酶聯免疫法做抗體檢測時應注意的事項

酶聯免疫法做抗體檢測時應注意的事項

近幾年來，隨著養殖業的不斷發展，畜禽抗體水平的檢測越來越受到廣大養殖戶的重視。作為獸醫實驗室工作人員，筆者結合自己的工作實踐，現將酶聯免疫法做抗體檢測時應注意的事項總結如下：

1　試驗前應注意的事項

1.1試驗前應先檢查試劑盒是否過期，試劑盒內的試劑是否因為瓶蓋松動、破裂等因素造成污染或變質。如有以上現象則本試劑盒不能用。

1.2由于試劑盒是在2℃～8℃下保存的，所以整套試劑在使用前應平衡至室溫。室溫為22℃～25℃。

1.3檢查樣本血清是否保存完好，是否溶血或污染。若因保存不好發生變質或樣本血清本身就因為采集不當而發生溶血或污染則可能影響檢測結果，檢測意義就不大了。

1.4做試驗前應先對樣本血清進行編號和標記，使其與反應板上的編號一一對應。一般一個反應板一次最多可做90份樣本血清，這樣就可能涉及到多個養殖戶，所以我們要對樣本進行編號和標記，使其與養殖戶的畜禽一一對應起來，以便對試驗結果進行分析。

2　試驗過程中應注意的事項

2.1做試驗時一定要設定陽性對照孔、陰性對照孔和空白對照孔，以便確定試驗是否有效。

2.2每次加樣時要更換滴頭，以免造成交叉污染。特別是在加樣本血清時，一定要加一個樣本血清換一次滴頭。

2.3每次加樣所用的時間應盡量縮短，以避免因加樣時間過長而出現的前后加樣反應時間不一致導致結果出現誤差。

2.4在溫育反應時，溫育30 min誤差應控制在±2 min以內，溫育10 min誤差應控制在±1 min以內，避免因反應時間縮短或延長而造成整體顯色降低或升高。

2.5每次洗板時，不管是手洗還是洗板機洗，洗完后都要把反應板拍干。

2.6每次試驗溫育反應所用的封板膜不能重復使用，試劑瓶蓋也不能交叉使用，以免造成交叉污染，從而影響試驗數據的準確性。

2.7試驗中所用的終止液屬于強腐蝕性物質，一定要做好個人防護，避免其掉到身體或衣物上。

2.8在使用酶標儀前，一定要先把酶標儀的開關打開，檢查系統是否能夠正常運行。并且在檢測數據前要預熱30 min。

3　試驗完成后應注意的事項

3.1試驗完成后，應先根據試劑盒說明書上提供的指標，對應試驗數據判定試驗是否有效。（使用單波長測定時，各孔OD值應先減去空白對照孔OD值，再進行結果分析。）如未達到指標，則試驗無效需要重做。

3.2試驗完成后，試劑開封如未用完，反應板條應和干燥劑一起放入自封袋內密封2℃～8℃保存，其它液體組份使用后瓶蓋擰緊置2℃～8℃保存。開封的試劑盒應在1周內用完。

3.3試驗結束后，在確定本次試驗有效的情況下，根據前的面編號對各個養殖戶畜禽的抗體水平進行分析。對分析結果和原始數據做好記錄并保存，以備以后查詢。

3.4不同物種的試劑盒不能用于其它物種樣品的檢測，不同批號的試劑盒中的組份不能混用。

3.5試驗結束后，所有樣本、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物做好無害化處理。

054200河北省內丘縣農業局魏永杰