新余市無償獻血者HBsAg檢測結果分析

李麗平，彭小華，楊　，吳青蓮(、新余市中心血站，江西新余338000；、新余市渝水區珠珊衛生院，江西新余338033)

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新余市無償獻血者HBsAg檢測結果分析

李麗平1，彭小華1，楊1，吳青蓮2
(1、新余市中心血站，江西新余338000；2、新余市渝水區珠珊衛生院，江西新余338033)

摘要：目的對新余市無償獻血者HBsAg檢測結果進行分析。方法取新余市中心血站2012年4月1日至2015年9 月30日無償獻血者血液標本31356例，用兩種ELISA二步法試劑進行HBsAg檢測，對HBsAg單試劑陽性標本和陰性標本進行核酸（定性）檢測，核酸檢測為陽性的標本及陽性血漿送衛生部臨檢中心進行確證試驗。結果HBsAg雙試劑陽性358例，單試劑陽性27例，核酸HBV-DNA陽性49例，其中44例HBV-DNA陽性為兩遍ELISA法陰性標本，5例HBV-DNA陽性為ELISA法單試劑陽性標本。結論單純采用兩遍ELIS法檢測HBsAg仍存在一定的漏檢，ELISA法檢測結合核酸HBVDNA檢測可提高HBsAg檢出率，縮短HBsAg的“窗口期”，最大限度降低輸血風險，提高輸血安全。

關鍵詞：HBsAg；核酸；ELISA；無償獻血

當前，國內血液篩查以傳統血清學方法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測為主，通過ELISA法檢測血液中的病毒特異性抗原和/或抗體，從而間接確定其是否感染相應病原體，但ELISA法尚不能檢測出處于血清轉換前的“窗口期”（即機體感染某病原體到檢測到相關指標之間的時間）病毒感染，存在經輸血傳播疾病的風險。與ELISA相比，核酸檢測作為對病毒的核酸進行擴增，直接檢測病原體，具有更高的靈敏度和特異性。核酸檢測能將乙肝（HBV）的“窗口期”從原來血清學檢測的56d縮短至36d，極大地降低了“窗口期”的感染風險。2012年4月1日至2015年9月30日共篩查血液標本31356例，HBsAg雙試劑陽性358例，單試劑陽性27例，核酸陽性49例，現報告如下。

1　材料與方法

1.1標本來源與處理2012年4月至2015年9月本站共采集血液標本31356例，留取2管標本，其中一管（帶分離膠EDTA-K2抗凝）用于核酸檢測，另一管（EDTA-K2抗凝）用于血清學檢測。在2℃～8℃冰箱保存，4h內離心。

1.2儀器Uranus-AE-100全自動酶免分析儀(深圳愛康電子公司)；上海浩源血液核酸篩查平臺：Hamilton STAR全自動混樣儀(瑞士哈美頓公司)、Ezbead System-32提取儀(美國Texas BioGene公司)、7500型實時熒光定量PCR擴增儀(美國ABI公司)。

1.3試劑HBsAg檢測試劑由廈門新創、北京萬泰用兩個廠家提供的ELISA二步法試劑，核酸檢測試劑由上海浩源生物科技有限公司提供三合一血液篩查試劑，在1個反應管中同時檢測3種病毒。

1.4方法用兩種ELISA法試劑進行HBsAg檢測，結果判斷標準：S/CO≥1為陽性，0.8≤S/CO<1為灰區，S/CO<0.8為陰性，對雙試劑陽性標本、單試劑陽性標本取相對應的血液辮子和試管標本進行平行檢測，再檢血液辮子和試管標本結果S/ CO≥0.8時該標本判為陽性，S/CO<0.8判斷為陰性。同時對HBsAg單試劑陽性標本和陰性標本進行核酸（定性）檢測，核酸結果判定：Ct>45為陰性，Ct≤45為陽性。

2　結果

2.1 HBsAg檢測情況2012年4月至2015年9月本站共采集無償獻血者血液標本31356例，HBsAg陽性358例，單試劑陽性27例，HBV-DNA陽性49例。結果見表1。

表1　HBs Ag檢測情況

2.2兩種酶免試劑檢測結果及核酸檢測結果2012年4月至2015年9月共檢測HBsAg酶免陰性30971例，其中HBV-DNA陽性44例，單試劑陽性再檢陽性27例，其中廈門新創試劑初次反應性標本40例，再檢陽性15例，北京萬泰試劑初次反應性標本73例，再檢陽性12例，其中5例單試劑陽性標本HBV-DNA陽性均為萬泰試劑陽性。結果見表2。

