秦艽提取物對便秘大鼠血清及結腸組織NO、SOD、MDA、GSH水平的影響

牛明了,甄歡歡,周曉麗

(1河南省中醫院，鄭州450002；2 河南中醫學院第三附屬醫院)

?

秦艽提取物對便秘大鼠血清及結腸組織NO、SOD、MDA、GSH水平的影響

牛明了1,甄歡歡1,周曉麗2

(1河南省中醫院，鄭州450002；2 河南中醫學院第三附屬醫院)

摘要：目的探討秦艽提取物對便秘大鼠血清及結腸組織中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影響。方法選擇SPF級SD大鼠60只，隨機均分為正常組、模型組、陽性組、秦艽高劑量組、秦艽低劑量組。制造大鼠便秘模型。造模成功后正常組、模型組生理鹽水灌胃，陽性組麻仁軟膠囊灌胃，秦艽低劑量組秦艽提取物0.9 g/kg灌胃，秦艽高劑量組秦艽提取物1.8 g/kg灌胃。給藥治療4周后，眼底靜脈叢采血，分離血清備用。3 d后采用活性炭推進法測定腸道傳輸率的變化。脫頸椎處死大鼠，制作結腸組織勻漿，分別按試劑盒方法測定大鼠血清和結腸組織勻漿液中NO、MDA、SOD、GSH水平。結果模型組大鼠血清及結腸中NO、MDA水平與正常組相比上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)；與模型組大鼠相比，秦艽高劑量組、低劑量組結腸組織中NO水平降低，且秦艽低劑量組結腸組織中GSH水平升高(P均<0.05)。結論秦艽提取物可能通過調控便秘大鼠模型的NO、MDA、SOD、GSH表達水平起到治療便秘的作用。

關鍵詞：便秘；秦艽提取物；丙二醛；谷胱甘肽；一氧化氮；超氧化物歧化酶；大鼠

大葉秦艽為龍膽科植物，其主要化學成分為生物堿類、環烯醚萜苷類、甾醇類等，具有抗炎、鎮痛、鎮靜、解熱、保肝等作用，可以祛風濕、止痹痛、退虛熱、清濕熱，主要用于風濕痹痛、筋脈拘攣、骨節酸痛等病癥[1]。目前，便秘的發病機制尚未完全清楚，臨床亦無特效治療藥物。2014年8～12月，我們建立大鼠便秘模型，探討秦艽提取物對便秘大鼠模型血清及結腸組織中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物7周齡SD大鼠60只，SPF級，雌雄各半，購自北京實驗動物中心。飼養條件：雌雄分開飼養，每籠6只，室溫(20±2)℃，相對濕度(60±10)%。所有大鼠自由進食進水。

1.2實驗藥物NO、SOD、MDA、GSH試劑盒均購自由上海榮盛生物制品研究所；鹽酸嗎啡購自東北制藥有限公司；麻仁軟膠囊、粉末活性炭購自天津藥業有限公司。根據參考文獻[2]制備大葉秦艽提取物，制備成每1 mL含秦艽0.5 g，根據實驗動物換算方法，確定大鼠每日灌胃量低劑量為0.9 g/kg，高劑量為1.8 g/kg。

1.3動物分組及處理60只大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性(麻仁軟膠囊)組、秦艽高劑量組、秦艽低劑量組，每組12只，雌雄各半。適應性喂養7 d后，除正常組每天皮下注射3.0 mg/kg蒸餾水外，其余組每天皮下注射鹽酸嗎啡3.0 mg/kg，連續注射40 d，1次/d，制作大鼠便秘模型。造模成功后，正常組、模型組蒸餾水10 mL/kg灌胃，麻仁軟膠囊組麻仁軟膠囊0.6 g/kg灌胃，秦艽低劑量組秦艽提取物0.9 g/kg灌胃，秦艽高劑量組秦艽提取物1.8 g/kg灌胃，給藥體積10 mL/kg，1次/d。

1.4血清NO、MDA、SOD、GSH水平檢測大鼠灌胃4周，禁食不禁水12 h，乙醚麻醉，毛細玻璃管從眼底靜脈叢采血，分離血清，4 ℃保存。根據試劑盒說明書上的方法，對大鼠血清中NO、MDA、SOD、GSH水平進行測定。

1.5腸道傳輸功能測定大鼠灌胃4周，禁食不禁水采血后，適應性飼養3 d(期間大鼠不給藥，正常喂養)。禁食不禁水1 d，使大鼠腸內容物充分排空，給以活性炭末懸浮液10 mL/kg灌胃，制備的懸浮液濃度為100 g/L，30 min后脫頸椎處死動物。立即解剖取出腸道，測量腸道全長及活性炭懸浮液在腸道內的推進長度。

1.6結腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平檢測 處死大鼠后，解剖分離出大腸，生理鹽水沖洗干凈，稱取結腸組織0.3 g，以生理鹽水研磨成10%的勻漿液。離心后提取上清液，-20 ℃保存。根據試劑盒說明書中的方法對大鼠結腸組織勻漿液中NO、MDA、SOD、GSH水平進行測定。

