血清同型半胱氨酸和miR水平與非典型心絞痛病變程度的相關性分析*

裴穎皓　王　俊　鐘　勇　陳秋華　王　醒，#

wangxingicu1964@sina.com

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血清同型半胱氨酸和miR水平與非典型心絞痛病變程度的相關性分析*

裴穎皓1王俊2鐘勇2陳秋華1王醒1，#

wangxingicu1964@sina.com

【摘要】目的：分析非典型心絞痛(NTA)病變程度與血清同型半胱氨酸(HCY)水平和微小RNA(miR)-487、-29b、-215的相關性。方法：選取NTA患者40例，根據冠脈造影結果和Gensini評分，分為輕度病變組(n=24)和中度及以上病變組(n=16)，另選疑似NTA，但冠脈造影排除冠心病(CHD)患者作為對照組(n=30)，檢測各組HCY、miR-487、miR-29b及miR-215水平，分析HCY、miR-487、miR-29b及miR-215與Gensini評分的相關性。結果：NTA組血清HCY、miR-487和miR-215水平均高于對照組，miR-29b水平低于對照組(均P<0.01)。Pearson相關分析顯示，HCY水平變化與NTA病變程度(Gensiniy評分)無顯著相關，rHCY=0.012,P>0.05；miR-487和miR-215水平與Gensini評分呈顯著正相關(rmiR-487=0.449, rmiR-215=0.740，P<0.05)；miR-29b與Gensini評分無顯著相關，rmiR-29b=0.008，P>0.05。同時，血清HCY水平與miR-487水平顯著正相關(r=0.502, P<0.05)，與miR-215、miR-29b未見顯著相關(r=0.010、0.014，P>0.05)。結論：血清HCY和miR水平變化及相互作用可能參與NTA的發病。

【關鍵詞】非典型心絞痛；同型半胱氨酸；微小RNA-487

據統計，冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(Coronary Heart Disease，CHD)已躍居全球首要死亡原因[1]。胸痛是CHD患者最常見的主訴之一，典型心絞痛(Typical Angina，TA)由于疼痛誘因、性質、部位及緩解因素比較典型，有助于CHD高危患者的早期診斷和積極有效診治[2]。但非典型心絞痛(Non-typical Angina，NTA)較為復雜，易誤診為非CHD甚至非心源性胸痛如肺栓塞、膽道疾病及消化性潰瘍等，而且，NTA患者的院前延誤時間約為TA患者的2倍左右，使其及時接受有效治療的可能性降低，死亡率升高[3]。同型半胱氨酸(HCY)是甲硫氨酸代謝過程中產生的一種含硫氨基酸，大量研究證實HCY參與動脈粥樣硬化(AS)的病理過程，是CHD的獨立危險因子[4]；微小RNA(miR)是一類長度為20-25個核苷酸的內源性小分子非編碼單鏈RNA，主要參與基因轉錄后表達調控，近年研究發現， miR-487、miR-29b及miR-215在NTA患者中表達明顯異常，且可能參與CHD的發生發展，是NTA診斷標記物之一[5]。本課題組已于前期報道TA患者miR表達明顯異常[6]，本文報道NTA相關miR和HCY水平變化與NTA病變程度的相關性以及miR與HCY的關系，以豐富NTA臨床研究資料。

1資料與方法

1.1對象和分組

2014-09-2015-01本院收治40例疑診CHD且有NTA臨床表現患者，均經冠脈造影術確診為CHD[符合2007年美國心臟病學會/美國心臟協會(ACC/AHA)關于CHD的診斷標準[7]，并排除：(1) 不能明確持續胸痛始發時間者： (2) 既往有CHD病史，已接受溶栓治療者；(3) 2周內接受外科手術或有組織損傷者；(4)對造影劑、阿司匹林、氯比格雷、肝素、他汀類過敏或不能耐受者；(5) 合并有結締組織病和風濕病者；(6)有心肌炎或心肌病、腱索斷裂者；(7)有惡性種瘤或近2周內任何部位感染病史或慢性炎癥性疾病,設為NTA組。再按Gensini積分將NTA患者分為輕度病變組(n=24)和中度及以上病變組(n=16)。另選30例疑似心絞痛，但冠脈造影證實非CHD患者作為對照組。兩組患者性別、年齡、體重指數、吸煙比例、高血壓、高血脂、糖尿病比例分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　NTA組和對照組一般情況比較

