板藍根類制劑抑菌生物效價測定方法的研究

●饒單平

板藍根類制劑抑菌生物效價測定方法的研究

●饒單平

板藍根是臨床治療中比較常用的一種中藥制劑，具有較好的抑菌和滅菌效果。同時，板藍根中包含了很多藥理成分，只采用指紋圖譜對其質量進行控制，會導致有效含量含義不足。本文將通過實驗室研究，對其抗菌活性以及生物效價的測定方法進行了綜述分析。

板藍根類制劑；抑菌生物效價；測定方法

中藥中的活性成分較多，使其具有多方面的藥理作用。目前，理化測定是控制中藥質量的主要方法，也就是對其中的化學方法進行檢測。但是，中藥的藥效并不是某一種具體活性成分的單一作用，也不是多種活性成分的簡單相加，復方制劑更是如此。所以，只對少數幾種成分進行測量和控制并不能完全對其質量進行有效控制，也無法準確反映其臨床療效。為了提高中藥的質量控制標準，確保藥品臨床使用的安全性，有必要在原來的質量控制標準上，增加新的測定方法——生物活性檢測，對中藥質量進行評價和控制。板藍根具有清熱解毒、利咽消腫等功效，本文就以板藍根類制為例，對其抑菌生物效價的測定方法進行如下綜述。[1]

1 測定設備和主要方法

1.1 測定設備

板藍根類制劑抑菌生物效價的檢測涉及到的檢測設備和儀器較多，主要包括：①多功能微生物自動測量分析儀（北京先驅威鋒，ZY-300IV）；②高效液相色譜儀（日本島津，LC-2010A）和色譜工作站（LC Solution）；③生化培養箱（蘇州威爾，HPY300）；④色譜柱、4.6mm×250mm Agilent C18和8453紫外可見分光光度計；⑤單人單凈化工作臺（蘇州凈化，VS-840-1（2））；⑥高壓蒸汽滅菌器（英國AS，AMA440N）；⑦雙頻脫氣智能型超聲混均儀（深圳雷邦電子，PS-100AD）。[2]

1.2 測定方法

①制備板藍根提取液。取4份10克板藍根對照藥材，各加入80克水、乙醚、乙醇與丙酮，放置在500W超聲下提取30分鐘后蒸干。將50毫升蒸餾水加入提取物后，再用超聲提取60分鐘，過濾，濃縮為含1g/ml生藥的提取液，放置在4℃環境中密封保存。經試驗發現，乙醇的提取效果最佳。

②選擇實驗菌株。板藍根具有比較廣泛的抗菌譜，其提取液對多種細菌，例如傷寒沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等，都有較好的抑制效果。采用國家規范文件中的二倍稀釋法，對上述標準菌株的MIC（最小抑菌濃度）進行檢測，并使用平板轉染法測定其MBC（最小殺菌濃度）。

③制備雙碟。取2個直徑9厘米，高1.6～1.7厘米的平底碟，分別注入20毫升經濕熱滅菌溶化后的培養基，使其在碟底內均勻分布，并放置在無菌水平工作臺上，待其自然凝固后作為底層。然后再加熱融化100毫升滅菌培養基，待其溫度下降到48～50℃后，加入100μL枯草芽孢桿菌菌懸液106cfu/ml，將其搖晃均勻后，在2個碟內分別添加5毫升，并在底層上均勻分布，作為菌層，自然冷卻即可。

上述操作完成后，依次進行培養基和緩沖液對抑菌影響的實驗，根據實驗結果，選擇最佳的培養條件、中心濃度，然后經過多次對比實驗確定生物效應的標準曲線，最后完成回收率實驗，對板藍根的抑菌生物效價和板藍根片的HPLC進行評價。[3]

2 生物測定法的評價

2.1 適用范圍

生物測定法在醫藥領域中的應用范圍比較廣泛，其中常見的有測定藥物效價、建立檢驗方法、比較藥物作用強度、檢測微量生理活性物質和檢測農藥殘留等方面。在有效物質不明確，或者有效物質含量較低，以及化學結構化的中藥材、中藥材制劑、生物制劑中，生物檢測法是一種經常使用的質量控制方法。

2.2 選擇合適的藥材提取方法

在本次實驗研究中，我們對生物檢測法對板藍根藥材和相關制劑的質量控制進行了初步探索。因為中藥的藥用效果會受到提取溶液因素的較大影響，所以選擇了4種具有不同極性的凸起溶劑來提取，對板藍根類制劑使用生物測定法時，提取溶劑的選擇進行了對比研究，結果發現，使用乙醇的提取效果最佳。在提取方法方面，本次實驗對水煎和超生提取的結果進行了比較，結果顯示，超聲提取的效果優于水煎。

2.3 回收率和穩定性

生物檢測法的重復性較差，所以很多文件都對其可信限率進行了規定。可信限率可以控制方法達到一定的精密度。因此可信限率的大小與實驗的各個方面均有密切關系。本次實驗研究發現，不同濃度的回收率均位于90～110%之間，可信限率均在10%以內，說明該檢測方法具有一定的穩定性。

2.4 應用優勢

首先，生物檢測法能夠對不同產地、不同生產廠家、不同生產批次樣品的抗菌效力進行檢測，準確有效地評價該藥品的抗菌活性，進而準確反應出中藥中有效組分的整體抗菌效力。其次，在中藥質量控制和評價體系中引入生物活性檢測法，既可以對中藥的品種和質量進行鑒定，又可以有效提高藥效評價。如果將該檢測方法和傳統的檢驗方法結合起來，還能夠對藥品的質量進行更好的控制。

（作者單位：解放軍第184醫院）

[1]李遠,郭輝,李海濱,等. 基于生物熱動力學分析的板藍根抑菌效價檢測方法的建立[J]. 世界中西醫結合雜志,2012,01（27）:24-27.

[2]鄢丹,任永申,駱驕陽,等. 中藥質量生物測定的思考與實踐——以板藍根為例[J]. 中國中藥雜志,2010,19（06）:2637-2640.

[3]李寒冰,武彥舒,肖小河,等. 基于抗病毒活性檢測的板藍根質量生物評價方法及優化研究[J]. 中草藥,2011,08（34）:1560-1565.