頂空氣相色譜法同時測定硫辛酸中8種殘留溶劑含量

楊龍華，宿 潔，陳 濤，盧京光，欒成章

（山東省青島市食品藥品檢驗研究院，山東 青島 266071）

頂空氣相色譜法同時測定硫辛酸中8種殘留溶劑含量

楊龍華，宿 潔，陳 濤，盧京光，欒成章

（山東省青島市食品藥品檢驗研究院，山東 青島 266071）

目的 建立同時測定硫辛酸原料藥中乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷8種殘留溶劑含量的頂空毛細管氣相色譜法，以保證硫辛酸的質量滿足藥用要求。方法 采用頂空進樣系統程序升溫法，以FID為檢測器，以5%二苯基－95%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱為色譜柱(SPB－5，60 m×0．53 mm，3．0 μm)。結果 乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯、三氯甲烷和 1，2－二氯乙烷質量濃度分別在 123．9～1 983 μg／mL，126．8～2 029 μg／mL，7．284～116．5 μg／mL，12．89～1 031 μg／mL，95．32～1 525 μg／mL，27．05～432．8 μg／mL，1．268～20．29 μg／mL，0．139 9～1．399 μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好（r在0．999 0～1．000 0）；平均回收率分別為103．3%，95．9%，93．1%，95．3%，97．5%，95．2%，93．3%，91．1%，RSD分別為0．8%，0．7%，1．1%，0．9%，1．1%，1．0%，1．4%，1．0%（n＝9）；方法檢測限分別為15．37 μg／g，0．86 μg／g，0．38 μg／g，8．30 μg／g，0．090 μg／g，1．59 μg／g，1．27 μg／g，0．12 μg／g。結論 該法快速、靈敏、準確、簡便，色譜峰分離度良好，適用于硫辛酸原料藥中有機殘留溶劑的測定。

硫辛酸；殘留溶劑；頂空毛細管氣相色譜法

硫辛酸在體內經腸道吸收后進入細胞，兼具脂溶性與水溶性，可在全身通行無阻，到達任何一個細胞，提供人體全面效能，是萬能抗氧化劑[1－4]。以硫辛酸為原料的片劑、膠囊劑、注射劑等藥物被廣泛應用于臨床[5－8]。硫辛酸原料藥的生產工藝共涉及到8種有機溶劑，如乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯、三氯甲烷及1，2－二氯乙烷。筆者根據人用藥物注冊技術要求國際協調會（ICH）和2010年版《中國藥典(二部)》[9]的要求和殘留溶劑的測定方法[10－15]，建立了可同時檢查這8種有機溶劑殘留量的頂空氣相色譜法，限度統一為2010年版《中國藥典（二部）》附錄ⅧP殘留溶劑檢查規定的限度，為中國藥典收載硫辛酸質量標準做好技術準備。

1 儀器與試藥

GC－2010型氣相色譜儀（日本島津公司），氫火焰離子化檢測器(FID)；Perkim Elmer頂空進樣器。乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯、三氯甲烷及1，2－二氯乙烷、二甲亞砜等試劑均為色譜純（天津科密歐化學試劑有限公司，批號為 20140209，20130915，20130806，20140319，20131205，20131115，20130627，20140122，20140205）；水為超純水；氫氧化鈉為優級純；硫辛酸原料藥（A公司，上海現代制藥股份有限公司，批號為1006001，1006002，1006003；B公司，江蘇同和制藥股份有限公司，批號為100401，100501，100701）。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：以5%二苯基－95%二甲基聚硅氧烷（SPB－5）為固定液的毛細管柱（60 m×0．53 mm，3．0 μm）；柱溫起始溫度：40℃，維持5 min，再以8℃／min的速率升溫至180℃，維持5 min；載氣:氮氣；進樣口溫度：200℃，分流比為1∶1；檢測器FID溫度:250℃；頂空瓶平衡溫度：80℃，平衡時間30 min。精密稱取8種有機溶劑各適量，以二甲亞砜制成每1 mL中約含乙醇0．5 mg，丙酮0．5 mg，正己烷0．029 mg，乙酸乙酯0．5 mg，環己烷0．388 mg，甲苯0．089 mg，三氯甲烷0．1 mg，1，2－二氯乙烷0．1 mg的混合溶液，精密量取2．0 mL，置頂空瓶中，密封，在上述色譜條件下，頂空進樣分析，記錄色譜圖。結果相鄰色譜峰的分離度均大于1．5，理論板數均大于5 000，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取乙醇2．478 82 g、丙酮2．536 52 g、正己烷0．145 09 g、乙酸乙酯2．579 58 g、環己烷1．906 47 g、甲苯 0．541 06 g、三氯甲烷 0．050 74 g、1，2－二氯乙烷0．027 99 g，分別置100 mL容量瓶中，加二甲亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為各殘留溶劑對照品貯備液。