1.2選擇性冠脈造影與Gensini積分方法

冠脈造影評分由3位心血管專業醫師完成，結果取平均值。依據Gensini積分評定冠狀動脈病變嚴重程度，具體為：狹窄≤25%記為1分，26%-50%記為2分，51%-75%記為4分，76%-90%記為8分，91%-99%記為16分，100%記為32分。不同節段冠狀動脈評分系數按Gensini標準[7]，并根據Gensini積分，將NTA患者分為兩組即輕度病變組(≤25分，n=24)和中度及以上病變組(>25分，n=16)。

1.3血清HCY測定和血清miR絕對含量測定方法

于冠脈造影當日清晨空腹狀態下，取靜脈血6ml，1h內快速分離血清，分別用于血清HCY和miR檢測。HCY檢測應用OP-162微量熒光檢測儀(上海珂淮公司)，HCY熒光定量試劑盒購自南京建成生物工程研究所(貨號E031)。

血清miR檢測：利用苯酚法提取總RNA，經逆轉錄-聚合酶鏈反應，使用miR Ta qman試劑和2720型PCR儀、7500型序列檢測系統(均為ABI公司產品)，以miR-let7dgi混合物作為內參，miR-1建立標準曲線，參照Chen等[8]描述的絕對表達量計算方法，計算血清miR的絕對含量。

1.4統計學處理

2結果

2.1不同程度NTA患者血清HCY及miR水平比較

對照組、輕度病變組和中度及以上病變組HCY、miR血清水平差異均有統計學意義(P<0.01)。兩組NTA患者HCY和miR-487、-215血清水平均較對照組明顯升高(P<0.01)，中度及以上病變組顯著高于輕度病變組(P<0.01)。而兩組NTA患者miR-29b血清水平明顯低于對照組(P<0.01)，中度及以上病變組更低(P<0.01)。 見表2。

表2　不同程度冠脈狹窄患者血清HCY及血清miR水平比較±s)

注：與對照組比較，1)P<0.01；與輕度病變組比較，2)P<0.01

2.2相關性分析

Pearson分析顯示，miR-487和miR-215血清水平與NTA患者病變程度(Gensini積分)呈顯著正相關(rmiR-487=0.449, rmiR-215=0.740，P<0.05)；通過偏相關分析排除年齡、體重指數、高血壓和高脂血癥病史后，上述正相關關系仍然成立(r'miR-487=0.495, r'miR-215=0.771，P<0.05)；miR-29b與NTA病變程度無顯著相關(rmiR-29b=0.008,P>0.05)，HCY與NTA病變程度無顯著相關(rHCY=0.012,P>0.05)。同時，血清HCY水平與miR-487水平正相關(r=0.502,P<0.05)，通過偏相關分析排除年齡、體重指數、高血壓和高脂血癥病史后相關系數增高(r'=0.532，P<0.05)，而HCY與miR-29b、-215水平未見顯著相關性(r=0.014、0.010，P>0.05)。

Logistic回歸分析排除了年齡、性別、吸煙、體重指數、miR-29b、miR-215等為NTA病變程度(Gensini評分)的獨立危險因素，只有miR-487和HCY與其獨立相關(P<0.01)，見表3。

表3　Logistic回歸分析

3討論

NTA患者因臨床表現復雜，缺乏典型癥狀，若警惕性不高，極易誤診誤治。本研究連續性納入40例NTA患者，檢測分析其血清HCY水平，相關miR表達及其與患者病變程度(Gensini評分)的關系，進一步豐富臨床診治資料。結果發現，NTA患者血清HCY和miR-487、-215水平較對照組明顯升高，miR-29b較對照組顯著降低(P均<0.01)。相關性分析顯示HCY水平與Genisini評分無顯著相關，miR-487和miR-215水平與Gensini評分呈正相關關系，miR-29b與Gensini評分無顯著相關；同時血清HCY水平與miR-487水平正相關，與miR-215、-29b無相關；進一步logistic回歸分析表明miR-487和HCY為患者病變程度(Gensini評分)的獨立危險因素。