2 結果

2.1各組大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平 大鼠灌胃4周后，每組各有2只死亡。與正常組相比，模型組大鼠血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)，表明大鼠便秘模型造模成功。與模型組相比，秦艽高劑量組NO水平降低，SOD、GSH水平升高(P均<0.05)。秦艽高劑量組、低劑量組比較，血清NO、MDA、SOD、GSH水平無統計學差異(P均>0.05)。見表1。

表1　各組大鼠血清NO、MDA、SOD、

注：與正常組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.05。

2.2各組大鼠腸道傳輸功能變化與正常組相比，模型組腸道傳輸功能減慢(P<0.05)；秦艽高劑量組與模型組相比，腸道傳輸功能加快(P<0.05)。見表2。

表2　各組大鼠腸道傳輸功能的變化±s)

注：與正常組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.05。

2.3各組大鼠結腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平與正常組相比，模型組血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)。與模型組相比，秦艽高劑量組、低劑量組均能降低NO水平，升高GSH谷胱甘肽水平(P均<0.05)。秦艽高劑量組、低劑量組比較，大鼠結腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平無統計學差異(P均>0.05)。見表3。

表3　各組大鼠結腸組織中NO、MDA、SOD、

注：與正常組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.05。

3討論

秦艽具有抗炎、鎮痛、鎮靜、解熱等作用，在臨床上廣泛應用于治療肛腸疾病[3,4]、風濕疾病、心腦血管疾病、神經系統疾病等。胡海華等[3]研究用防風秦艽湯加乳香、沒藥、大黃、桃仁、皂刺、穿山甲，以水煎服治療肛裂，并用其藥渣加水煮開坐浴，配以太寧膏涂抹，連續用藥3 d后，對肛裂Ⅱ度患者有明顯的減輕疼痛作用；楊風利等[4]研究防風秦艽湯對痔瘡患者的影響，發現服用本方后，90%的患者便血癥狀消失，95%的患者癥狀有所改善。

便秘是臨床上以排便次數減少、排便困難、糞便過硬等為主要表現的一種常見慢性消化道癥狀。由于硬糞的長期滯留和刺激，結腸黏膜常有不同程度的炎性改變，從而引發一系列的氧自由基反應和脂質過氧化反應[5]；便秘引起的炎癥反應會產生大量的氧自由基，從而導致細胞膜不飽和脂肪酸脂質過氧化程度的加重[6,7]。

SOD、GSH能有效地清除細胞代謝過程中產生的氧自由基,終止自由基連鎖反應[9]。SOD活性隨著機體的老化而降低，故測定該酶活性可作為檢測機體抗氧化能力和衰老的一個定量指標。機體內另一類具有清除氧自由基抗衰老作用的酶系是GSH，它對防止機體內氧自由基引起脂質過氧化反應特別重要。SOD、GSH等酶系在機體內發揮協同作用，具有減輕和阻斷脂質過氧化反應、保護機體免受各類氧自由基的侵害、延緩衰老等作用，是評價細胞受損與否的重要指標[10]。所以，測定SOD、GSH等酶系是衡量藥物抗氧化作用的重要方法之一。

本實驗便秘模型組大鼠血清與結腸組織中NO、MDA水平高于正常組，SOD、GSH水平低于正常組，表明過氧化反應是便秘產生的重要機制之一。而秦艽高、低劑量組均能不同程度降低血清與結腸組織中NO、MDA水平，增加SOD、GSH水平，說明秦艽提取物能降低便秘模型大鼠的過氧化反應，減輕氧自由基的損害，緩解便秘癥狀。至于秦艽提取物不同劑量對大鼠血清和結腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平影響是否存在差異還需要進一步研究。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2015版[M]．北京：化學工業出版社，2015:253-254.

[2] 白莎，倪健，孔慧，等．秦艽的提取工藝研究[J]．中成藥，2005，27(9)：1074-1075

[3] 胡海華，曹軍.防風秦艽湯在肛腸科的應用[J].四川中醫，2007， 25(7):87-88．

[4] 楊風利，余靜．防風秦艽湯治療內痔出血200例體會[J]．寧夏醫學雜志，2005， 27(10)：716．

[5] 鄭芝田．胃腸病學[M]．北京:人民衛生出版社，1986：475-477．

[6] 方允中，李文杰．自由基與酶-基礎理論及其在生物學和醫學中的應用[M] 北京：科學出版社，1989：213．

[7] 陳瑗，周玫．自由基醫學[M]．北京：人民軍醫出版社，1991：106-296．

[8] Sharara-Chami RI, Zhou Y, Ebert S，et al. Epinephrine deficiency results in intact glucose counter-regulation, severe hepatic steatosis and possible defective autophagy in fasting mice[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2012，44 (6)：905-913.

[9] 董亮，何永志，王遠亮，等,超氧化物歧化酶SOD的應用研究進展[J]．中國農業科技導報，2013,15(5)：53-58

[10] Freeman BA，Crapo JD．Biology of disease:free radicals and tissue injury[J]．Lab Invest，1982，47(5)：412-426．

(收稿日期：2015-09-12)

中圖分類號：R256.35

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)05-0027-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.05.010

基金項目：國家中醫藥管理局全國名老中醫傳承工作室項目(201347)。