度方面進(jìn)行了討論，結(jié)果進(jìn)一步提高了移植成功率。為了找到最有效地移植導(dǎo)管的長(zhǎng)度，我們根據(jù)所用小鼠子宮的長(zhǎng)度以及前人的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分別采用長(zhǎng)度為1.5 cm、2.0 cm、2.5 cm聚四氟乙烯(PTFE)管進(jìn)行小鼠非手術(shù)法胚胎移植，其他實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)用品保持不變，進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表2所示。

表2 采用不同長(zhǎng)度的聚四氟乙烯(PTFE)管進(jìn)行移植的結(jié)果

由表2可知長(zhǎng)度為2.0 cm的聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效率顯著高于長(zhǎng)度為1.5 cm和2.5 cm的移植導(dǎo)管，在保證其他實(shí)驗(yàn)條件正常的前提下，移植導(dǎo)管進(jìn)入子宮的位置越深對(duì)子宮造成的損傷越大，同樣如果胚胎移入的位置離子宮頸口過(guò)近，胚胎很有可能隨著移植管的撤離和子宮的強(qiáng)烈收縮從子宮中逸出，使胚胎丟失。所以從理論以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，我們得出長(zhǎng)度為2.0 cm的聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效果最好。根據(jù)前人的結(jié)論得出手術(shù)法的移植效率為75%左右，而這種非手術(shù)方法的平均移植效率與手術(shù)法不相上下甚至優(yōu)于手術(shù)法，所以此方法值的推廣，可以被更廣泛的應(yīng)用。

3 總結(jié)

3.1 實(shí)驗(yàn)存在誤差與偶然性，應(yīng)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

3.2 玻璃管移植效率與手術(shù)法比較仍具有顯著的差異，對(duì)小鼠子宮損傷大。經(jīng)改進(jìn)后，聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效率顯著提高，與手術(shù)法相當(dāng)且對(duì)小鼠子宮損傷小，值得推廣。

3.3 由實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：長(zhǎng)度為2.0 cm的聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效率最高。

[1]郭鵬，蘇銳.胚胎移植技術(shù)及在畜牧業(yè)中的應(yīng)用前景[J].2009(12)：21～23.

[2]MarskL，LarssonKS.A s imple method for nonsurgical blastocyst transfer in mice[J].Reprod Fertil，1974，37(02)：393～398.

071000 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 蔣瑞

岳巧嫻 薛如冰

河北農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目：小鼠非手術(shù)胚胎移植器的研究(20160403)