HCY是甲硫氨酸和半胱氨酸的重要中間產物，作為一種含硫氨基酸，已證實對心血管系統存在多功能損害作用。臨床研究報道，老年CHD組HCY明顯升高，頸動脈內膜中層厚度(IMT)明顯增厚，且與CHD嚴重程度呈獨立正相關[9]；動物實驗表明HCY在代謝過程產生的多種強氧化劑可使大鼠血管內皮細胞周期素mRNA和fos癌基因表達增加，誘導內皮細胞凋亡[10]。本研究進一步證實NTA患者，盡管冠脈病變輕微，但HCY水平已經很高，提示HCY對冠脈病變敏感度較高。

miR在生物進化過程中高度保守，廣泛參與轉錄或轉錄后修飾水平負調控基因的表達，并且在循環中性質穩定，不易被降解，被稱為循環miR。近年來，隨著miR研究的深入，越來越多與冠心病相關miR被發現[11，12]。本研究選取3個NTA相關miR-487、miR-29b及miR-215進行檢測，結果發現它們既與NTA患者CHY水平相關，也與冠脈狹窄程度相關，表明HCY與miR可能存在相互調節和相互影響，共同作用于冠脈病變。但目前有關miR對NTA作用機制的研究較少。有研究發現miR-29b參與急性心肌梗死后心肌細胞纖維化的病理變化過程[13]；miR-29家族可以特異性抑制一系列靶蛋白mRNA，包括膠原蛋白、原膠原蛋白和彈性蛋白等，通過抑制miR-29的表達，可以觀察到上述靶蛋白表達的明顯增加。更多miR的作用及其機制尚待深入探討。

綜上所述，HCY和miR-487、-29b及-215共同參與了NTA患者冠狀動脈病變，并與其嚴重程度存在一定相關性，尤其HCY和miR-487是其獨立危險因素。今后的研究應側重它們在冠心病動脈粥樣硬化中的發生機制。

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裴穎皓(1987-)，男，漢族，碩士，住院醫師，研究方向：心血管危重癥

參考文獻

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The Correlation Analysis among the Serum Homocysteine, the Level of miR and the Severity of Non-typical Angina

PEI Ying-hao1，WANG Jun2, ZHONG Yong2, CHEN Qiu-hua1, WANG Xing1，#

1Department of Intensive Care Unit, Jiangsu Province of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210046,China;2Department of Cardiology, Jinling Hospital, Nanjing 210017,China；#Corresponding author

【Abstract】Objective: To evaluate the correlation between Homocysteine(HCY), miR-487, miR-29b and miR-215 in non-typical angina pectoris patients. Method: 40 patients with non-typical angina (NTA) were selected. These cases were divided into mild lesions group (n=24) and moderate and above lesions group (n=16) according to the results of coronary angiography and Gensini score. In addition, patients with suspected NTA but excluded CHD by coronary angiography was included in the control group (n=30). The levels of HCY and miRNAs (miR-487, miR-29b, and miR-215) were measured. The correlation analysis and linear regression were used to analyse the correlation among the HCY, miRNA and Gensini score.Results: Compared with the control group, the levels of serum HCY, miR-487 and miR-215 in NTA group were significantly decreased (P<0.01), and the level of miR-29b in NTA group was significantly increased (P<0.01). Pearson correlation analysis showed that there was no correlation between Gensini score and HCY or miR-29b, and there was a significantly positively correlated between Gensini score and miR-487 or miR-215 (rmiR-487=0.449, rmiR-215=0.740, P<0.05). At the same time, there was a significantly positively correlated between HCY and miR-487 (r=0.502, P<0.05) and there was no correlation between HCY and miR-215 or miR-29b(r=0.010,r=0.014,P>0.05).Conclusion: The mutual manipulation between miR-487 and HCY may contribute to the pathology of non-typical angina.

【Key words】Non-typical angina pectoris； Homocysteine； miR-487

作者簡介：本文第一

[中圖分類號]R543.3

[文獻標識碼]A

[文章編號]1005-1740(2016)01-0034-04

*[基金項目]江蘇省中醫院院級課題(Y14018)

本文2015-09-17收到，2015-12-30修回