精密量取乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯對照品貯備液各1．0 mL，三氯甲烷對照品貯備液0．5 mL，1，2－二氯乙烷對照品貯備液0．1 mL，置同一50 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中約含乙醇0．5 mg、丙酮0．5 mg、正己烷0．029 mg、乙酸乙酯0．5 mg、環己烷0．388 mg、甲苯0．089 mg、三氯甲烷6 μg和1，2－二氯乙烷0．5 μg的混合溶液，精密量取2．0 mL，置頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

取硫辛酸原料藥約0．2 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入二甲亞砜2．0 mL使溶解，密封，作為供試品溶液。

圖1 頂空氣相色譜圖

2．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取2．2項下8種對照品貯備液各適量，以二甲亞砜稀釋制備8種溶劑的混合標準曲線溶液。在擬訂色譜條件下，頂空進樣分析，記錄色譜圖，以各溶劑質量濃度（C，g／mL）對相應色譜峰面積（A）進行回歸計算，得到各溶劑的線性范圍、標準曲線回歸方程及相關系數，見表1。

定量限和檢測限確定：取線性關系考察項下最低濃度的混合標準曲線溶液，以二甲亞砜逐級稀釋，在擬訂色譜條件下，頂空進樣分析，記錄色譜圖。當殘留溶劑色譜峰的 S／N＝10時為其定量限，S／N＝3時為其檢測線，結果見表1。

表1 8種殘留溶劑的線性范圍、標準曲線方程及定量限、檢出限（n＝5）

精密度試驗：取2．2項下同一對照品溶液，在上述色譜條件下，連續頂空進樣分析，記錄色譜圖。結果乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷峰面積的 RSD分別為1．3%，1．2%，0．9%，1．2%，0．8%，1．2%，1．9%和1．3%（n＝10），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取硫辛酸原料藥（批號為1006001），按2．2項下方法平行制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件依法測定。結果乙醇、丙酮、正己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷均未檢出，乙酸乙酯和環己烷含量的 RSD分別為1．1%和1．7%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的硫辛酸原料藥（批號為1006001，含乙酸乙酯0．0123%，環己烷0．0403%，其余殘留溶劑量為0）0．2 g共9份，精密稱定，分別置6個頂空瓶中。按2．2項下對照品溶液的制備方法，精密量取8種溶劑對照品貯備液各適量，用二甲亞砜稀釋制備含8種有機溶劑的低、中、高3種質量濃度的混合對照品溶液；精密量取3種混合對照品溶液2．0 mL各3份，分別置上述9個頂空瓶中，密封，依法進行測定并計算各溶劑回收率。結果乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、環己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷平均回收率分別為 103．3%，95．9%，93．1%，95．3%，97．5%，95．2%，93．3%，91．1%，RSD分別為 0．8%，0．7%，1．1%，0．9%，1．1%，1．0%，1．4%，1．0%（n＝9）。

2．4 樣品含量測定

取 3批硫辛酸原料藥（A公司，批號為 1006001，1006002，1006003）和3批硫辛酸原料藥（B公司，批號為100401，100501，100701），分別按2．2項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下，頂空進樣分析，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算原料藥中8種殘留溶劑含量。結果見表2。