表2　酶免陰性和單試劑陽性標本核酸檢測情況（n）

2.3衛生部臨檢中心檢測結果49例核酸陽性中28例為二次以上獻血者，占57.1%，第一次獻血者21例，占42.9%，HBV-DNA陽性標本自2012年5月至2015年9月共送45例到衛生部臨檢中心檢測，其中共反饋結果39例，見表3。

2.4隨訪結果49例核酸陽性獻血者中成功追蹤隨訪5例，其中1例HBsAg由陰性轉陽性，其余4例追蹤檢測結果。見表4。

3　討論

2012年4月至2015年9月共檢測無償獻血者血液標本31356例，其中HBsAg陽性358例（1.1%），單試劑陽性27例（0.08%），HBV-DNA陽性49例（0.15%），陽性率高于其他地區[1-3]。影響ELISA檢測結果的因素很多[4]，廈門新創試劑初次反應性標本40例，再檢陽性15例，北京萬泰試劑初次反應性標本73例，再檢陽性12例，單試劑反應性再檢陽性27例中有5例核酸陽性，均為北京萬泰再檢陽性標本，說明北京萬泰HBsAg試劑檢測靈敏度高，其余22例再檢陽性核酸測定結果為陰性，核酸檢測也存在檢測靈敏度、病毒的不規則分別和核酸檢測病毒的隨機性等問題，有文獻顯示單試劑陽性而核酸陰性，中和試驗陽性的情況[5]。本研究結果顯示，HBV-DNA陽性標本49例中28例為2次及2次以上獻血，占57.1%，其余21例為初次獻血，占42.9%，其中5例單試劑陽性標本HBV-DNA陽性為二次及二次以上獻血。從以上數據表明單純采用兩遍ELISA法檢測HBV病毒，仍然存在一定的漏檢風險，而核酸檢測的靈敏度高，可有效彌補ELISA法檢測HBsAg的不足[6，7]，最大限度的降低輸血風險，提高輸血安全。

核酸陽性的39例標本送衛生部臨床檢驗中心確認，結果顯示，HBeAb和HBcAb均為陽性，HBcAb是HBV感染后最早出現的特異性抗體，是既往感染的標志，說明這39名獻血者既往有乙肝病毒接觸史。表4中追蹤隨訪的5例，其中1例HBsAg由陰性轉為陽性，其余4例雖在跟蹤期間沒有轉為陽性，但HBeAb和HBcAb均為陽性。據文獻報道，輸注HBsAg陰性的血液后仍有感染的風險[8]。

表3　HBV-DNA陽性標本送衛生部臨檢中心檢測結果

輸血安全面臨的主要風險之一就是被篩查病毒的“窗口期”，HBsAg免疫學檢測窗口期為56d，而核酸HBV-DNA檢測窗口期縮短為36d[9]，在對核酸陽性的獻血者進行追蹤隨訪的5例中，其中有1例在隨訪期間HBsAg ELISA法檢測為陽性，說明該獻血者前面處在ELISA法檢測的“窗口期”，其他4例的隨訪結果都是HBeAg定性陰性，HBeAb定性和HBcAb定性為陽性。一年后的結果顯示，1號、2號和4號獻血者乙肝處于慢性轉歸過程，3號獻血者為慢性乙肝攜帶者，均不適宜再獻血。有研究發現，隱匿性HBV感染與HBV血清轉換前窗口期獻血者是造成HBsAg篩查后輸血傳播感染HBV的主要原因[10]。HBV血清轉換前窗口期獻血者HBsAg會隨著時間推移轉為陽性，而隱匿性HBV感染獻血者的HBsAg一般不會轉換為陽性[11]。

由于ELISA檢測病毒抗原或抗體，其“窗口期”、病毒變異、非典型性血清轉陽過程等因素造成漏檢[12]，這就給輸血安全帶來較大的隱患。為了縮短血液感染病毒的檢測“窗口期”，降低經輸血途徑傳播病毒的風險[13，14]，衛生部要求在2013-2015年全面推進血站核酸檢測工作，到2015年血液篩查核酸檢測基本覆蓋全國[15]，為降低經輸血傳播疾病的風險，提高血液安全，提供了保障。

表4　NAT陽性獻血者追蹤檢測情況表

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(收稿日期2015-10-30；修回日期2015-12-03)

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.01.046

中圖分類號：R193.3，R512.6+2

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)01-0118-03