表2 樣品中殘留溶劑測定結果（%）

3 討論

色譜柱的選擇：所檢查的8種溶劑極性較弱，正己烷和環己烷在極性毛細管柱DB－1301(6%氰丙基苯基－94%聚二甲基硅氧烷，30 m×0．53 mm，3．0 μm)中幾乎無保留；乙醇與丙酮在非極性毛細管柱HP－5(5%苯基－95%甲基硅氧烷，30 m×0．32 mm，0．25 μm)毛細管色譜柱中不能達到基線分離。選擇弱極性毛細管柱SPB－5（5%二苯基－95%二甲基聚硅氧烷，SPB－5，60 m×0．53mm，3．0 μm)，8種殘留溶劑的保留時間適宜，且分離度符合規定。

溶劑的選擇：硫辛酸不溶于水，選擇二甲基甲酰胺作為溶劑，在SPB－5毛細管色譜柱上，甲苯與二甲基甲酰胺的色譜峰重合，影響硫辛酸中甲苯的準確檢出；選擇二甲亞砜作為溶劑，8種溶劑均能夠準確檢出。

柱溫的選擇：本試驗中所測8種有機溶劑沸點從56℃到111℃，各溶劑沸點相差較大。因此，采用程序升溫的方法，柱溫起始溫度40℃，維持5 min，再以8℃ ／min的速率升溫至180℃，維持5 min，可使低沸點組分和高沸點組分在色譜柱中均有適宜的保留，并保證各色譜峰分布均勻且峰形對稱。本試驗中所采用的升溫程序，減少了樣品分析時間，提高了檢測靈敏度，使8種溶劑色譜峰均達到較好分離。

進樣方式的選擇：氣相色譜可直接進樣和頂空進樣。本試驗中所測8種有機溶劑均具有良好的揮發性，適宜采用頂空進樣方法。本試驗中采用頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時間為30 min，可靈敏、有效、準確地測定硫辛酸中8種有機溶劑的殘留量。

所建立的方法專屬性強，靈敏度高，重復性好，操作簡便，符合2010年版《中國藥典（二部）》方法學驗證要求；用于測定硫辛酸原料藥中的殘留溶劑，結果準確可靠，可作為硫辛酸原料藥質量控制項目之一。

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Determination of 8 Residual Solvents in Alpha Lipoic Acid by Headspace Gas Chromatography

Yang Longhua,Su Jie,Chen Tao,Lu Jingguang,Luan Chengzhang
(Qingdao Institute for Food and Drug Control,Qingdao,Shandong,China 266071)

Objective To develop a headspace gas chromatography for the determination of 8 residual solvents in alpha lipoic acid and to ensure the quality accordance with the requirements of the medical．Methods After being dissolved with DMSO,the eight residual solvents including alcohol,acetone,n－hexane,ethyl acetate,cyclohexane,methylbenzene,chloroform,1,2－ dichloroethane in alpha lipoic acid were separated by GC on a capillary column(SPB－5,60 m×0．53 mm,3．0 μm)with a mobile phase of nitrogen．And the quantities of the 8 residual solvents in alpha lipoic acid were calculated respectively．Results The calibration curves for alcohol,acetone, n－hexane,ethyl acetate,cyclohexane,methylbenzene,chloroform,1,2－dichloroethane were linear over the range of 123．9－1 983 g／mL, 126．8－2 029 g／mL,7．284－116．5 g／mL,12．89－1 031 g／mL,95．32－1 525 g／mL,27．05－432．8 g／mL,1．268－20．29 g／mL, 0．139 9－1．399 g／mL（r＝0．999 0－1．000 0）,respectively．The average recovery rates were 103．3%,95．9%,93．1%,95．3%, 97．5%,95．2%,93．3%,91．1%,RSD were 0．8%,0．7%,1．1%,0．9%,1．1%,1．0%,1．4%,1．0%(n＝9),respectively．And the LOD were 15．37 μg／g,0．86 μg／g,0．38 μg／g,8．30 μg／g,0．090 μg／g,1．59 μg／g,1．27 μg／g,0．12 μg／g,respactively．Conclusion The method is sensitive,accurate and convenient with good resolution,which can be applied to control the quality of alpha lipoic acid．

alpha lipoic acid;residual solvent;HS－GC

R927．11；R977．2

A

1006－4931(2016)03－0049－04

紹：楊龍華（1979－），女，漢族，碩士研究生，主管藥師，主要從事藥物質量評價及分析，（電話）0532－85785299（電子信箱）ylhlonghua＠163．com。

2015－05－13；

2015－09－15)